产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是一种常见的革兰阳性厌氧条件致病菌，在自然界中广泛存在，可引起腹泻、气性坏疽等疾病。临床上采用抗生素治疗产气荚膜梭菌感染，但细菌会通过突变、耐药质粒传播等方式产生耐药性，使产气荚膜梭菌在抗生素的环境压力下得以存活。因此寻找和开发新制剂来替代抗生素或作为饲料添加剂以定向清除机体携带的产气荚膜梭菌或预防感染是十分重要的。本研究从污水中分离得到了一株产气荚膜梭菌烈性噬菌体vB＿CPP＿AT。利用透射电镜观察噬菌体形态，通过裂解谱、MOI、酸碱及温度耐受性等分析该产气荚膜梭菌噬菌体基本生物学特性。研究发现vB＿CPP＿AT噬菌体为短尾噬菌体，在60 min时呈暴发式增长，最佳MOI为0.1,专一性裂解产气荚膜梭菌，裂解率为40%(8/20),与参试的其他细菌不发生裂解反应，具有良好的热稳定及酸碱耐受性。vB＿CPP＿AT噬菌体基因组为双链DNA,全长16 790 bp,具有20个开放阅读框。基因组分析vB＿CPP＿AT噬菌体为1株新的产气荚膜梭菌烈性噬菌体。该结果为噬菌体vB＿CPP＿AT应用于产气荚膜梭菌的临床治疗奠定了基础。

猪氨肽酶N（porcine aminopeptidase N,pAPN）是一种锌金属蛋白酶，介导病毒与宿主细胞融合，是冠状病毒的细胞受体之一。为探究pAPN对猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）复制的影响，本研究从小肠组织中扩增出pAPN基因全长，通过限制性内切酶同源位点克隆到慢病毒载体中，获得携带pAPN基因的慢病毒载体PLVX-pAPN-mCMV-ZsGreen1-puro,在293T细胞中包装形成表达pAPN的慢病毒，将慢病毒感染Vero细胞，用嘌呤霉素加压筛选阳性细胞，采用有限稀释法筛选出稳定表达的Vero-pAPN细胞系，并通过测定N基因mRNA转录水平、N蛋白表达水平和TCID₅₀水平差异情况来验证该细胞系对PEDV复制的影响。结果显示，本研究构建的慢病毒能够感染Vero细胞，亚克隆筛选到的单克隆细胞株Vero-pAPN（2C5）能够稳定过表达pAPN;该细胞系能够促进PEDV复制，在12～48 h内N基因mRNA转录水平差异显著（P<0.05）、N蛋白表达水平均提高，TCID₅₀在24和48 h差异显著（P<0.05）。本研究构建了Vero-pAPN细胞系，pAPN在Vero细胞中过表达能够促进PEDV复制，该细胞系可作为疫苗高效生产和临床样本分离的候选细胞系。

运用生物信息技术分析FliC_EcN的结构和潜在的抗原表位；借助ClonExpress^?同源重组技术设计引物，缺失FliC_EcN高变区不同结构域，并克隆至pET-28a（+）表达载体中表达，经SDS-PAGE和Western blot鉴定鞭毛蛋白变体；采用鲎试剂显色法检测鞭毛蛋白变体中内毒素残留，并使用不同质量浓度的鞭毛蛋白变体刺激Caco-2细胞，通过检测IL-8的分泌水平来评估各鞭毛蛋白变体的生物学活性。生物信息分析结果显示，FliC_EcN高变区的多数结构域被预测为含有潜在的抗原表位；PCR结果显示，fliC_{△820～1 518}、fliC_△736～963、fliC_{△985～1 200}、fliC_△748～828、fliC_{△1 114～1 191}和fliC_{△1 225～1 311}分别约为1 095、1 566、1 578、1 713、1 716、1 707 bp; SDS-PAGE结果显示，经镍柱纯化处理和透析复性的鞭毛蛋白变体分别约为41.36、57.06、57.50、61.97、61.95、61.56 kDa; Western blot结果显示，6个鞭毛蛋白变体均能与抗His单克隆抗体和大肠杆菌H7抗原诊断血清发生特异性反应；TLR5活性检测结果显示，缺失不同结构域的鞭毛蛋白变体保留了其TLR5激动剂功能。结果表明，本试验成功构建了6种FliC_EcN缺失高变区不同结构域的鞭毛蛋白变体，且各鞭毛蛋白变体均保留了其TLR5激动剂功能，展现了良好的生物学特性，为进一步研究鞭毛蛋白在缺失不同结构域后的佐剂效应以及鞭毛蛋白抗体滴度对其佐剂效应影响提供了参考依据。

为了鉴别临床上以繁殖障碍及流产为特征的病毒性疫病，本研究建立了同时检测猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）、猪圆环病毒2型（PCV2）和非洲猪瘟病毒（ASFV）的四重qPCR方法，根据NCBI基因库中4种病毒保守基因设计4对特异性引物和探针，对反应的退火温度、引物浓度和探针浓度进行优化，并检验该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示：该方法不能检测到除目的病原以外的其他病原；对PRV、PPV、PCV2和ASFV 4种病原的最低检测限均为10拷贝；组内和组间重复性试验显示不同批次试验间C_t值变异系数均小于3%,说明该方法具有高度特异性、敏感性和稳定性。以上试验结果证明，本研究建立了高效灵敏的四重qPCR方法，为临床上猪伪狂犬病毒病、猪圆环病毒病、猪细小病毒病和非洲猪瘟的防控提供技术参考。

禽传染性支气管炎(infectious bronchitis, IB)是由禽传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)引起鸡的一种急性、高度接触性传染病，IBV变异程度高，现有的免疫手段常无法达到良好的效果，严重影响国内养禽业的发展。通过对IBV的非特异性免疫、黏膜免疫以及特异性免疫等3个方面现阶段免疫应答分子机制的综述，以期为IBV免疫机制的研究提供理论参考。

为制备针对猫TNF-α的具有阻断活性的单克隆抗体，本研究基于可溶性猫TNF-α(sTNFα)基因成功构建、表达及纯化了重组质粒pET-28a-sTNFα,并进一步对重组蛋白诱导表达的条件进行摸索和优化，鉴定其生物活性；其次将猫TNF-α重组蛋白作为免疫原进行小鼠免疫、细胞融合、阻断活性杂交瘤细胞的筛选和腹水制备，并对获得的单克隆抗体进行鉴定。结果显示，成功构建了pET-28a-sTNFα质粒并通过大肠杆菌系统表达出具有生物活性的猫TNF-α重组蛋白，相对分子质量为34 kDa,半数细胞活性抑制质量浓度为1.22μg/L;成功筛选出3株具有阻断活性的单克隆抗体(A6-B7-9、H5-E2-94和C8-A10-100),Western blot检测显示3株单抗均能与TNF-α特异性结合，效价可达1∶512 000,3株单抗在质量浓度为100 mg/L时，对TNF-α的拮抗效果最强。本研究筛选了猫TNF-α的阻断活性抗体，以期为由猫TNF-α介导的相关疾病的防治提供新型的安全的有效的候选药物。

为了研究3羟基3甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)对脂肪肝奶牛肝脏胆汁酸(BAs)及脂质代谢机制，本研究通过分离原代犊牛肝细胞并利用高浓度非酯化脂肪酸(NEFA)处理体外构建肝脂蓄积模型，然后加入HMGCR过表达腺病毒(Ad-HMGCR)及过表达腺病毒对照(Ad-GFP)。利用试剂盒检测了肝细胞甘油三酯(TAG),脂滴荧光检测脂滴变化，及实时荧光定量PCR检测BAs合成和脂肪酸合成及氧化因子变化。结果显示，与Ad-GFP+NEFA组相比，Ad-HMGCR+NEFA组的TAG含量及脂滴荧光显著减少。实时荧光定量PCR结果显示，Ad-HMGCR+NEFA组肝细胞BAs合成因子CYP7A1、CYP8B1、CYP7B1和CYP27A1,BAs转运因子ABCC2和ABCB11及脂肪酸合成因子ACC1、FAS和SREBP1C显著低于Ad-GFP+NEFA组；Ad-HMGCR+NEFA组调控肝细胞BAs合成因子FXR及脂氧化因子CPT1A的水平高于Ad-GFP+NEFA组。结果表明，HMGCR过表达可显著减轻脂肪肝奶牛肝脏BAs和脂滴蓄积。

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)感染家猪和野猪而引起的一种烈性传染病。ASFV在欧洲暴发流行过程中，已演化出无红细胞吸附特性的弱毒株。2018年，基因Ⅱ型ASFV强毒株传入我国后，相继出现了基因Ⅱ型弱毒株、基因Ⅰ型弱毒株以及基因Ⅰ型和Ⅱ型重组的ASFV强毒株。这表明ASFV在流行过程中出现了复杂、多样的遗传演化，给疫苗研发和疫病的监测带来了严峻的挑战。本文首先对ASFV在我国和全球流行的新特点进行了总结；重点分析了ASFV在流行过程中的遗传变异和致病性的改变；在此基础上，探讨了ASFV遗传变异对病毒免疫逃逸和致病性的影响，以及对疫苗研发、疫病检测和监测带来的挑战；旨在加深对ASFV遗传演化规律与变异机制的认知，从而为疫苗和诊断技术研究提供理论依据。

程序性细胞死亡在机体的生长发育及组织器官的稳态中发挥着重要作用。坏死性凋亡作为一种新型的程序性细胞死亡模式，具有坏死的形态学特征，能够导致细胞崩裂并释放大量损伤相关分子模式，在多种疾病的发生和发展中起着重要作用。病毒性感染疾病严重危害人类和家畜的健康，已有研究证实在病毒性感染中存在坏死性凋亡的细胞死亡途径。本文通过综述坏死性凋亡在病毒性感染中的研究现状，阐明病毒感染与坏死性凋亡之间的相互调控分子机制，以及坏死性凋亡抑制剂的应用进展，旨在为病毒性感染的防治提供新的思路。

为探讨10-羟基癸酸(10-hydroxydecanoic acid, 10-HDA)对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome, PCOS)小鼠的作用，本试验选取21日龄ICR小鼠，通过皮下注射脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone, DHEA)构建PCOS小鼠模型，并给予10-HDA治疗。通过阴道涂片、HE染色、ELISA、荧光定量PCR等方法，研究10-HDA对PCOS小鼠发情周期、卵巢组织形态、生殖激素分泌及氧化应激水平的影响。结果显示，PCOS小鼠经10-HDA处理后，发情周期恢复正常，囊状卵泡数减少，血清睾酮水平降低，卵巢中雄激素合成基因Cyp17a1(cytochrome P450,family 17,subfamily a, polypeptide 1)的表达显著减少。同时，10-HDA可降低PCOS小鼠血清中黄体生成素水平，增加促卵泡激素水平，使两者比率明显降低。10-HDA改善了PCOS小鼠血清中雌激素和孕酮水平，促进抗氧化应激相关基因Nrf2和Foxo1的表达，降低PCOS小鼠体内的氧化应激水平。以上结果表明，10-HDA对PCOS小鼠具有良好的治疗作用。

冠状病毒是迄今已知的基因组最大的RNA病毒，其中猪冠状病毒是引起仔猪急剧腹泻的重要病原体，具有高度变异特性，防控难度较高，每年给我国养猪业带来严重的经济损失。对冠状病毒RNA合成机制的解析有助于了解冠状病毒的遗传变异规律和筛选抗病毒药物，目前研究较深入的主要是鼠冠状病毒(murine coronavirus, MHV)和2型人严重呼吸道综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)。为探究猪冠状病毒的复制机制，本研究以MHV和SARS-CoV-2等冠状病毒为参考，总结了其与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus, TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(swine acute diarrhea syndrome coronavirus, SADS-CoV)等猪冠状病毒非编码区调控病毒复制的机制。重点分析5′非编码区(5′untranslated region, 5′UTR)的保守基序及二级结构在病毒复制中的作用、3′UTR的保守结构如何调控病毒复制、病毒非编码区与宿主蛋白的相互作用调控病毒复制以及病毒非编码区变异特征等内容，为针对该类靶点的抗病毒药物和高病毒滴度疫苗候选株的开发提供理论基础。

采用pGEM^?-T载体作为骨架，通过质粒双酶切和连接以及全基因合成的方法，向载体质粒中插入猪肺炎支原体（Mesomycoplasma hyopneumoniae,Mhp）的oriC序列，获得pGEM^?-Mhp-oriC-p97重组穿梭质粒，以实现质粒在Mhp中的复制；插入螺原体启动子及嘌呤霉素抗性基因用于重组单克隆的筛选；插入p97的上、下游同源臂用于同源重组的启动；插入大肠杆菌recA基因用于提高同源重组效率。然后，将pGEM^?-Mhp-oriC-p97重组穿梭质粒通过电转化或化学转化递送入Mhp中，利用嘌呤霉素抗性基因及p97目的基因进行基因缺失株的筛选。结果显示，构建了一种能够同时在Mhp及大肠杆菌中复制的穿梭质粒pGEM^?-Mhp-oriC-p97,该质粒的转化能实现嘌呤霉素基因、recA基因在Mhp中的表达及p97基因的变异，初步获得了p97基因突变株。结果表明，建立了一种利用同源重组原理实现Mhp基因编辑的工具，为Mhp致病机制研究工具的开发奠定了基础。

为探究新疆某集约化牛场1～6月龄犊牛群中牛副流感病毒3型(BPIV3)的感染情况，对采集的60份犊牛鼻拭子样品进行RT-PCR检测、病毒分离鉴定及全基因组测序和遗传进化分析。结果显示，样品中BPIV3核酸阳性率为11.67%。从核酸阳性样品中分离获得1株BPIV3,并命名为XJ21032-1(45),其基因组全长为15 512 bp;遗传进化分析表明，XJ21032-1(45)属于BPIV3 B基因型，该分离株与澳大利亚的BPIV3 B基因型参考株Q5592(EU277658)的同源性最高为93.4%。本研究成功分离得到了1株B基因型BPIV3,证实B型毒株在我国的存在和流行，为BPIV3疫苗研发提供了原材料，也有助于我国BPIV3分子进化规律及溯源的进一步研究。

为了解鸡白痢沙门菌感染产蛋期蛋鸡致病特点，采集2022年2-11月感染产蛋期蛋鸡的肝脏等组织开展研究。对病鸡的肝脏、脾脏进行细菌分离，对分离菌株进行多重PCR鉴定和血清型检测；取病变的肝脏等组织制备病理切片以观察其病理变化；通过qRT-PCR分析肝脏、脾脏组织中鸡白痢沙门菌毒力基因和细胞因子mRNA的表达水平。结果表明，从送检的蛋鸡中分离出18株细菌，在麦康凯培养基上生长无色小菌落，多重PCR鉴定和血清型为鸡白痢沙门菌；病理切片可见心肌、肝脏及肺脏炎性细胞群浸润和细胞坏死；qRT-PCR检测显示感染鸡白痢沙门菌的病鸡诱导生物被膜相关基因(CsgB、RpoS、bcsA和PagC)、SPI-1基因(HilA、InvA、PrgH和SipC)和SPI-2基因(SteE、RcsC、SseL和SpiC)等毒力基因的表达水平上调；感染产蛋鸡的肝脏中IL-1β、IL-6、IL-4和IL-13的表达水平上调，IL-18和IFN-γ表达水平降低；脾脏中IL-6高度表达，IL-1β和IL-18表达水平显著降低。本研究中感染病鸡组织中鸡白痢沙门菌使生物被膜、SPI-1、SPI-2相关毒力基因和TH2分泌的细胞因子表达上调，表明鸡白痢沙门菌感染宿主时在细胞内和细胞外大量增殖和扩散，引起病理变化和自身免疫反应。

以哺乳动物细胞HEK-293F表达猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)gD重组蛋白作为包被抗原，采用棋盘滴定法优化确定出间接法gD-ELISA(gD-iELISA)各项技术参数；用gD-iELISA检测211份临床猪血清的抗体水平并分析与中和抗体水平的一致关系。结果显示，抗原包被质量浓度为0.90 mg/L;待检血清1∶100稀释，37℃孵育30 min;山羊抗猪IgG-HRP抗体1∶55 000稀释，37℃孵育30 min; TMB底物37℃显色20 min。gD-iELISA能检出1∶6 400稀释的PRV阳性血清；用gD-iELISA检测CSFV、PRRSV、PCV-2、PEDV和FMDV阳性血清其结果均呈阴性，该方法与以上阳性血清不存在交叉反应；gD-iELISA与商品试剂盒阴阳性血清的符合率为95.26%,批内和批间变异系数均低于10%。相关性分析表明，gD抗体水平与中和抗体效价的相关系数(r)显著大于gB抗体水平的相关性，并且gD抗体水平与中和抗体效价有很好的线性关系。结果表明，gD-iELISA比gB-iELISA更适用于PRV的疫苗免疫评估。因此，该方法在PRV的免疫防控中将会有很好的应用前景。

为制备ASFV CP312R基因编码蛋白的多克隆抗体，利用PCR方法从非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的灭活样品中扩增出924 bp的CP312R基因全长序列，利用同源重组法构建出原核表达质粒pCold-Ⅰ-ASFV-CP312R,将其转化至原核表达感受态细胞BL21中，经1 mmol/L的IPTG低温条件下诱导表达CP312R编码蛋白并经过镍柱亲和层析纯化后，利用SDS-PAGE对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析，表达蛋白的相对分子质量约为34 kDa,通过Western blot分析，该蛋白能被ASFV抗体特异性识别。将所得的蛋白经处理纯化后免疫小鼠3次，得到含多克隆抗体的血清。利用该抗体检测实验室构建并拯救的表达ASFV CP312R基因编码蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV),结果显示该多抗具有良好的反应原性和特异性，并且证明了ASFV CP312R基因编码蛋白可在PRRSV活载体中稳定表达。

产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)可引起人类食物中毒和许多非食源性人类胃肠道(GI)疾病。编码其肠毒素(Clostridium perfringens enterotoxin, CPE)的基因cpe若位于染色体的菌易引起食物中毒，cpe位于质粒的菌与非食源性GI疾病相关，因此本研究应用PCR检测、单位点序列分型分析(SLST)、耐热性测定，综合分析cpe~+菌的cpe定位。结果显示，双重PCR检测29株cpe~+菌仅扩增出600 bp的cpe目的条带，未检测出IS1470、IS1470-like、IS1151序列；通过sod、sodFPF PCR检测及SLST分析推测所有检测菌的cpe可能均位于染色体上；7-1和21-3的活菌及芽胞耐热性均高于42-2,推测两者cpe可能位于染色体，而42-2 cpe可能位于质粒上。结果为产气荚膜梭菌引起食物中毒和非食源性疾病的诊断和防控以及cpe的位置与所致疾病相关性的研究提供材料和科学依据。

为了解四川地区流行的猪腹泻病毒类型及其分子流行病学特征，本研究用荧光定量PCR对2021—2023年四川省多个地区来源的猪腹泻样本进行检测；用RT-PCR对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪A群轮状病毒(PoRVA)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪捷申病毒(PTV)进行分型鉴定，并分析其基因变异性、遗传进化特征和重组事件。结果显示，PEDV、PoRVA、PDCoV和PTV在四川地区仍呈现流行趋势，其总体阳性率分别为：14.2%(40/281)、13.2%(37/281)、15.6%(44/281)和12.5%(35/281),以PEDV与其他病原混合感染最为常见。本次检测共获得6株G2b型PEDV、3株G3型PDCoV、3株G9P[13]型PoRVA、1株G3P[13]型PoRVA、3株5型PTV、1株9型PTV。6株PEDV毒株与CV777、DR13、KPEDV-9、Chinju99、KNU-0801、AJ1102和LW/L等7个疫苗毒株相比在COE区和S1D中和表位区存在多个氨基酸突变位点；其中PSCLZ01和PSCMY04株在进化树中单独形成一个小支。3株PDCoV与四川往年流行毒株的遗传进化距离较近，但与其相比存在6～48个氨基酸的突变。4株PoRVA与早期疫苗株LLR相比，VP4基因有104～108个氨基酸变异，VP7基因有25个共同的氨基酸变异；从进化树上看，RSCMY01/G3P[13]的VP7基因与黑龙江毒株LNCY同属一个分支，但其VP4基因又与四川SCYA-C7聚为一支，表明该株PoRVA可能是在不同基因型毒株跨省际间传播过程中发生了基因重配。值得注意的是，本次检出PTV-5型和PTV-9型样本中，其他腹泻病毒均为阴性，表明上述两种基因型PTV可能是猪腹泻的重要病原。此外，PEDV PSCLZ01株和PDCoV PCSCMY02株的S基因都发生了重组事件，且亲本毒株来自国内外不同地区。上述结果揭示了近年四川地区流行的主要猪腹泻病毒类型及其基因多样性和遗传变异规律，丰富了四川地区猪腹泻病原的分子流行病学资料，为本地区猪腹泻病的防控和净化提供了重要的理论依据。

为了探究日本脑炎病毒(JEV)在感染睾丸间质细胞过程中对TLRs信号通路的影响及其调控炎症因子的分泌情况，本研究以1 MOI剂量的JEV接种睾丸间质细胞后，使用qPCR方法检测不同时间段TLR3、TLR7、TLR8、TRIF和MyD88基因的mRNA水平，Western blot方法检测JEV感染睾丸间质细胞6 h时TLR3、TLR7、TRIF和MyD88蛋白表达水平，ELISA检测不同时间段(6、12、24 h)IL-1β、IL-6和TNF-α的表达情况。结果显示：JEV感染睾丸间质细胞6 h后显著上调TLR3、TLR7、TRIF和MyD88基因mRNA水平(P<0.05),下调TLR8基因mRNA水平(P<0.05);Western blot结果显示，JEV感染睾丸间质细胞6 h时TLR3、TLR7、TRIF和MyD88蛋白表达均显著上调(P<0.05),与相应mRNA转录水平结果一致；TLR8蛋白表达变化不显著。ELISA检测结果显示，JEV感染睾丸间质细胞6 h后IL-6极显著增加(P<0.01),IL-1β和TNF-α表达无显著变化。利用siRNA分别对TLR3、TLR7、TLR8、TRIF和MyD88进行基因沉默，对沉默后的细胞接种JEV 6 h时取上清液ELISA检测IL-6表达水平。结果显示，沉默TLR3、TLR7、TLR8、TRIF和MyD88后均可显著减轻JEV感染引起的IL-6分泌增加(p<0.05),表明JEV感染睾丸间质细胞后可通过激活TLR3、TLR7和TLR8信号通路诱导炎症因子IL-6的表达。本研究为深入阐明JEV感染导致的繁殖障碍机制提供了参考。

为探究黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)对猪δ冠状病毒(porcine delta coronavirus, PDCoV)感染复制的影响，以新生仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)、猪肾细胞(LLC-PK)和猪睾丸细胞(ST)为模型，使用CCK-8法检测AFB1在3种细胞上的安全质量浓度范围，并将每种细胞分为空白对照组、AFB1处理组、PDCoV处理组以及AFB1和PDCoV共处理组，用安全质量浓度的AFB1处理细胞12 h,然后用PDCoV处理20 h,提取细胞总RNA和总蛋白质，通过qPCR、Western blot以及细胞免疫荧光等试验，检测AFB1对PDCoV感染复制的影响。结果显示，与PDCoV处理组相比，AFB1和PDCoV共处理组中病毒S蛋白mRNA和N蛋白表达出现了明显的增长(P<0.05),在细胞免疫荧光中，共处理组中也明显可见更多的PDCoV N蛋白荧光，且两组之间存在显著性差异(P<0.05)。结果表明：AFB1对PDCoV的感染复制具有促进作用，为AFB1能够促进PDCoV的感染复制提供了重要数据，也为防治PDCoV提供了新的思路。

2022年12月至2023年12月期间，在全国采集2 560份拭子样品，利用PCR方法对猫博卡病毒(feline bocavirus, FBoV)进行检测并扩增其NS1及VP2基因编码序列；同时，利用生物信息学方法分析FBoV的遗传多样性。结果显示，FBoV的总阳性率为4.6%(119/2 560),共在8个省或直辖市的样品中检出FBoV,疾病呈区域性流行特点；基因遗传进化分析结果显示，FBoV以多种基因型存在，我国主要以FBoV-1型流行为主，本研究鉴定的15株FBoV-1型毒株、4株FBoV-2型毒株、1株FBoV-3型毒株与中国、美国、泰国、澳大利亚、葡萄牙所鉴定的毒株遗传距离较近；同源性分析结果显示，各测序毒株与参考毒株间NS1及VP2基因氨基酸同源性分别为60.40%～99.20%和67.20%～100%,各测序毒株之间NS1及VP2氨基酸同源性分别为60.60%～100%和67.80%～100%,结果表明，我国流行的FBoV毒株具有明显的遗传多样性。本研究为阐明我国FBoV的流行现状充实了资料，并为后续针对FBoV的诊断或防控提供了流行病学调查基础。

收集免疫反应较强的中间宿主羊细粒棘球绦虫感染阳性血清，以健康血清为阴性对照，纯化该血清与靶标蛋白经免疫沉淀捕获和富集相应的抗原，获得靶标蛋白-抗体-目的蛋白复合物。联合质谱策略筛选与鉴定细粒棘球绦虫相关特异性抗原，利用在线预测软件对肽段覆盖率最高的蛋白进行生物信息学分析。结果显示，IP-MS鉴定得到133种细粒棘球绦虫相关蛋白，其中肽段覆盖率≥70%的有1种蛋白，为肌动蛋白；肽段覆盖率为30%～40%的有3种蛋白，分别为含Ton B结构域蛋白、NADH脱氢酶(泛醌)1 α亚复合物2、乳酸脱氢酶；肽段覆盖率为20%～30%的有6种蛋白，分别为剪接因子3b亚基5、肿瘤蛋白D52、表达的保守蛋白、NADH脱氢酶(泛醌)1α亚复合物7、肌苷-5′-单磷酸脱氢酶和醛酮还原酶家族1成员B4。生物信息学分析显示，肌动蛋白无信号肽，可能为非分泌型蛋白，亚细胞定位在细胞骨架，存在6个最佳潜在抗原表位，二级结构和三级结构一致以α螺旋和无规则卷曲为主。结果表明，免疫沉淀-质普联用技术是筛选和鉴定细粒棘球绦虫抗原的一种高通量、简便、快速有效的方法，可为筛选中间宿主羊血清诊断标识的特异分子及包虫病新型诊断技术的研发提供依据。

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)感染猪所引起的一种急性、出血性、高度接触性传染病。自2018年ASF传入我国以来，已经流行了5年多，病毒已经演化出了低毒力的基因Ⅱ型和基因Ⅰ型弱毒株，以及基因Ⅱ型和Ⅰ型重组毒株，这为该病的防制和疫苗研发带来了巨大挑战。ASF减毒活疫苗(live attenuated vaccines, LAVs)能够诱导良好的免疫保护，具备商品化疫苗的潜力。鉴定和研究毒力相关基因(virulence-associated genes, VAGs)对于LAVs的研发至关重要，也是ASFV研究的热点和难点。因此，对已鉴定的ASFV VAGs进行全面系统的综述，总结VAGs编码蛋白的作用机制，同时展望如何全面鉴定ASFV VAGs及其编码蛋白的作用机制，以及如何利用已知的VAGs科学设计安全高效的LAVs,以期为ASFV的致病机制及LAVs研发提供参考。

TLR7/8是动物体内重要的模式识别受体(pattern recognition receptors, PRRs),启动固有免疫并激活适应性免疫，在病原感染中发挥重要作用。TLR7/8激动剂具有增强机体免疫应答的作用，能够激活免疫细胞，调节炎性细胞因子的产生，对加速病原清除具有重要意义，被认为是许多疾病的潜在防治药物，有希望用于治疗病毒感染、肿瘤等疾病，或作为免疫佐剂为动物机体提供持久的抗体保护。常见的TLR7/8激动剂包括咪唑喹啉类衍生物和核苷类似物等，有些药物已进入临床研究阶段，但仅有少数获批临床。现主要围绕TLR7/8激动剂及其在抗病毒、免疫佐剂等方面的潜在应用进行综述。

为预测草原革蜱在新疆地区的分布点和适生区情况及了解其实验室条件下生活周期史，本研究使用最大熵(maximum entropy modeling, MaxEnt)模型对草原革蜱在新疆地区的地理分布以及适应区进行预测，并使用刀切法(jackknife test)及环境变量响应曲线评估影响草原革蜱分布的环境因子。根据预测的地点随机采集革蜱样本，利用形态学特征及分子生物学相结合方法鉴定革蜱种类。以新西兰大白兔为唯一供血动物，在实验室自然光照条件下采用耳套饲养法进行人工饲养，观察记录该蜱的生活史周期及生物学特性。使用刀切法检验及SPSS分析结果显示，影响草原革蜱适生区分布的主要环境变量因子为平均温度(Bio1)、均气温日较差(Bio2)、温度季节性变化(Bio4)、最干旱月降水量(Bio14)、降水量变异系数(Bio15)、最冷季度降水量(Bio19)。主要环境变量因子响应曲线结果显示，草原革蜱在Bio1为15.58℃、Bio2为6.19℃、Bio4的变异系数为1 500、Bio14为20 mm、Bio15的变异系数为23.799、Bio19为69 mm时存在概率最大。适生区预测结果显示，新疆草原革蜱适生区为准噶尔盆地、天山山脉及山间谷地、阿尔泰山、吐鲁番盆地、以及天山山脉以南部分地区，占新疆总面积的50.99%。根据MaxEnt模型预测地区采集革蜱，通过形态学结合分子生物学方法鉴定为草原革蜱；幼蜱饱血期为5.31 d,蜕化期为8.19 d,蜕化率达到95.5%;若蜱饱血期为8.65 d,蜕化期为12.86 d,蜕化率达到98%;成蜱饱血期为6.75 d,饱血雌蜱产卵前期为5.86 d,饱血雌蜱产卵期为12.5 d;蜱卵经25.92 d孵化为幼蜱，孵化率达到90%;草原革蜱在实验室条件下完成一个生活史需62～10 d,平均需86.0 d。所构建的MaxEnt模型具有较高的预测精度和准确性，根据主要环境因子变量分析，降水量和温度是影响草原革蜱的主要环境因子。本试验研究为新疆优势蜱种-草原革蜱的危害评估、建立实验室人工饲养纯种蜱体系及当地蜱传疾病的综合防控奠定了基础。

近年来，由冠状病毒引起的疫病呈现频发、暴发和新发的趋势，造成人类和动物严重的呼吸和消化系统疾病，危害全球公共卫生安全和畜禽健康养殖。目前，对冠状病毒致病、跨种传播等机制的认识不足制约了抗冠状病毒药物和疫苗产品的研制。反向遗传操作技术可用于病毒蛋白功能和病毒致病、复制机制的解析，也是减毒、基因标记疫苗和抗病毒药物研发中不可或缺的技术工具。因冠状病毒因基因组较大、结构复杂，其反向遗传操作技术曾长期发展滞后，但是随着分子生物学手段的不断更新，多种新的构建策略应运而生。通过重点介绍冠状病毒反向遗传操作系统的构建策略及其在冠状病毒传播、致病机制、疫苗研发和药物筛选中的应用，为冠状病毒感染的防控提供有利的工具。

为探讨黄芪多糖合生元对大肠杆菌性犊牛腹泻粪便评分和血液指标的影响，本研究选择品种相同(荷斯坦),日龄相近(6～9日龄),体质量相近(44.56±5) kg的20头大肠杆菌性腹泻犊牛，使用单因素完全随机设计分为对照组和试验组。试验期10 d,试验期内对照组与试验组犊牛每天肌肉注射博落回注射液(1 mg/kg)+恩诺沙星注射液(20 mg/kg)进行治疗，试验组犊牛除正常治疗方案外每天在饲奶中添加20 g黄芪多糖合生元制剂。试验期内每天上午9:00采集各组犊牛粪便进行粪便评分，试验期结束采集颈静脉血进行血液相关指标的检测。结果表明，试验组比对照组腹泻率下降17%,但粪便评分无显著统计学差异；试验组比对照组免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白M(IgM)含量分别增加54.81%和60.40%(P<0.01),免疫球蛋白G(IgG)和白细胞介素-10(IL-10)含量分别增加50.89%和46.80%(P<0.05),而白细胞介素-6(IL-6)含量减少28.99%(P<0.05),白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量分别减少20.88%和37.10%(P<0.01);试验组D-乳酸(D-LA)和内毒素(LPS)比对照组分别降低47.46%和65.31%(P<0.01),二胺氧化酶(DAO)活性降低30%(P<0.01);试验组比对照组总超氧化物歧化酶(T-SOD)含量增加12.78%(P<0.05),过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性分别增加53.09%和60.57%(P<0.01),而丙二醛(MDA)含量降低33.29%(P<0.01)。结果表明，黄芪多糖合生元制剂可以缓解大肠杆菌性腹泻犊牛的肠黏膜损伤，提高机体免疫力并提升抗氧化应激能力，降低致病菌和氧化应激对肠黏膜通透性的影响。

牛冠状病毒（bovine coronavirus, BCoV）可引起新生犊牛腹泻和呼吸道疾病，严重时可导致犊牛死亡，给养牛业造成巨大的经济损失。目前我国尚未有自主研发的针对BCoV的疫苗，导致BCoV流行性高、传播范围广，因此开发具有保护性BCoV的疫苗是当务之急。本研究旨在表达BCoV N蛋白并分析其免疫原性，首先用PCR方法扩增N蛋白基因，构建pET-30a-N重组质粒，表达并纯化N蛋白，再将N蛋白与佐剂配伍免疫小鼠；采用间接ELISA检测小鼠IgG和IgA抗体水平及滴度，利用流式细胞术检测小鼠脾脏T淋巴细胞分群比例以及相关免疫细胞因子的释放情况。结果显示，成功获得BCoV可溶性N蛋白，大小约为55 kDa; ELISA检测结果显示，免疫组小鼠血清IgG抗体效价为1∶51 200,免疫组小鼠血清IgA抗体效价为1∶3 200;流式细胞术检测结果显示，与对照组相比，免疫组CD4⁺/CD8⁺ T淋巴细胞亚群比例极显著升高（P<0.01）,TNF-α释放显著增多（P<0.05）,产生偏向辅助性T细胞增加和TNF-α分泌增多的细胞免疫应答。研究表明，通过原核表达系统能成功实现BCoV N蛋白的可溶性表达，且获得的BCoV N蛋白免疫原性良好，可诱导免疫小鼠产生强烈的体液免疫和细胞免疫反应。为开发安全有效的BCoV亚单位疫苗提供了重要的技术支持。

基于核因子E2相关因子2（Nrf2）/谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）信号通路研究槲皮素抑制玉米赤霉烯酮（zearalenone, ZEN）诱导IPEC-J2猪小肠上皮细胞铁死亡的作用机制。体外培养IPEC-J2细胞，ZEN处理（25mg/L）的同时给予不同浓度槲皮素干预（10、20、40μmol/L）。生化法检测各组细胞培养液上清中乳酸脱氢酶（LDH）、总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）水平；荧光探针检测细胞中Fe²⁺、活性氧（ROS）和脂质过氧化水平；Western blot检测Nrf2、长链酯酰辅酶A合成酶4（ACSL4）和GPX4蛋白表达水平。将IPEC-J2细胞分为对照组、ZEN组、槲皮素组和ML385（Nrf2抑制剂）+槲皮素组，除对照组外其余各组均接受ZEN处理，并采用槲皮素和ML385进行干预，检测Nrf2/GPX4通路相关蛋白表达和铁死亡指标(LDH、Fe²⁺、MDA和GSH)变化。结果显示，与对照组比较，ZEN组细胞存活率、T-AOC及GSH、SOD水平、Nrf2和GPX4蛋白表达降低（P<0.05）,细胞LDH释放率、Fe²⁺及ROS、脂质过氧化、MDA水平及ACSL4蛋白表达升高（P<0.05）。与ZEN组比较，槲皮素组细胞存活率、细胞T-AOC、SOD及GSH水平、Nrf2和GPX4蛋白表达升高（P<0.05）,细胞LDH释放率、Fe²⁺及ROS、脂质过氧化、MDA水平及ACSL4蛋白表达降低（P<0.05）。与槲皮素组比较，ML385+槲皮素组细胞Nrf2及GPX4蛋白表达和GSH水平降低（P<0.05）,细胞LDH释放率、Fe²⁺及MDA水平升高（P<0.05）。综上，槲皮素能够抑制ZEN诱导的IPEC-J2细胞铁死亡，其作用机制可能与其激活Nrf2/GPX4信号通路有关。

以6周龄雄性野生型(WT)C57BL/6J小鼠和磷酸酶与张力蛋白同源物诱导激酶1(PINK1)基因敲除(PINK1~(-/-))小鼠为对象，将小鼠随机分为WT对照组，WT模型组和PINK1~(-/-)模型组。WT模型组和PINK1~(-/-)模型组小鼠饮用含100 mg/L氟化钠(NaF)的蒸馏水，WT对照组小鼠饮用蒸馏水，处理时间为12周。通过免疫印迹(Western blot)研究线粒体自噬相关蛋白表达水平；用透射电镜观察肺脏线粒体超微结构损伤；ATP通过检测试剂盒和RT-qPCR分别测定ATP水平和mtDNA拷贝数；DHE染色检测肺脏活性氧(ROS)水平；比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力以及丙二醛(MDA)的含量；TUNEL染色检测肺脏细胞凋亡；酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素6(IL-6)的水平。结果显示，与WT模型组比较，PINK1~(-/-)模型组小鼠肺脏中帕金森病蛋白2(Parkin)和微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)的蛋白表达水平显著降低(P<0.05),p62/SQSTM1和线粒体外膜转运孔蛋白20(TOM20)蛋白表达水平显著增加(P<0.05);与WT模型组比较，PINK1~(-/-)模型组小鼠肺脏受损线粒体百分比增加(P<0.05),ATP水平和mtDNA拷贝数减少(P<0.05)。PINK1~(-/-)模型组小鼠肺脏ROS水平、MDA含量和TUNEL阳性细胞数升高，SOD和CAT活力降低，较WT模型组有显著性差异(P<0.05)。此外，与WT模型组比较，PINK1~(-/-)模型组小鼠肺泡灌洗液中TNF-α和IL-6的水平显著增加(P<0.05)。结果表明，PINK1介导的线粒体自噬可减弱NaF引起的小鼠肺脏损伤。

牛呼吸道疾病(bovine respiratory disease, BRD)是牛场中重要的疾病之一，给我国养牛业造成了严重的经济损失。多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)和溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)是与BRD相关的主要细菌性病原。为分离纯化到目前Pm和Mh流行的优势毒株，建立合适的小动物攻毒模型，给BRD疫苗研制提供有效的疫苗候选株。本研究首先从患BRD牛的病料中进行Pm和Mh的检测、分离鉴定，确定基因型且评估分离株对小鼠的致病性，筛选合适的疫苗候选株。结果显示，本研究在2022年11-12月从我国3个省份的6个牛场采集到48份患有BRD的牛鼻拭子，PCR检测结果显示Pm的检出率为47.9%(95%CI:33.3～62.8),Mh的检出率为37.5%(95%CI:24.0～52.6),Pm/Mh共感染的检出率为18.8%(95%CI:8.9～32.6)。在阳性样本中分离纯化得到12株Pm,经血清型鉴定均为A型多杀性巴氏杆菌(PmA);分离到11株Mh,其中7株为A1型，4株为A6型，且在同一头牛的鼻拭子中同时分离到A1型和A6型的Mh。随后建立PmA和Mh的小鼠感染模型，筛选到PmA和Mh的强毒株分别是PmA GDP001株和Mh GDM019株，并且测定PmA GDP001株对小鼠的LD_(50)为10~(1.1) CFU,Mh GDM019株对小鼠的LD_(50)为10~(8.2) CFU。本研究揭示了我国部分地区牛场中BRD主要细菌性病原的流行病学，分离到了重要的病原(PmA和Mh),并且鉴定了分离株的血清型，且通过小鼠感染致病模型筛选到毒力强的PmA和Mh菌株，为BRD多联多价疫苗的研发提供了良好的疫苗候选株。

为建立高效检测牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)的血清学方法，本研究设计优化LSDV RNA聚合酶30亚基(RPO30)蛋白的密码子，构建其原核表达质粒pET-25b-RPO30,并进行诱导表达和阴离子纯化。纯化后的RPO30蛋白可以被LSDV的阳性血清识别，具有良好的反应原性。用纯化的RPO30蛋白免疫BALB/c小鼠，并将免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合，筛选到能够稳定分泌抗体且具有竞争效果的杂交瘤细胞株1H1。以重组RPO30蛋白为包被抗原，经反应条件的优化，建立了基于RPO30蛋白的竞争ELISA(cELISA)抗体检测方法。本研究建立的cELISA检测方法的最适抗原包被质量浓度为1 mg/L,用含5%牛血清白蛋白(BSA)的PBST作为封闭液37℃孵育2 h,待测血清的最适稀释度为1∶2,1H1抗体稀释度为1∶2 000,兔抗鼠HRP-IgG稀释度为1∶4 000,最佳显色条件是37℃反应15 min。当检测样品的1-S/P≥0.55,判定结果为阳性；当检测样品的1-S/P<0.55,判定结果为阴性。利用该方法检测了LSDV、牛传染性鼻支气管炎病毒(IBRV)、牛支原体(M.bovis)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛布鲁杆菌(B.abortus)、口蹄疫病毒(FMDV)阳性血清，结果显示除了LSDV检测结果阳性外，其他病原的检测结果都是阴性，说明本方法特异性强。利用本试验建立的cELISA检测有免疫背景的临床血清200份，结果显示，其可用于临床疫苗免疫效果的评估。本研究基于重组RPO30蛋白建立的cELISA方法操作简单、特异性强、敏感性高、重复性好，为LSDV的检测和预防提供了可靠的技术支持。

运用CCK-8法检测不同浓度CoCl₂（0、50、100、200、300、400μmol/L）及其不同处理时间（0、6、12、24、48 h）对脂肪细胞活力的影响，并选择最适宜的处理条件；采用Western blot方法检测不同浓度CoCl₂（0、50、100、200、400μmol/L）对脂肪细胞低氧及其下游关键分子蛋白表达的影响。结果显示，CoCl₂处理组浓度越高，脂肪细胞活力越低，其中300、400μmol/L处理组细胞活力显著下降（P<0.01）,200μmol/L处理组细胞活力最高。与对照组相比，200μmol/L CoCl₂处理组低氧及其下游信号通路关键分子：缺氧诱导因子1-α（hypoxia inducible factor 1-alpha, HIF-1α）、葡萄糖转运蛋白4（recombinant glucose transporter 4,GLUT4）、血管内皮生长因子受体1（vascular endothelial growth factor receptor 1,FLT-1）、脯氨酰羟化酶2（proline hydroxylase2,PHD2）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）的蛋白表达水平显著上调（P<0.01）。与对照组相比，200μmol/L CoCl₂处理组中脂解代谢关键酶脂肪甘油三酯脂肪酶（adipose triglyceride lipase, ATGL）、围脂滴蛋白1（perilipin 1,PLIN1）、蛋白激酶A（protein kinase A,PKA）和300、400μmol/L处理组中激素敏感性甘油三酯脂肪酶（hormone-sensitive lipase, HSL）磷酸化的水平高于其他各组（P<0.01）。200μmol/L处理组CoCl₂介导的缺氧上调了胞内磷脂酰肌醇激酶（phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K）的蛋白表达和蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）的磷酸化水平。结果表明，添加200μmol/L CoCl₂能够促进原代牛脂肪细胞缺氧相关蛋白和脂解代谢酶及胰岛素相关信号蛋白的表达。

真核细胞受到氧化应激、热休克或病毒感染等外界不利因素刺激时，会迅速启动细胞应激反应，停滞自身翻译，导致大量应激颗粒(stress granules, SGs)的产生，使细胞处于自我保护的休眠状态。SGs是一种动态、无膜的蛋白-RNA聚集物，在维持细胞内环境稳态、调控宿主基因表达的过程中发挥重要作用。SGs在抵抗病毒复制过程中也发挥重要作用，既可以停滞宿主蛋白翻译系统避免病毒“劫持”,也能够招募天然免疫相关的宿主因子，共同抵抗病毒复制。然而，病毒在长期进化中已经具备多种逃逸SGs抗病毒的策略，以便为自身复制提供更好的细胞内环境。因此，对SGs产生、抗病毒机制以及病毒进化过程中逃逸SGs抗病毒的策略进行综述，以期为抗病毒药物的研发提供新的视角。

为探究泛素特异性蛋白酶47(ubiquitin-specific protease 47,USP47)对狂犬病病毒(rabies virus, RABV)感染小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a, N2a)的影响，本研究通过RT-qPCR、免疫印记和病毒滴度测定等技术，检测在N2a细胞中，RABV直接感染对USP47表达水平的影响，然后检测过表达USP47及敲低USP47后RABV核蛋白和磷蛋白基因水平、蛋白水平和上清液病毒滴度的变化。结果显示，RABV感染会引起N2a细胞中USP47转录水平上调。过表达USP47后，RABV N和RABV P基因和蛋白表达水平均上升，上清中病毒滴度也随之升高，同时白细胞介素6(IL-6)基因水平降低；敲低USP47后，RABV N和RABV P基因和蛋白表达水平降低，上清中病毒滴度也相应降低，IL-6基因水平升高。结果表明，USP47可促进RABV感染，抑制IL-6的表达。这一发现为深入研究USP47调控RABV感染的分子机制打下了基础。

为了预防马立克氏病毒(Marek's disease virus, MDV)和新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)混合感染给养禽业造成的危害，本研究以细菌人工染色体(BAC)为基因编辑平台，利用Red同源重组技术，将NDV的F基因整合到MDV双基因缺失毒株Md5 BACΔmeqΔLorf9基因组中，诱导Ⅰ-SceⅠ酶表达，将筛选标记卡那霉素抗性基因敲除，构建重组活载体疫苗候选毒株Md5 BACΔmeqΔLorf9-F。PCR以及限制性片段多态性(RFLP)分析结果显示F基因成功整合到MDV基因组且重组质粒基因组完整；将鉴定正确的重组质粒转染鸡胚成纤维细胞，1周后出现明显的细胞病变，且噬斑大小与亲本毒无明显差异；体外生长曲线结果显示，F基因的插入不影响病毒的体外复制能力。结果表明，本研究正确构建了表达NDV保护性抗原F基因的重组MDV,为研制ND重组MDV活载体疫苗奠定了基础，对NDV和MDV混合感染的防控具有重要意义。

对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)感染后不同时间点UL35和gB基因的进行定量分析，发现在感染细胞后2.5、5.0以及20.0 h时，两者基因组拷贝数具有显著差异，并且在PRV感染早期可以观察到UL35基因的表达。为了确定UL35基因能否作为诊断PRV感染的靶标，本研究根据PRV不同毒株UL35基因保守序列，设计合成特异性荧光定量PCR引物，扩增长度为54 bp的片段。通过优化反应条件和反应体系，结果显示，建立的PRV SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具有良好的重复性和特异性，其标准曲线与模板浓度呈现良好的线性关系；对猪繁殖和呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)、非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)核酸扩增均呈阴性；将所建立的方法与同类方法进行比较，敏感性无差异；组间和组内重复性试验的变异系数小于2%。用本试验所建立的方法对PRV感染小鼠的组织样品进行检测，均检测到一定的病毒载量。结果表明，UL35基因可以作为诊断PRV感染的靶标。

为了解致贵州省某鸡场幼鸡死亡的传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus, IBDV)GZGY2022分离株的基因组特征、遗传变异及毒株类型，本试验设计引物对其进行全基因组的扩增、克隆、测序，遗传演化和毒株类型分析。结果显示，扩增IBDV全基因组的A、B片段分别为3 260、2 827 bp,分别编码VP2～VP5、VP1基因。该毒株A、B片段与VvIBDV毒株核苷酸序列同源性分别为96.2%～98.7%、87.7%～98.9%,均与NN1172株同源性最高，与其他毒株同源性分别为83.1%～94.7%、90.1%～91.0%。遗传演化及毒株类型结果显示，IBDV毒株按抗原及毒力主要分为6个分支，该毒株A、B片段均聚类在VvIBDV分支，根据新基因型分类方法，该毒株为A3B3基因型。氨基酸序列分析结果表明，该毒株A、B片段分别有3、7处独有的氨基酸位点变异，全基因组编码区与超强毒株有13处一致且独有的特征性氨基酸位点。A片段的VP2序列与超强毒株有19处相同的特征氨基酸，其中高变区222A、242I、253Q、256I、279D、284A、294I、299S是超强毒株的特征性的氨基酸位点，七肽区序列SWSASGS与强毒株一致；B片段的VP1序列与超强毒株有10处相同的特征氨基酸，其中61I、145T、287A是超强毒株的特征性的氨基酸位点，777～782核苷酸序列为GGTGCC,未能形成KpnⅠ限制性内切酶位点，结合三联体位点145/146/147(TEG),则B片段与NN1172株一致，其毒力稍弱于B2型VvIBDV毒株。重组分析结果显示，该毒株序列无断裂和重组位点，未发生重组事件。结果表明，GZGY2022株属于A3B3型非重组超强毒株，特殊氨基酸位点均与VvIBDV分子特征相符。

猪关节炎作为规模化猪场常见的慢性疾病之一，会导致肉猪生产性能降低，对猪场的正常生产具有较大影响。本试验从1头跛行的猪关节液内分离纯化得到1株副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS),对分离菌株进行血清型、毒力基因和耐药性等病原学方面的研究，结合敏感药物对临床关节炎肉猪展开治疗，为将来实际生产中肉猪关节病的综合防治提供理论依据。本试验从病猪关节液里分离得到1株14型强毒株HPS,HPS分离株对β-内酰胺类药物和四环素类药物敏感，氟苯尼考与多黏菌素在较低的药物浓度时也能完全抑制HPS分离株的生长，但细菌对新诺明和环丙沙星出现耐药性。使用盐酸多西环素注射液和恩诺沙星注射液对临床关节炎的病猪进行治疗，治疗效果良好。相较于感染组病猪腕关节、跗关节难以屈曲，明显跛行的状态，治疗组病猪明显好转，可正常行走，关节仅轻微肿胀，关节病临床症状得到缓解。

microRNA(miRNA)作为小非编码RNA与特定靶基因mRNA结合，通过降解或抑制其翻译可实现对靶基因表达的调控。深入了解miRNA在猪源病毒与宿主之间的调控作用，对预防和治疗猪病毒性疾病具有重要意义。在此对miRNA的生物合成和作用机制、miRNA与猪源病毒的关系、宿主miRNA与病毒的互作及相关信号通路进行综述，以期为猪病毒性疾病的预防和治疗等提供新思路。