为了制备猪流行性腹泻病毒(procine epidemic diarrhea virus,PEDV) S1蛋白的单克隆抗体,本研究首先利用大肠杆菌表达系统和亲和层析法成功获得纯化的重组PEDV S1蛋白,免疫BALB/c小鼠后利用杂交瘤技术和间接ELISA方法制备并筛选阳性的杂交瘤细胞,最后利用体内诱生法制备腹水抗体。ELISA结果显示筛选到抗PEDV S1单克隆抗体的杂交瘤细胞株共有4株,并将其命名为E6、G3、H6、F2。4株杂交瘤细胞上清效价都达到1:6 400,选择抗体效价高、抗体分泌更稳定的单克隆抗体H6进行抗体类型鉴定,发现单抗H6为IgG1亚类,轻链为λ链,诱生小鼠腹水的抗体效价为1:10～6且与其他蛋白无交叉反应;Western blot结果显示单抗与重组S1蛋白PEDV QY2016和PEDV CV777毒株均在38 kDa处出现特异性条带;IFA结果也同时发现单抗与感染PEDV QY2016和PEDV CV777毒株的细胞反应出现绿色荧光信号;单克隆抗体H6的亲和常数为K=1.75×10～7 mol/L,说明H6株具有良好的亲和性,可用于后续诊断抗体的开发。综上,本研究成功制备了能够特异性识别PEDV S1蛋白的单克隆抗体,该抗体可用于PEDV的抗原检测,为PEDV检测方法的研究提供了重要试验材料。

猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)流行性强且分布广泛,对生猪养殖的危害性受到高度关注,有效的防治策略是必要的。本研究探讨氯喹(chloroquine,CQ)对PHEV复制增殖的影响及其作用机制。结果显示,CQ(1～100 mmol/L)呈剂量依赖性抑制PHEV复制和增殖,50 mmol/L CQ显著抑制PHEV感染N2a细胞炎性因子的产生,并抑制PHEV对NF-κB信号通路活化。本研究证实了CQ对PHEV复制增殖的抑制作用,有望应用于PHEV的临床预防及治疗。

旨在建立一种检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的重组酶介导等温核酸扩增(recombinase aided amplification,RAA)技术方法。基于对PEDV基因组的分析,筛选M基因的特异性序列作为检测靶标,设计扩增效率高、特异性好的RAA引物对和探针,通过荧光恒温检测仪实时监控扩增过程,结合免核酸提取技术,实现对PEDV核酸的快速、敏感和特异检测。结果表明,该方法具有较好的敏感性,最低检测限为8.86×10～1拷贝/μL;同时,该检测方法具有良好的特异性和重复性,不与猪传染性胃肠炎病毒、猪冠状病毒、猪圆环病毒等发生交叉反应。在37～41℃的恒温条件下,扩增曲线明显,表明该方法具有良好的温度适应性。本研究成功建立了检测PEDV的荧光RAA技术方法,有望用于PEDV的现场快速检测。

为探究口蹄疫病毒样颗粒(foot-and-mouth virus-like particles,FMDV-VLPs)诱导的小鼠脾脏和淋巴结中滤泡树突状细胞(follicular dendritic cell,FDC)和滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cells,Tfh)的表达及分布,将重组pCMV-HA-HBcAg-VP1-VP4质粒转染CHO-K1细胞制备FMDV-VLPs,并且通过原核表达系统表达并纯化重组FMDV VP1-VP4蛋白。用FMDV-VLPs(VLP组)和重组FMDV VP1～VP4蛋白(VP1～VP4组)经颈背部皮下免疫BALB/c小鼠,同时设置PBS对照组(PBS组)。首次免疫21 d加强免疫,分别在首次免疫后7、28、42、72、102 d取脾脏、肩前淋巴结和颌下淋巴结,制备冰冻切片,利用免疫组织化学染色后观察FDC和Tfh的表达及分布情况。结果显示,VLP组的脾脏和淋巴结中FDC和Tfh的数量从第7～42天有逐渐增多的趋势,第72天开始逐渐减少至未免疫水平。结果表明,FMDV-VLPs可以诱导脾脏和淋巴结中形成生发中心(GC),且GC中FDC与Tfh数量在加强免疫后至少可以持续42 d。本研究为FMDV样颗粒诱导的B细胞免疫记忆应答机制研究提供了细胞学基础。

鸡新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）的受体为唾液酸受体,主要包括Neu5Ac-α-2,3Gal-β-1,4Glc（SAα2,3Gal）和Neu5Ac-2-S-α-2,6Gal10Me （SAα2,6Gal）,两种受体在宿主细胞中的分布及表达丰度的不同对NDV的易感性和胞内增殖等方面具有重要影响。在前期研究的基础上,为了进一步探究唾液酸受体对NDV不同毒株易感性及增殖特性的影响,本研究在成功构建过表达或低表达唾液酸受体BHK-21细胞的基础上,通过对不同细胞接种NDVⅠ系与Lasota株后细胞培养物TCID₅₀的测定,并结合不同细胞唾液酸受体表达丰度的测定,综合分析结果表明,NDV Lasota株更易与SAα2,6 Gal受体结合,而NDVⅠ系更偏好于选择性结合SAα2,3 Gal受体;另一方面,本研究证明了唾液酸受体的表达水平对NDVⅠ系与Lasota株在细胞中的病毒滴度具有重要影响。

为建立一种快速检测羊肠道病毒（CEV）的免疫层析方法,以鼠源抗CEV VP1单克隆抗体作为金标抗体,以兔源抗CEV VP1多克隆抗体和羊抗鼠IgG分别作为检测线和质控线,应用双抗体夹心原理制备CEV胶体金免疫层析试纸条,并对该方法的性能及临床应用等方面进行评估。结果显示,该方法能够特异性的检测出CEV,与牛肠道病毒、牛病毒性腹泻病毒无交叉反应;该方法最低检测限为10^2.49 TCID₅₀/mL,且具有良好的重复性;制备的试纸条于4℃条件下,有效期为3个月;应用该方法与RT-PCR方法检测部分临床样品,两者的符合率为100%。综上所述,本研究建立了检测新发CEV的胶体金免疫层析试纸条方法,组装的试剂条具有良好的特异性与敏感性,且操作简便,为CEV感染的现场快速诊断和流行病学调查提供了新的技术手段。

采集一病牛鼻咽拭子和组织病料,并进行细菌分离纯化、16S rRNA基因扩增、荚膜血清型分型、毒力基因检测和分离株全基因组测序。结果显示,经细菌分离纯化、生化试验及PCR鉴定发现1株A型多杀性巴氏杆菌菌株,命名为“Pm WZ01”株;毒力基因扩增发现Pm WZ01基因组含有tadD、nanH、ompA、exbB、exbD、fur基因;基因组测序获得Pm WZ01株全基因组大小为2 383 021 bp,GC含量为40.28%;含有56个tRNA、19个rRNA;155个假基因,3个基因岛,5个前噬菌体,55个碳水化合物活性酶基因;CARD注释分析发现1个PBP3抗性基因和2个EF-Tu抗性基因;VFDB和PHI-base注释分析发现582个毒力因子相关基因及888个表型突变基因。系统进化树分析发现Pm WZ01菌株与中国长春Pm-3菌株(CP014618.1)、英国P1933菌株(CP132898.1)以及中国湖北HB01菌株(CP006976.1)属于同一分支,进化关系最近。本研究完成了1株A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定以及生物学特性和全基因组测序分析,为牛源A型多杀性巴氏杆菌病的防控研究提供了理论依据。

为研究旋毛虫成虫期特异性蛋白Ts DNaseⅡ-7诱导的miR-142-5p上调对肠道上皮细胞的影响,构建miR-142-5p过表达慢病毒表达载体并注射至小鼠体内,观察小鼠结肠组织病理变化情况。将miR-142-5p基因连接绿色荧光慢病毒载体plenti CMV/TO eGFP Puro,测序无误后命名该重组载体为plenti-miR-142-5p。将重组质粒和包装辅助质粒共转染293T细胞,包装产生miR-142-5p过表达慢病毒载体(LV-miR-142-5p)。收取重组慢病毒悬液,利用超速离心沉淀法浓缩,Real-time PCR测定病毒滴度。将病毒悬液尾静脉注射6～8周龄BALB/c小鼠,解剖取其结肠组织进行HE染色并在显微镜下观察。结果显示miR-142-5p同源重组入plenti载体,测序结果与预期序列一致。plenti-miR-142-5p与包装辅助质粒共转染293T细胞,根据绿色荧光表达情况确认转染成功,Real-time PCR结果显示慢病毒滴度为1.23×10～9 IU/mL。小鼠结肠组织切片显示感染组结肠完整性受损,出现明显炎症反应。证明miR-142-5 p可诱导小鼠肠上皮细胞损伤。

新疆不同动物都携带大肠杆菌O157:H7(E.coli ()157:H7),但是这些菌株之间的联系不清楚。为了解E.coli O157:H7的进化分群、优势遗传谱系的分布、生物膜形成能力、携带可移动遗传元件情况及其耐药谱,对E.coli O157:H7用多重PCR法鉴定系统进化分群,通过多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)方案检测E.coli O157ST型,结晶紫微孔板法测定生物被膜形成能力(BF),Kirby-Bauer法检测耐药情况,PCR法检测耐药、质粒复制子、整合子基因。结果显示新疆46.7%(7/15)的E.coli O157:H7属于A群,53.3%(8/15)属于E群,羊源以A群流行为主(4/6),牛源以E群为主(6/7);共检测出6种ST型,分别为ST11(8/15)、ST-206(1/15)、ST-6126(3/15)、ST-1640(1/15)、ST-178(1/15)、ST-4550(1/15);有2株具有中等成膜能力,2株具有弱成膜能力,10株无成膜能力;均为多重耐药菌株,对林可霉素、苯唑西林、克林霉素、万古霉素、麦迪霉素和头孢噻吩完全耐药,多黏菌素B、氨苄西林、青霉素G、红霉素耐药率为88%～94%,具有高度耐药性;检测到5种耐药基因,分别是acrA(66.66%,10/15)、tolC (73.33%,11/15)、qurS (13.33%,2/15)、floR qurA (6.67%,1/15);4种质粒复制子,分别是IncP(66.66%,10/15)、IncFrepB (86.67%,13/15)、IncFIA (6.67%,1/15)、IncFIB (66.66%,10/15);2种Ⅰ类整合子,分别是ISCR1 (33.33%,5/15)、ISECP1(20%,3/15)。结果显示,新疆地区的E.coli O157:H7以A群和E群流行为主,羊源以A群流行为主,牛源以E群为主,ST型分布较广,其中以ST11型为主,生物膜成膜能力较弱,耐药性强,均为多重耐药菌株,耐药基因以外排泵为主,耐药基因传播元件较多。

为分析承冀北区不同养殖场中致奶/肉犊牛腹泻大肠杆菌致病性、血清型、毒力基因及耐药情况等生物学特征。于2022—2023年采集冀北地区患腹泻病犊牛（0～2月龄）的病料组织样本（粪便、肛拭子及肝脏）120份,其病毒性病原和寄生虫性病原的检测为阴性,采用细菌分离培养、形态观察、生化鉴定及PCR方法对大肠杆菌进行鉴定,采用小鼠毒力试验、玻板凝集试验、PCR法及K-B药敏纸片法分别检测致病性、血清分型、毒力基因及耐药性,并测定优势血清型代表株对小鼠的半数致死量(LD₅₀)。结果显示,分离得到76株大肠杆菌,56株可以引起小鼠不同程度死亡为致病性大肠杆菌,死亡率在均在40%以上;56株致病性大肠杆菌中以O6和O152为主要流行的优势致病血清型,其中肠产毒性大肠杆菌（ETEC） 48株（85.7%）、肠致病性大肠杆菌（EPEC）6株（10.7%）、肠出血性大肠杆菌（EHEC）2株（3.6%）;毒力基因fyuA、irp2、fliC、stx1、stx2、K88、K 99、eaeA和ler检测率在50%以上,其他类型的毒力基因检测率为3.6%～37.0%,对氨苄西林、新霉素、阿莫西林等9种药物耐药率在42.9%以上,对其他药物耐药率为12.5%～32.1%,呈现多重耐药性,且至少耐3类抗菌药物,优势血清型代表株的ETO152株和EPO6株的LD₅₀分别为3.45×10～4和3.12×10～6 CFU/mL。本研究可为冀北地区奶/肉犊牛大肠杆菌病的防控提供参考。

为了快速、准确地检测副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis,MAP),本试验以其特异性基因F57作为检测靶标,设计并筛选了引物和探针,建立了重组酶介导的核酸等温扩增(RAA)荧光检测方法。并应用该方法对116份牛、羊临床样本进行了检测。结果表明,使用引物与探针组合B12F/B2R(0.4μmol/L)和Probe B(0.12μmol/L),可在42℃的恒温条件下反应20 min检测到MAP;该检测方法与羊大肠杆菌、梭菌及牛病毒性腹泻等11种常见牛羊病原体无交叉反应。最低检出限为1.0×10～2拷贝/μL,变异系数为3.77%～5.29%。在临床样本中检测到阳性样本24份,与GBT 27637—2011的符合率为88.89%。综上所述,本研究建立的MAP荧光RAA检测方法具有简单快速、特异性强、灵敏度高、重复性良好且与国家标准符合率高的优点,适用于临床检测和流行病学研究。

为了评估外源蛋白chIFN-γ-chCD154对白来航鸡感染鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)的预防效果,并初步探讨其潜在机制。利用大肠杆菌表达蛋白chIFN-γ、chCD154和chIFN-γ-chCD154,经饮用水口服免疫鸡,连续3 d后,用鼠伤寒沙门菌灌胃感染。在感染第5天,通过Western blot、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和组织病理学等试验结果发现,较chIFN-γ和chCD154预处理,chIFN-γ-chCD154预处理可协同提高感染鸡的存活率,降低感染鸡肝脏和盲肠的细菌载量,减轻感染鸡肝脏和盲肠病理损伤。对其作用机制研究发现,chIFN-γ-chCD154可显著抑制盲肠中Toll样受体-4 (Toll-like receptor 4,TLR-4)和髓细胞分化因子-88 (myeloid differentiation primary response gene 88,MyD88) mRNA水平表达量,进而抑制NF-κB及促炎细胞因子(TNF-α和IL-6)在mRNA水平的表达,维持肠道紧密连接蛋白(zo-1、cla udin-1、occludin)的完整。与单一蛋白预处理相比,chIFN-γ-chCD1 54预处理还可显著上调鼠伤寒沙门菌感染外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中维生素D (vitamin D,VD)通路相关基因(cyp27b1、VD受体vdr、抗菌肽AvBD7和cathelicidin-b1) mRNA水平的表达。菌落计数结果表明,chIFN-γ-chCD154组中沙门菌数量最低。ChIFN-γ-chCD154还可以上调感染鸡盲肠中经黏液真杆菌属、瘤胃球菌属、肠球菌属和粪杆菌属等有益菌的相对丰度,下调葡萄球菌属等有害菌的相对丰度,从而改善肠道菌群失调。综上,chIFN-γ-chCD154可激活鼠伤寒沙门菌感染鸡体内VD-抗菌肽信号通路,抑制TLR-4/MyD88/NF-κB炎症信号通路,显著改善鸡的肠道屏障功能,减少肝脏和盲肠炎性损伤,并改善盲肠微生物菌群结构,促进肠道健康,为将chIFN-γ-chCD154开发为安全、有效的替抗制剂提供理论依据。

旨在筛选特异性强、敏感性高的犬细粒棘球绦虫(Eg)粪抗原诊断标志物。采集羊源细粒棘球绦虫原头蚴人工感染犬,制备犬Eg阴性粪样和阳性粪样。盐析结合亲和层析纯化获得多克隆抗体、阴性粪抗原-多克隆抗体结合物和阳性粪抗原-多克隆抗体结合物,ELISA和Western blot检测3组样品,对3组样品进行LC-MS/MS检测和生物信息学分析,以阳性粪抗原-多克隆抗体结合物为处理组,多克隆抗体和阴性粪抗原-多克隆抗体结合物为对照组筛选处理组独有的唯一肽段。ELISA和Western blot检测显示仅阳性粪抗原-多克隆抗体结合物为阳性。根据LCMS/MS检测和生物信息学分析,共鉴定到171个蛋白,486条肽段;蛋白质定量分析筛选出86个差异蛋白;根据唯一多肽筛选出仅处理组存在唯一肽段蛋白的蛋白质11个,其中3个蛋白质与细粒棘球绦虫相关,分别为Dysferlin、Integrator complex 9和Diagnostic antigen gp50,此3个蛋白质分别为膜相关蛋白、INT复合体组成部分和诊断抗原。本研究初步筛选出3个候选犬Eg粪抗原诊断标志物,对进一步挖掘Eg诊断标准物质、筛选包虫病靶标基因和疫苗研制提供参考。

为了评估弓形虫tR NA硫化修饰酶TgMnmA基因缺失虫株对ICR小鼠的免疫原性和免疫保护效果,本研究构建了RHΔMnmA免疫的小鼠模型,通过腹腔注射10个RHΔMnmA速殖子对小鼠进行免疫,30 d后利用间接ELISA技术检测免疫后小鼠的特异性IgG抗体及其亚型,制备脾淋巴细胞悬液,利用流式细胞术分析脾淋巴细胞亚群,并通过实时荧光定量PCR技术检测各细胞因子mRNA的相对表达水平;对免疫30 d后的小鼠腹腔接种RHΔku80速殖子,5 d后检测小鼠腹水、心脏、肝脏和脑的荷虫量,观察并记录小鼠感染后30 d内的存活情况。结果表明,与对照PBS组相比,RHΔMnmA免疫组产生了更高的IgG和IgG2a抗体水平,细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12和IFN-γ的mRNA相对表达水平都有不同程度的上升,小鼠脾淋巴细胞CD4⁺和CD8a⁺的数量也显著增加;同时,对于RHΔku80虫株的攻击,免疫组能够有效降低小鼠腹水和部分脏器的荷虫量,抑制虫体的体内繁殖,并显著提高小鼠的生存率。本研究结果显示,弓形虫TgMnmA基因缺失虫株能够诱导小鼠产生较强的体液和细胞免疫应答,并且针对RHΔku80虫株的感染提供良好的免疫保护,有成为候选抗弓形虫减毒活疫苗的潜力。

为探究不同失血时间对犬失血性休克（hemorrhagic shock,HS）复苏后肝肾功能、血乳酸（Lac）及氧化应激指标的影响,将10只健康中华田园犬随机分为失血1.5 h复苏组（HSR_A组）和失血3.5 h复苏组（HSR_B组）。于复苏后2、6、24、48及72 h检测肝肾功能、Lac、氧化应激相关指标的变化。结果显示,HSR_B组在复苏后各个时间点的肝功能指标总胆红素（TBIL）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）均高于HSR_A组;2组犬肾功能指标无显著变化;HSR_B组Lac水平在复苏后2、6 h显著高于HSRA组;HSR_B组CAT活性在复苏后2 h显著低于HSR_A组,HSR_B组GSH-px活性在复苏后2、6、24 h显著低于HSR_A组,HSR_B组SOD活性在复苏后24 h显著低于HSR_A组,HSR_B组MDA含量在复苏后2、6、24、48 h显著高于HSR_A组。结果表明,HS复苏后可引起肝损伤及氧化应激反应,且随着失血时间延长,犬的肝损伤及氧化应激损伤程度加重。

围产期奶牛血糖降低会影响外周血中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophil,PMN)能量的供应和免疫功能的发挥。成纤维细胞生长因子21 (fibroblast growth factor 21,FGF21)是一种重要的糖代谢调节剂,一些围产期奶牛血清FGF21水平在分娩后显著升高。为探究FGF21对围产期奶牛PMN葡萄糖稳态的作用,将产后3周内的奶牛分为高FGF21组(high FGF21,n=8,FGF21> 800 ng/L)和低FGF21组(low FGF21,n=8,FGF21 <200 ng/L),分离外周血PMN后通过流式细胞术、qRT-PCR和Western blot等方法检测葡萄糖摄取和代谢相关指标。结果显示,与低FGF21组相比,高FGF21组PMN的葡萄糖摄取以及葡萄糖转运蛋白SLC2A1、SLC2A3的mRNA表达显著升高。高FGF21组PMN中磷酸果糖激酶1(PFK1)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)的活力显著升高,糖原合成酶(GCS)的活力显著降低。高FGF21组PMN的乳酸含量和ATP含量显著升高,己糖激酶(HK2)、PFK1的mRNA和蛋白表达显著升高。结果表明,围产期外周血FGF21升高的奶牛PMN对葡萄糖的摄取、利用升高,保障了PMN的ATP供应,为缓解围产期奶牛免疫抑制新策略的提出提供了理论基础。

酮病是围产期奶牛常见的能量代谢紊乱疾病,主要病理因素为能量负平衡（NEB）所致的高非酯化脂肪酸（NEFA）血症。由于肝脏无法完全氧化过量的NEFA,导致其不完全氧化生成大量酮体或重新酯化沉积于肝脏,最终引发酮病和脂肪肝。在各种肝病病程中,肝脏微环境缺氧现象普遍存在。缺氧诱导因子-2α（HIF-2α）在脂代谢调控中发挥着关键作用。然而,HIF-2 α与奶牛酮病中肝脂代谢紊乱的关系尚不明确。本研究旨在利用奶牛肝脏组织和体外分离的原代奶牛肝细胞,探究高浓度NEFA对肝细胞氧稳态和HIF-2α表达的影响。在体内,通过测量奶牛肝脏组织中甘油三酯（TAG）含量明确肝脏脂蓄积程度,通过免疫组化染色、Western blot和qRT-PCR检测肝脏HIF-2α的蛋白表达水平和基因转录水平;在体外试验中,向原代奶牛肝细胞添加不同浓度的NEFA,通过油红染色和TAG含量检测测定脂肪变性程度,并利用免疫荧光染色、Western blot和qRT-PCR检测HIF-2α的表达水平,同时使用[Ru（dpp）₃]Cl₂缺氧探针检测细胞内氧水平。研究结果显示,酮病奶牛肝脏中TAG含量显著增加、HIF-2α蛋白和mRNA表达水平显著上调,高浓度NEFA诱导原代奶牛肝细胞中脂质蓄积和HIF-2α表达水平显著上调,且伴随细胞内缺氧现象。该研究表明,HIF-2α在酮病奶牛肝脏和高浓度NEFA诱导的原代奶牛肝细胞中均显著“激活”,并揭示高浓度NEFA可诱导肝细胞缺氧,为进一步研究酮病奶牛肝脂代谢紊乱的分子机制提供了潜在靶点。

载脂蛋白D(apolipoprotein D,APOD)广泛存在于动物各组织,参与机体的生殖调控。为探究APOD在双峰驼附睾中的表达规律及其对精子成熟的调控作用,本试验以发情期及乏情期双峰驼附睾为材料,首先克隆APOD的编码序列(CDS)区全序列,利用ProParam、SOPMA、SWISS-MODEL和MEGA7.0等软件分析其理化特性,同时采用qRT-PCR、蛋白免疫印迹(Western blot)及免疫组织化学法(IHC)检测APOD在附睾中的表达及分布规律。克隆结果显示,APOD基因的CDS区长度为624 bp,编码207个氨基酸,双峰驼APOD序列与羊驼的核苷酸和氨基酸序列存在高度保守性,同源性近,与麋鹿的同源性最低。qRT-PCR结果显示,乏情期附睾头、体及尾APOD的mRNA水平显著高于发情期(P<0.01);Western blot结果显示,乏情期附睾头及附睾体的APOD蛋白表达与mRNA表达趋势相似,但乏情期附睾尾APOD的表达水平与mRNA表达水平相反(P<0.05)。H&E及IHC结果显示,发情期和乏情期附睾组织有明显差异,且APOD在附睾上皮细胞、平滑肌细胞、精子及结缔组织均有不同程度的阳性反应。结果提示APOD可能参与发情期及乏情期精子的成熟过程,为进一步探究APOD参与季节性发情的调控机制提供依据。

为明确2022年我国79家规模化牧场奶牛乳房炎的发病和防治现状,减少奶牛乳房炎疾病的发生,旨在为制定适合中国国情的规模化牧场奶牛乳房炎的防治策略提供科学依据。研究团队依托国家奶牛产业技术体系综合试验站的规模化牧场开展调研,最终共收到调查问卷79份,收集规模化牧场存栏量、牛群比例、奶牛单产水平、奶牛乳房炎发病率及治愈率、奶牛乳房炎的防控、诊断、治疗方案奶牛乳房炎治疗成本以及牧场淘汰率等。采用描述性统计交叉表对奶牛乳房炎发病率与奶牛乳房炎防控方案、治疗方案、奶牛单产水平、淘汰率进行卡方检验和相关分析。部分牧场奶牛乳房炎的发病率控制在5%～10%之间,而治愈率大部分高达98%以上。根据队列分析显示奶牛乳房炎的防控措施重要程度依次是:DMT>DHI>奶量>乳汁性状>乳房表观变化>电导率>CMT。奶牛乳房炎的治疗措施重要程度依次是:中药>病原检测药敏试验>非甾体类抗炎药>定期维护挤奶设备>正常挤奶不治疗>广谱抗生素。奶牛乳房炎发病率与单产呈中等正关联,即奶牛乳房炎发病率升高对奶牛的单产水平有一定影响。经济分析显示,乳房炎的治疗成本与发病率密切相关,发病率较高的牧场治疗成本更高。单产水平较高的牧场通常具有更高效的疾病防控手段,相应的治疗成本更低。我国规模化牧场应加强科学饲养管理水平,提高防治手段以减少奶牛乳房炎的发病率,提高治愈率,降低牧场治疗成本。

基于系统网络药理学和体内试验验证,探讨参苓白术散(SBP/SLBZS)治疗溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的分子机制。利用系统网络药理学方法预测SBP治疗UC的核心靶点和关键通路,并采用葡聚糖硫酸钠(DSS)[3.5%(w/v)]建立BALB/c小鼠UC模型,同时给予SBP口服治疗进行体内试验验证。网络药理学结果分析显示,SBP有153个与UC相关的活性化合物,筛选得到68个相关疾病靶点。通过网络拓扑分析筛选获得5个核心成分:刺槐苷、木樨草素、山柰酚、槲皮素、玉兰脂素B。基于PPI网络和通路富集分析显示,SBP可能通过调节IL-6、TNF、IL-1β、PTGS2、TP53、STAT3、CASP3、IL-10、CXCL8、IL-2、PPARG、PTPRC、IFNG、MTOR、MMP9靶点影响Th17细胞分化、TNF信号通路、癌症通路、IL-17信号通路、NF-Kappa B信号通路等发挥抗炎、免疫调节,参与细胞凋亡进程等作用。体内动物试验结果显示,SBP能显著改善UC小鼠临床症状及结肠病理变化,调节血常规指标的异常变化,并提高血清炎症因子IL-4和IL-10,降低IL-6、IL-2、IL-1β和TNF-α含量。结果表明SBP可通过TNF信号通路、NF-Kappa B信号通路起到治疗溃疡性结肠炎的作用。

基于数据挖掘和网络药理学方法,分析探讨治疗脓毒症的中药复方用药规律以及核心药物的分子作用机制。首先通过搜索PubMed数据库、Web of Science数据库和中国知网(CNKI)自建库至2024年4月30日的中医药治疗脓毒症的相关文献。再对处方进行药物频次、关联分析的统计分析,得到核心药物。然后通过TCMSP等数据库平台筛选核心药物有效活性成分,在GeneCards等数据库中获得脓毒症相关基因,并统计出交集靶点,将交集靶点进行PPI分析、GO功能和KEGG通路富集分析预测核心中药的作用机制。最后,通过分子对接法反向检验关键靶点和中药成分的关系。结果显示,筛选得到64首复方,共150味中药,这些中药多味甘,性寒,归脾经、胃经和肠经,根据关联规则筛选出核心药物为“芒硝-桃仁-大黄”。核心药物与脓毒症的交集靶点79个,核心靶点为IL-1β、EGFR和SRC等。涉及MAPK、TNF和IL-17等信号通路,介导炎症反应、细胞凋亡等生物过程,发挥对脓毒症的治疗作用。分子对接结果表示,关键靶点与药物主要成分的对接活性较好,其中番泻苷E与SRC具有最低的结合能,对接活性最好。综上,本研究结果表明中医药治疗脓毒症处方用药多以补脾、清热为主,核心药“芒硝-桃仁-大黄”治疗脓毒症作用机制是多层次、多角度的,为中药治疗脓毒症提供了一定的理论依据。

为探究枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的蛋雏鸡炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)肠道损伤的保护作用。首先采用网络药理学方法获得枸杞子防治IBD的靶点蛋白信息,并对其进行蛋白互作关系分析、GO和KEGG富集分析及分子对接。然后进行动物试验:将100只1日龄雄性海兰褐蛋鸡随机分为5组,即空白对照组(CON)、LPS处理组(LPS)组、LBP低剂量组(LPS+LBP 0.25 g/L,L-LBP)、LBP中剂量组(LPS+LBP 0.5 g/L,M-LBP)和LBP高剂量组(LPS+LBP 1 g/L,H-LBP)。饲养至21日龄采集十二指肠、空肠、回肠、盲肠,测定肠组织中SOD和GSH-Px水平,实时荧光定量PCR对肠组织中TNF-α、AKT1、IL-6、IL-1β、TP53的mRNA表达进行检测。结果表明:网络药理学结果显示枸杞子活性成分共筛选到166个,其作用于TNF、AKT1、IL-6等116个关键蛋白靶点,主要富集AGE-RAGE、IL-17、TNF、HIF-1、NF-κB等信号通路。分子对接发现配体受体对接分数良好,并通过氢键、疏水作用力稳定结合。与LPS组相比,0.5 g/L LBP试验组SOD和GSH-Px水平显著升高。与LPS组相比,中、高剂量LBP试验组TNF-α、AKT1、IL-6、IL-1β mRNA表达显著降低,TP53 mRNA表达显著升高(P<0.01)。综上所述,枸杞子可通过多成分、多靶点、多通路机制预防雏鸡IBD。

基于网络药理学,通过分子对接以及验证试验探究杨树花对肠炎的有效分子及潜在作用机制。将24只SPF雄性KM小鼠随机分为4组,分别为空白组(CON)、模型组(LPS)、杨树花高浓度组(YSH-H)(灌胃含1.0 g/mL杨树花原生药的药物溶液)和杨树花低浓度组(YSH-L)(灌胃含0.5 g/mL杨树花原生药的药物溶液),试验周期17 d。试验期间记录小鼠体质量,在腹腔注射LPS 1 h后进行粪便评分。试验结束后,检查空肠组织病理学变化,检测紧密连接蛋白相关基因的表达情况。利用现有文献分析杨树花的活性成分然后通过中药系统药理学分析平台数据库筛选有关数据;在TCMSP数据库中结合uniprot预测其活性成分作用靶点和uniprot ID;在OMIM(即:Online Mendelian Inheritance in Man)数据库、TTD数据库和GeneCards数据库检索肠炎(enteritis)并获取相关靶点;通过Venny工具确定杨树花活性成分靶点与疾病靶点的交集;进一步绘建“药物—成分—靶点”网络和PPI网络并进行GO功能,KEGG通路富集分析;最后对分子对接结果进行验证,检测细胞炎症因子以及相关通路基因的表达情况。与CON组相比,LPS组小鼠的空肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度(V/C)极显著降低(P<0.01),隐窝深度极显著增加(P<0.01),ZO-1以及Claudin-1的mRNA相对表达量均极显著降低(P<0.01)。而与LPS组相比,YSH-H组小鼠隐窝深度显著降低(P<0.05),绒毛高度显著增加(P<0.05),V/C值极显著增加(P<0.01);YSH-L组小鼠V/C值显著升高(P<0.05),隐窝深度呈降低趋势、绒毛高度呈升高趋势,且YSH-H组ZO-1的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),Claudin-1的mRNA相对表达量呈升高趋势。木犀草素(luteolin)、槲皮素(quercetin)、山奈酚(kaempferol)、圣草素(eriodictyol)与前5位潜在关键靶点TP53、IL-1β、TNF、AKT1与IL-10分子对接对接分数均小于-20.95 kJ/mol,结合活性较强。GO及KEGG富集分析表明杨树花活性成分可能通过TNF信号通路、IL-17信号通路以及PI3K-Akt信号通路等对肠炎发挥作用。qPCR结果显示,TLR4与AKT1的mRNA相对表达量呈现上升趋势,Caspase-1与ASC的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),NF-κB与NLRP3的mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01)。而与LPS组相比,AKT1、TLR4、NLRP3、ASC、Caspase-1以及NF-κB mRNA表达均有所下降,且Caspase-1和NF-κB差异显著(P<0.05)。本研究表明杨树花通过多成分多途径发挥抗肠炎作用,其中阻断TLR4-AKT-NF-κB通路可能是其发挥治疗肠炎的关键途径。

为探究附子理中口服液对雏鸡免疫功能和肠道健康的影响,将185只1日龄健康雏鸡随机平均分成4组。空白对照组(CG组)给予正常自来水;附子理中口服液高、中、低剂量组(FZH组、FZM组、FZL组)分别给予含5.00、2.50和1.25 g/L附子理中口服液的自来水。从1日龄开始,连续给药5 d,于试验第6天翅下静脉采血并称质量采样。结果:与CG组相比,FZH组胸腺指数显著提高(P<0.05)。与CG组相比,FZH组血清中IgM、IgG和sIgA显著提高(P<0.05),FZM组血清中IgG、sIgA显著提高(P<0.05)。与CG组相比,FZH组Occludin和Claudin-1 mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),FZM和FZH组ZO-1 mRNA相对表达量显著升高(P<0.05)。与CG组相比,FZH组Shannon指数显著升高(P<0.05),FZH组Simpson指数显著降低(P<0.05),扭链瘤胃球菌属、真杆菌属和乳酸杆菌属等多种有益菌协同发挥作用。结果表明,饮水中添加5.00 g/L附子理中口服液能提高雏鸡免疫力,维护雏鸡肠道屏障功能,增加肠道菌群丰富度从而促进雏鸡肠道健康。

研究甩舌行为（tongue rolling,TR）牛的血液生化变化及其与口腔菌群变化的相关性,为进一步探索动物口腔菌群、生化以及行为变化之间的关系奠定基础,通过调控口腔菌群防治TR提供理论依据。拟对具有TR牛与无TR临床症状的健康牛（healthy control,H）的血液生化指标和口腔菌群变化进行分析比较,以期探讨TR牛的血液生化及其与口腔菌群变化的相关性。采集各组牛尾静脉血样品用于检测血液生化指标及应激相关激素指标。采集各组牛口腔拭子进行16S rRNA基因测序,分析其口腔菌群组成结构和功能变化。H组和TR组牛的血液生化指标检测结果显示,TR组牛白蛋白（ALB）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、钙离子(Ca²⁺)和皮质醇（Cortisol）浓度显著高于H组牛（P<0.05）。TR与H组牛口腔菌群Beta多样性具有显著性差异（P<0.05）。在属水平上,TR组牛口腔菌群中假单胞菌属（Pseudomonas）、肠杆菌属（Enterobacter）、黄单胞菌属（Xanthomonas）等菌属的相对丰度显著高于H组牛（P<0.05）。然而,TR组牛口腔菌群中四合球菌属（Tessaracoccus）、苏黎世杆菌属（Turicibacter）、单球菌属（Monoglobus）、迪茨氏菌属（Dietzia）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）等菌属的相对丰度显著低于H组牛（P<0.05）。在KEGG新陈代谢功能三级通路中,TR组牛口腔菌群的硫胺素代谢通路、硫辛酸代谢通路、半胱胺和蛋氨酸代谢通路相对丰度显著低于H组牛（P<0.05）。斯皮尔曼相关性表明,白蛋白浓度（ALB）、AST与假单胞菌属（Pseudomonas）、寡养单胞菌属（Stenotrophomonas）等菌属相对丰度呈显著正相关。假单胞菌属（Pseudomonas）、寡养单胞菌属（Stenotrophomonas）和鞘氨醇单胞菌属（Sphingomonas）等菌属相对丰度与脂肪酸代谢通路、磷酸和磷酸盐代谢通路以及硫辛酸代谢通路相对丰度呈显著正相关。白蛋白（ALB）与肌醇磷酸代谢、磷酸和磷酸盐代谢通路呈显著正相关。研究发现,TR组与H组牛的血液生化指标和口腔菌群存在显著性差异。此外,口腔菌群的组成结构、菌群功能与宿主的生化功能之间存在一定的相关性。这表明TR可能与宿主的生化指标变化以及口腔菌群的组成结构和功能变化相关联。

旨在探究日粮中添加橙皮苷与柚皮苷抗兔动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)效果。选成年健康雄性新西兰大白兔24只,按单因素随机分为四组:对照组(Con)、模型组(Mod)、橙皮苷(HP)和柚皮苷(NG)组,每组6只,独笼饲养。试验期间,对照组给予普通饲料;模型组高脂饲喂3 0 d建立AS模型,继续饲喂高脂饲料;H P组与NG组高脂饲喂30 d后行AS造模术,后期分别按每公斤日粮添加150 mg HP(或NG),连续30 d。测定体质量、血脂四项,氧化及炎症因子水平。试验期满,处死试验兔取颈总动脉进行组织病理切片HE染色、油红()染色及天狼星红染色,观察血管组织结构、脂质和炎性细胞浸润情况、弹力板及弹力纤维受损情况等。结果表明:模型组、HP组和NG组体质量上升迅速,同期内与对照组差异极显著(P<0.01);HP和NG干预能显著降低TC、TC和LDL-C水平(P<0.01),使HDL-C明显回升(P<0.01);HP和NG干预后MDA水平明显下降(P<0.01),SOD水平显著升高(P<0.01);HP与NG干预后,TNF-α、IL-1回调(P<0.01),IL-10明显升高(P<0.01);与对照组相比,模型组最大内中膜分别增厚约41.8和2.5倍,HP和NG干预后,最大内膜增厚约13和15倍,最大中膜均增厚约1.4倍;病理切片染色可见,HP与NG干预显著减少炎性细胞浸润、脂质成分沉积,内膜轻微增厚、纤维细胞成分完整。结果表明:日粮中添加HP与NG均能调节血脂,且通过抑制炎症因子与氧化因子的表达发挥抗炎及抗氧化作用,表现出明显抗AS效果,两者效果相当。

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起猪的一种以发热、出血和高度致死为特征的烈性传染病,对全球养猪业危害严重。目前防控ASF还没有有效的疫苗,包括基因缺失减毒活疫苗、活载体疫苗和亚单位疫苗在内的各类ASF疫苗仍处于实验室研发阶段。活载体疫苗作为最有发展前景的疫苗之一,不仅安全性高,而且模拟病原体的自然感染过程,能有效激发固有免疫应答和获得性免疫应答反应,已成为当前ASF新型疫苗研发的热点之一。本文就有关以病毒为载体用于ASF活载体疫苗的研究进展进行探讨,旨在为未来研发安全有效的ASF载体疫苗提供有价值的参考。

在疫苗接种中,传统疫苗通过肌肉或皮下接种,主要诱导机体的体液免疫,对机体黏膜免疫诱导能力较弱,对呼吸道和胃肠道病毒保护能力不足。当前研究发现,通过口服或鼻腔给药等途径免疫疫苗可有效诱导机体黏膜免疫,但缺乏有效黏膜佐剂,亟需安全有效的新型黏膜佐剂研发。随着纳米佐剂研究的推进,新型纳米颗粒因其良好的黏膜黏附性、高效的抗原负载能力、生物相容性以及在免疫增强、纳米尺寸效应、组织靶向和抗原缓释等方面的优势,引起了广泛关注,有望作为新型黏膜佐剂用于动物疾病防制。迄今为止,针对聚合物纳米颗粒、无机纳米颗粒、脂质体等黏膜佐剂的研究取得了重大进展。本文综述了国内外纳米黏膜佐剂在动物疫苗方面的应用及其作用机制,并分析影响纳米颗粒佐剂免疫增强效果的理化因素,以期为新型黏膜佐剂的研发提供参考。

Toll样受体7/8(Toll like-receptor 7/8,TLR7/8)是TLRs家族的成员,主要参与单链RNA的识别、激活宿主的免疫应答,TLR7/8调节剂与抗病毒、抗肿瘤、抑制自身免疫病等多种疾病的治疗有关,TLR7/8配体的开发和应用依然受到广泛关注。目前报道的配体母核结构包括嘌呤、嘧啶、喋呤、咪唑并喹啉、噻唑并喹啉和喹唑啉等,本文主要围绕咪唑并[4,5-c]喹啉、8-氧代腺嘌呤、吡啶并[2,3-c]嘧啶以及吲唑等几种配体,对其构效关系进行讨论,以期为后续TLR7/8激动剂或抑制剂的筛选、设计或结构修饰提供信息,为动物免疫抑制病的预防或治疗提供新的策略。