为制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)纤突蛋白(S)抗原表位的纳米抗体，并验证其反应活性。本研究采用人工合成PEDV S蛋白抗原表位区域SN,通过原核表达系统构建表达载体pCZN1-SN,对SN片段进行原核表达，经Ni-NTA层析柱进行纯化，利用噬菌体展示技术从天然纳米抗体文库中靶向筛选SN纳米抗体，经过3轮亲和筛选，获得阳性克隆并测序，选取反应活性最强的1株克隆进行原核表达，经Western blot鉴定其反应活性。结果显示，通过原核诱导表达得到SN片段，大小为26 kDa,利用噬菌体展示技术经过3轮淘筛获得特异性纳米抗体，从中选择反应活性最好的1株进行原核表达纯化，获得大小为14 kDa的纳米抗体，Western blot验证该纳米抗体与PEDV SN具有良好结合能力。结果表明，本试验基于噬菌体展示技术，成功筛选并制备了PEDV S蛋白抗原表位片段的纳米抗体，为纳米抗体的深入应用提供了新的途径。