冠状病毒是迄今已知的基因组最大的RNA病毒，其中猪冠状病毒是引起仔猪急剧腹泻的重要病原体，具有高度变异特性，防控难度较高，每年给我国养猪业带来严重的经济损失。对冠状病毒RNA合成机制的解析有助于了解冠状病毒的遗传变异规律和筛选抗病毒药物，目前研究较深入的主要是鼠冠状病毒(murine coronavirus, MHV)和2型人严重呼吸道综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)。为探究猪冠状病毒的复制机制，本研究以MHV和SARS-CoV-2等冠状病毒为参考，总结了其与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus, TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(swine acute diarrhea syndrome coronavirus, SADS-CoV)等猪冠状病毒非编码区调控病毒复制的机制。重点分析5′非编码区(5′untranslated region, 5′UTR)的保守基序及二级结构在病毒复制中的作用、3′UTR的保守结构如何调控病毒复制、病毒非编码区与宿主蛋白的相互作用调控病毒复制以及病毒非编码区变异特征等内容，为针对该类靶点的抗病毒药物和高病毒滴度疫苗候选株的开发提供理论基础。

猪氨肽酶N（porcine aminopeptidase N,pAPN）是一种锌金属蛋白酶，介导病毒与宿主细胞融合，是冠状病毒的细胞受体之一。为探究pAPN对猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）复制的影响，本研究从小肠组织中扩增出pAPN基因全长，通过限制性内切酶同源位点克隆到慢病毒载体中，获得携带pAPN基因的慢病毒载体PLVX-pAPN-mCMV-ZsGreen1-puro,在293T细胞中包装形成表达pAPN的慢病毒，将慢病毒感染Vero细胞，用嘌呤霉素加压筛选阳性细胞，采用有限稀释法筛选出稳定表达的Vero-pAPN细胞系，并通过测定N基因mRNA转录水平、N蛋白表达水平和TCID₅₀水平差异情况来验证该细胞系对PEDV复制的影响。结果显示，本研究构建的慢病毒能够感染Vero细胞，亚克隆筛选到的单克隆细胞株Vero-pAPN（2C5）能够稳定过表达pAPN;该细胞系能够促进PEDV复制，在12～48 h内N基因mRNA转录水平差异显著（P<0.05）、N蛋白表达水平均提高，TCID₅₀在24和48 h差异显著（P<0.05）。本研究构建了Vero-pAPN细胞系，pAPN在Vero细胞中过表达能够促进PEDV复制，该细胞系可作为疫苗高效生产和临床样本分离的候选细胞系。

为预测草原革蜱在新疆地区的分布点和适生区情况及了解其实验室条件下生活周期史，本研究使用最大熵(maximum entropy modeling, MaxEnt)模型对草原革蜱在新疆地区的地理分布以及适应区进行预测，并使用刀切法(jackknife test)及环境变量响应曲线评估影响草原革蜱分布的环境因子。根据预测的地点随机采集革蜱样本，利用形态学特征及分子生物学相结合方法鉴定革蜱种类。以新西兰大白兔为唯一供血动物，在实验室自然光照条件下采用耳套饲养法进行人工饲养，观察记录该蜱的生活史周期及生物学特性。使用刀切法检验及SPSS分析结果显示，影响草原革蜱适生区分布的主要环境变量因子为平均温度(Bio1)、均气温日较差(Bio2)、温度季节性变化(Bio4)、最干旱月降水量(Bio14)、降水量变异系数(Bio15)、最冷季度降水量(Bio19)。主要环境变量因子响应曲线结果显示，草原革蜱在Bio1为15.58℃、Bio2为6.19℃、Bio4的变异系数为1 500、Bio14为20 mm、Bio15的变异系数为23.799、Bio19为69 mm时存在概率最大。适生区预测结果显示，新疆草原革蜱适生区为准噶尔盆地、天山山脉及山间谷地、阿尔泰山、吐鲁番盆地、以及天山山脉以南部分地区，占新疆总面积的50.99%。根据MaxEnt模型预测地区采集革蜱，通过形态学结合分子生物学方法鉴定为草原革蜱；幼蜱饱血期为5.31 d,蜕化期为8.19 d,蜕化率达到95.5%;若蜱饱血期为8.65 d,蜕化期为12.86 d,蜕化率达到98%;成蜱饱血期为6.75 d,饱血雌蜱产卵前期为5.86 d,饱血雌蜱产卵期为12.5 d;蜱卵经25.92 d孵化为幼蜱，孵化率达到90%;草原革蜱在实验室条件下完成一个生活史需62～10 d,平均需86.0 d。所构建的MaxEnt模型具有较高的预测精度和准确性，根据主要环境因子变量分析，降水量和温度是影响草原革蜱的主要环境因子。本试验研究为新疆优势蜱种-草原革蜱的危害评估、建立实验室人工饲养纯种蜱体系及当地蜱传疾病的综合防控奠定了基础。

2022年12月至2023年12月期间，在全国采集2 560份拭子样品，利用PCR方法对猫博卡病毒(feline bocavirus, FBoV)进行检测并扩增其NS1及VP2基因编码序列；同时，利用生物信息学方法分析FBoV的遗传多样性。结果显示，FBoV的总阳性率为4.6%(119/2 560),共在8个省或直辖市的样品中检出FBoV,疾病呈区域性流行特点；基因遗传进化分析结果显示，FBoV以多种基因型存在，我国主要以FBoV-1型流行为主，本研究鉴定的15株FBoV-1型毒株、4株FBoV-2型毒株、1株FBoV-3型毒株与中国、美国、泰国、澳大利亚、葡萄牙所鉴定的毒株遗传距离较近；同源性分析结果显示，各测序毒株与参考毒株间NS1及VP2基因氨基酸同源性分别为60.40%～99.20%和67.20%～100%,各测序毒株之间NS1及VP2氨基酸同源性分别为60.60%～100%和67.80%～100%,结果表明，我国流行的FBoV毒株具有明显的遗传多样性。本研究为阐明我国FBoV的流行现状充实了资料，并为后续针对FBoV的诊断或防控提供了流行病学调查基础。

为制备ASFV CP312R基因编码蛋白的多克隆抗体，利用PCR方法从非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的灭活样品中扩增出924 bp的CP312R基因全长序列，利用同源重组法构建出原核表达质粒pCold-Ⅰ-ASFV-CP312R,将其转化至原核表达感受态细胞BL21中，经1 mmol/L的IPTG低温条件下诱导表达CP312R编码蛋白并经过镍柱亲和层析纯化后，利用SDS-PAGE对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析，表达蛋白的相对分子质量约为34 kDa,通过Western blot分析，该蛋白能被ASFV抗体特异性识别。将所得的蛋白经处理纯化后免疫小鼠3次，得到含多克隆抗体的血清。利用该抗体检测实验室构建并拯救的表达ASFV CP312R基因编码蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV),结果显示该多抗具有良好的反应原性和特异性，并且证明了ASFV CP312R基因编码蛋白可在PRRSV活载体中稳定表达。

沙门菌作为一种重要食源性病原菌，可广泛感染动物和人，严重威胁宿主健康。沙门菌入侵时，首先与宿主天然吞噬细胞等的模式识别受体(pattern recognition receptor, PRR)结合并激活天然免疫应答。NOD样受体(NOD-like receptors, NLR)作为一种细胞质PRR,在病原体感染和肿瘤免疫中发挥重要作用。NLR可被沙门菌鞭毛、分泌蛋白、LPS等多种毒力因子激活，组装炎性小体促进细胞分泌多种细胞因子抵御感染。而沙门菌也进化出多种机制如修饰鞭毛、细胞内形成带菌囊泡(Salmonella-containing vacuole, SCV)和分泌蛋白等阻止受体识别从而实现免疫逃逸，在宿主体内长期存活。现总结了近年来沙门菌激活NLR,以及沙门菌躲避NLR识别的相关研究进展，为进一步了解宿主应对沙门菌的天然免疫应答及疫苗开发提供思路。

饲养层细胞对获得多能干细胞(pluripotent stem cells, PSCs)非常重要，小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts, MEF)已被广泛用作培养和产生多种胚胎干细胞(embryonic stem cells, ESCs)及诱导PSCs(induced PSCs, iPSCs)的饲养层，但由于种间差异，MEF可能不适于家畜ESCs和iPSCs。研究表明，PSCs可被分为至少2种多能性状态：初始态(naive state)和始发态(primed state)。本室前期用MEF饲养层从牛睾丸支持细胞(sertoli cells, SCs)获得了牛的始发态iPSCs。本研究基于初始态培养液(na6ve medium, NM),比较了MEF饲养层和牛胚胎成纤维细胞(bovine embryonic fibroblasts, BEF)饲养层对牛iPSCs多能性和形态维持及其从始发态向初始态样转化的影响。结果显示，MEF+NM(MNM)和BEF+NM(BNM)均能在3～4 d内将牛iPSCs从始发态转化为初始样状态。克隆分析显示，BNM培养中牛iPSCs的克隆数、碱性磷酸酶活性和转化效率均高于MNM培养中的指标。这些克隆在长期培养中均能表达初始态iPSCs的多能性分子标记。结果表明，采用NM条件，在MEF和BEF饲养层上均可产生牛初始态样iPSCs,但在BEF上转化效率较高。

用3μmol/L磷酰胺氮芥(phosphoramide mustard, PM)诱导RAW264.7细胞24 h,建立体外细胞免疫抑制模型；给予不同剂量(25、50、100μmol/L)的菊苣酸(chicoric acid, CA)干预细胞24 h,考察CA对免疫抑制的调节作用。利用CCK-8法检测细胞活力，中性红吞噬法检测细胞吞噬能力，ELISA试剂盒测定细胞IL-1β和IL-6表达，NO含量测定试剂盒测定细胞NO水平，实时荧光定量PCR测定IL-1β、IL-6和iNOS mRNA的相对表达量。结果显示，3μmol/L PM诱导RAW264.7细胞24 h后，巨噬细胞活力与吞噬能力显著降低(P<0.05),NO、IL-1β与IL-6的表达以及相应的mRNA相对表达量均显著下降(P<0.05),巨噬细胞免疫抑制模型成功建立；给予不同剂量(25、50、100μmol/L)的CA干预24 h后，巨噬细胞活力与吞噬能力显著增强(P<0.05),巨噬细胞NO、IL-1β与IL-6分泌水平以及相应的mRNA相对表达量明显升高(P<0.05)。结果表明，PM可以有效建立体外巨噬细胞免疫抑制模型，CA可能通过增强巨噬细胞活力与吞噬能力，促进炎症因子表达发挥免疫增强作用，从而提高机体免疫功能。本研究建立体外巨噬细胞免疫抑制模型，探究CA对PM诱导RAW264.7细胞免疫抑制的调节作用，为将CA开发为新型兽用免疫增强剂提供了理论基础。

为探究新疆动物源携带bla_(CTX-M)且对多黏菌素耐药大肠杆菌的流行特征，采用K-B纸片法对40株猪、羊、骆驼、马、鸡、鹅、鸽、犬和猫源携带bla_(CTX-M)且对多黏菌素耐药的大肠杆菌进行了药物敏感试验，利用PCR方法进行耐药基因、整合子检测以及质粒复制子分型，通过接合试验对多黏菌素耐药表型的水平转移进行了研究。结果显示，这些大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、复方新诺明、头孢曲松、四环素、链霉素、头孢噻肟和庆大霉素的耐药率为82.5%～100%;对氟苯尼考、磷霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢他啶、阿奇霉素、阿米卡星和头孢吡肟耐药率为20.0%～67.5%;对哌拉西林/他唑巴坦、氨苄西林/舒巴坦、头孢西丁和亚胺培南的耐药率为2.5%～10.0%,均为多重耐药。40株受试株中，各耐药基因的检出情况，mcr-1,12.5%;bla_(CTX-M-1),85%;bla_(CTX-M-9),15%;bla_(TEM),60%;floR,70%;tetA,55%;tetG,17.5%;sul2,37.5%;sul1,17.5%;aadA1,35%;strA,32.5%;aac,17.5%;未检出mcr2～10、bla_(CTX-M-2)、bla_(SHV)、strB和tetE。共检出4种质粒复制子型，IncFIB,52.5%;IncHI2,20%;IncN,20%;IncFIA,7.5%。9株携带Ⅰ类整合子，未检出Ⅱ类整合子。40株受试菌均可水平转移多黏菌素耐药表型，但在接合子中未检测出耐药基因、质粒和整合子。结果表明，新疆动物源携带bla_(CTX-M)且对多黏菌素耐药大肠杆菌多重耐药情况严重，耐药基因携带种类多样，均可水平转移多黏菌素耐药表型，应当谨慎使用多黏菌素，以期减缓耐药细菌的发展。

为探究唾液乳杆菌CICC23174株的生物学特性和基因功能，本研究以从鸡肠道分离得到的唾液乳杆菌CICC23174株为研究对象，通过使用二代测序平台HiSeq2000进行测序，利用多种生物学信息软件对原始数据进行组装和优化，并对其基因信息进行功能注释、细菌素和信号肽预测、基因共线性比较和分子进化树分析。基因预测结果表明，唾液乳杆菌CICC23174株基因组大小为203 542 bp, GC含量约为32.84%,基因组特征显示其编码基因1890个，含有3个细菌素和50个信号肽。重要的是，唾液乳杆菌CICC23174株含有27个特有基因，构成4个系统分别为Ⅰ型-CRISPR-Cas基因防御系统、Ⅱ型毒素-抗毒素系统、肿瘤抑制基因和蛋白分泌途径。而且基因共线性分析发现CICC23174株与模式菌株UCC118唾液乳杆菌最为相似，但是16S rRNA分子进化树结果表明CICC23174株与唾液乳杆菌FZJTZ9M6株遗传距离较近。本研究结果为丰富唾液乳杆菌的物种进化库，挖掘唾液乳杆菌潜在的益生功能奠定了基础。

副猪嗜血杆菌是猪的常见病原菌，以异源三聚体形式分泌到胞外环境的细胞致死性膨胀毒素(CDT)是该菌重要的毒力因子，制备完整的重组CDT对于其功能研究至关重要。本研究构建了可用于同时表达CDT 3个亚基的三顺反子重组质粒，优化了完整毒素三聚体的体外组装及纯化方法，并验证了重组三聚体毒素的生物学活性。结果显示，CDT 3个亚基以CdtA/CdtB/CdtC-his方式组合时，按0.1 g/L等体积混合，在PBS中以尿素浓度梯度透析时组装效果最好。构建的重组三顺反子质粒在大肠杆菌中可以同时表达出比例相当的3个CDT亚基，并且均以包涵体形式存在，经包涵体离心粗纯化后，即可用于重组三聚体CDT的组装。组装的三聚体CDT经亲和层析及分子筛层析纯化，得到高纯度的完整毒素。完整毒素可以引起Marc145细胞体积明显膨胀，且分裂周期停滞于G2/M期的细胞比例显著增加。结果表明，本研究建立了一种简单有效的副猪嗜血杆菌重组CDT完整毒素制备方法，所制备的CDT具有良好的生物学活性。

旨在构建一种表达牛纽布病毒(bovine nebovirus, BNeV)VP1蛋白的人5型复制缺陷型重组腺病毒rAd5-BNeV＿VP1,并评价其免疫效果。以优化合成的BNeV VP1基因序列构建重组穿梭质粒pDC316-VP1,利用AdMax腺病毒包装系统包装重组腺病毒rAd5-BNeV＿VP1,并在小鼠中评价其免疫效果。结果显示，通过比对国内BNeV VP1氨基酸序列，根据HEK293细胞密码子偏嗜性优化合成国内流行毒株Bo/LN-13/18/CH株的BNeV VP1序列，序列大小为1 650 bp。将pDC316-VP1与骨架载体pBHGIox＿E1,3Cre共转染入HEK293细胞包装出重组腺病毒rAd5-BNeV＿VP1。RT-PCR扩增出1 650 bp的BNeV VP1基因条带，Western blot及间接免疫荧光反应证实rAd5-BNeV＿VP1能够成功表达VP1蛋白，蛋白大小约为57.5 kDa,表明成功包装出rAd5-BNeV＿VP1且VP1基因能在重组腺病毒中稳定表达，其TCID_(50)为10~(-5.34)/0.1 mL。通过肌肉注射和滴鼻2种途径免疫小鼠均能产生较高的特异性抗体水平，二免7 d后肌肉注射组抗体效价最高可达1∶10~5,滴鼻组抗体效价最高可达1∶10~4;滴鼻组可产生高于PBS组2倍的INF-γ和IL-2(P<0.05)。结果表明，本研究构建表达BNeV VP1蛋白的重组腺病毒rAd5-BNeV＿VP1具有良好的免疫原性，可刺激小鼠快速产生针对BNeV VP1的特异性抗体，为今后BNeV疫苗的研发奠定了基础。

为了建立一种可同时检测并鉴别猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪链球菌(SS)和猪多杀性巴氏杆菌(Pm)多重TaqMan荧光定量PCR检测方法，本试验通过MEGA7.0分析NCBI上已登录的3种病原体基因序列，分别根据PRRSV的ORF6基因、SS的GDH基因和Pm的KMT1基因设计出特异性引物和探针，并对反应条件进行优化。结果显示，该方法能够特异性地检测PRRSV、SS和Pm,对其他病原无交叉反应；对PRRSV、SS和Pm的最低检测浓度分别为9.93×10~2、1.10×10~2和1.07×10~2拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于1.85%。结果表明，该方法特异性强、灵敏性高、稳定性好，可应用于临床检测。

以猪树突状细胞(porcine dendritic cells, pDCs)为模型，探究猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)是否能够对pDCs进行有效感染及对抗病毒细胞因子分泌的影响。采集猪外周抗凝血，分离获得猪外周血单核细胞，经白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)和集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor, GM-CSF)诱导培养获得未成熟树突状细胞，利用倒置显微镜和透射电镜观察其生物学形态，通过蛋白质免疫印迹和激光共聚焦试验检测病毒是否可以对pDCs进行感染，qRT-PCR检测抗病毒因子IFN-α和ISG56的表达。结果显示，成功分离培养得到具有典型树突状细胞形态的pDCs,将PDCoV接种至分离培养得到的pDCs中，PDCoV可以有效感染，可以在pDCs中进行复制并产生感染性的子代病毒颗粒，病毒滴度达到4.4 lgTCID_(50)/0.1 mL。同时检测PDCoV感染pDCs时对抗病毒因子表达的影响，结果表明，在病毒感染pDCs后48 h产生了高水平的IFN-α和ISG56。本研究成功诱导培养得到pDCs,首次证实PDCoV可以在体外感染pDCs,并在细胞中进行有效地复制，pDCs在病毒感染后促进IFN-α、ISG56的分泌来发挥抗病毒免疫效应，为后续研究PDCoV的致病机制提供了新的思路。

基于网络药理学和体外试验，共同探讨人参皂苷Rg1和Re对感染LPS猪空肠上皮细胞IPEC-J2的保护作用。采用网络药理学获取并筛选Rg1、Re缓解肠道屏障损伤的交集靶点，并采用分子对接技术验证网络药理学的预测结果。本试验分组为Control、LPS、Rg1和Re组。观察不同浓度Rg1、Re对IPEC-J2细胞存活率、凋亡率、TEER值、FD4通透性和炎性因子的影响，同时采用荧光定量PCR检测不同浓度Rg1、Re对凋亡相关基因mRNA表达水平的影响。网络药理学结果显示，Rg1、Re预防肠道屏障损伤主要涉及PI3K-Akt、MAPK信号通路等过程。分子对接结果显示，Rg1与所有交集靶点结合能均小于0,而人参皂苷Re仅与SRC靶点的结合能小于0。体外试验显示不同浓度的Rg1、Re预处理均会不同程度地提高LPS处理的IPEC-J2的存活率、TEER值，减少细胞凋亡、FD4通透性降低、炎性因子TNF-α的分泌，表明Re、Rg1可有效降低LPS处理对IPEC-J2细胞的影响。Rg1显著上调MAPK8、MAPK10、HRAS,显著下调MAP2K1、PIK3CG、IL-2、SRC的mRNA表达水平；Re显著上调MAPK8、MAPK10、HRAS、PIK3R1、BCL2基因的mRNA表达水平。这些结果提示，人参皂苷Rg1、Re和含有Rg1、Re的人参皂苷产品在预防仔猪肠道屏障损伤方面值得进一步研究。

鼻疽(glanders)是一种由鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia mallei,B.mallei)引起，主要存在于单蹄兽中的高度传染性人兽共患病，在人类中发生病例较少。自然感染的人类病例呈现地方流行性，主要发生在接触过受感染单蹄兽的人群中。此外，实验室工作人员中也有病例报告。世界动物卫生组织(WOAH)一直在努力进行全球性的鼻疽根除工作，通过全面监测、扑杀受感染动物和采取严格进口措施，该病在北美、澳大利亚和欧洲大部分地区已被根除。然而，随着牲畜的全球性流动，导致世界其他地区的病例增加，非洲、亚洲、中东和南美洲仍然存在区域性流行。近些年来在中东和亚洲暴发的鼻疽疫情为鼻疽重新传入无疫病地区创造了可能。因此，鼻疽被归类为一种重新出现的疾病，再次威胁人类和动物健康。

近年来，我国反刍动物生产中高剂量饲喂酒糟现象较为常见，长期高剂量酒糟使用可使动物出现酒糟慢性中毒，严重制约了我国牛羊产业的健康发展。为探索高剂量酒糟摄入对山羊肾脏组织P53、NF-κB通路的影响，揭示其对山羊肾脏损伤的部分病理机制。参试山羊随机分为对照组、试验组，3只/组。对照组山羊按照《肉羊饲养标准》(NY/T816-2004)进行饲喂，试验组用酒糟代替日粮中75%蛋白质和能量成分的饲粮进行饲喂，试验期为90 d。90 d后采集山羊肾脏组织，用HE染色法观察肾脏组织病理变化，用蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR,RT-PCR)检测山羊肾脏组织中NF-κB、P53通路中相关mRNA和蛋白表达量的变化。结果显示，试验组山羊肾脏肾小球肿大，皮质部毛细血管充血，间质毛细血管出血，肾小管上皮坏死；肾脏髓质部间质毛细血管淤血严重，管腔狭小，内有大量红细胞。与对照组相比，试验组山羊肾脏P53通路中CytC mRNA表达极显著上升(P<0.01),NF-κB通路中NEMO、MIP-2、PTGS2 mRNA表达极显著上升(P<0.01),PTGS2蛋白表达显著上升(P<0.05),p50、p65 mRNA表达显著上升(P<0.05)。结果表明，高剂量的酒糟摄入，可造成山羊肾脏组织损伤，激活P53通路和NF-κB通路诱导山羊肾细胞发生凋亡和炎症反应。

为了研究茶渣对奶牛瘤胃发酵参数和微生物菌群多样性的影响，试验基于体外模拟瘤胃发酵试验技术，采用单因子试验设计，构建了6组不同茶渣添加剂量的发酵体系，其中对照组不添加茶渣，试验Ⅰ～Ⅴ组茶渣添加量分别为饲粮干物质的5%、10%、15%、20%、25%,每个处理组3个重复，发酵24 h后，取发酵体系瘤胃液，采用16S rDNA技术进行瘤胃微生物多样性分析。结果表明：(1)饲粮中添加不同比例的茶渣对奶牛体外瘤胃发酵体系中pH和MCP浓度无显著性影响(P>0.05);随着茶渣添加量的提高，试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组的NH_3-N浓度均显著低于对照组、Ⅰ组(P<0.05);试验Ⅳ组乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸浓度和TVFA含量显著高于对照组和其他各试验组(P<0.05),Ⅴ组的乙酸/丙酸值显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组(P<0.05),Ⅰ、Ⅱ组的乙酸/丙酸值显著低于对照组、Ⅲ、Ⅳ组(P<0.05),但两者之间差异不显著。(2)组间瘤胃微生物菌群组成具有相似性，6组样本在门水平上的主要菌门均为拟杆菌门(Bacteroidota)、厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)、螺旋体门(Spirochaetota)、疣微菌门(Verrucomicrobiota)、Patescibacteria、蓝藻菌门(Cyanobacteria)、纤维杆菌门(Fibrobacterota),茶渣添加量为饲粮干物质的25%时，与对照组相比，试验Ⅴ组拟杆菌门、螺旋体门及纤维杆菌门相对丰度显著升高(P<0.05),厚壁菌门相对丰度显著降低(P<0.05),试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ组差异均不显著(P>0.05)。(3)与对照组相比，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及Ⅴ组的Ace指数、Chao1指数、Shannon指数和Simpson指数差异均不显著(P>0.05)。(4)与试验组相比，脱硫弧菌属(Desulfovibrio)、瘤胃球菌属(Ruminococcus)和克里斯滕森菌科(Christensenellaceae)在对照组富集。综上所述，本试验条件下，饲粮中添加茶渣会降低瘤胃NH_3-N浓度，提高TVFA含量，提高拟杆菌门、螺旋体门及纤维杆菌门的相对丰度，降低厚壁菌门的相对丰度，但不会显著改变瘤胃微生物菌群多样性指数。

CXCL2基因可影响多种疾病并介导炎症和自身免疫的发生，但其在奶牛乳房炎中的作用鲜有报道。为初步揭示CXCL2基因在奶牛乳房炎中发挥的作用，本试验通过转染siRNA特异性序列构建CXCL2基因沉默模型，采用LTA刺激牛乳腺上皮细胞(MAC-T)构建奶牛乳房炎细胞模型，并通过CCK-8法检测CXCL2基因沉默对MAC-T细胞活力的影响；EdU染色法检测CXCL2基因沉默对MAC-T细胞增殖水平的影响；流式细胞术检测CXCL2基因沉默对MAC-T细胞凋亡水平的影响。结果显示，CXCL2基因沉默可使炎性MAC-T细胞活力和增殖能力增加，细胞凋亡数减少。CXCL2基因沉默可通过提高细胞活力、促进细胞增殖和抑制细胞凋亡来减轻LTA诱导的MAC-T细胞的炎症反应，但具体的分子机制仍有待进一步研究。

近年在我国肉鹅养殖主要地区发生了一种以内脏器官表面尿酸盐沉积为主要病理特征，并伴有肌肉、关节和皮下尿酸盐沉积的鹅痛风，为探讨其可能存在的非星状病毒病原感染，采用RT-PCR/PCR方法对来自江苏、四川、广东、福建、山东、河北6省的12份临床典型病例进行了常见水禽病毒的检测，包括鹅星状病毒(GoAstV)、禽呼肠孤病毒(ARV)、禽源星状病毒1型(AAstV-1)、禽源星状病毒2型(AAstV-2)、坦布苏病毒(TMUV)、鹅禽流感病毒(GAIV)、鹅圆环病毒(GoCV)、鹅细小病毒(GPV)、鹅腺病毒(GAV)、鹅出血性多瘤病毒(GHPV),并对分离到的毒株JS2001、JS2002、 JS2003、SC2001进行透射电子显微镜观察和致死胚胎的组织病理学观察。RT-PCR/PCR结果显示，GoAstV阳性率为100.0%,AAstV1阳性率为41.7%,AAstV2阳性率为58.3%,ARV阳性率为50.0%, TMUV阳性率为16.7%,AIV、 GPV阳性率均为8.3%;其中GoAstV+AAstV1+AAstV2三重阳性率为25.0%(3/12),GoAstV+AAstV1/AAstV2+ARV三重阳性率为25.0%(3/12),GoAstV+AAstV1+AAstV2+ARV四重阳性率为8.3%(1/12)。分离病毒的透射电镜图片显示，4个样品均存在直径大小为20～30 nm、无囊膜的球形病毒颗粒；此外，SC2001还存在1种直径大小约为150 nm、有明显可见的衣壳和双层膜结构的病毒颗粒，而JS2003还存在直径大小为100～200 nm的病毒颗粒，在其双层膜表面有大小为10～20 nm规则排列的小颗粒。临床样本致死鹅胚体出血或黄染，局部或全身性水肿，皮下伴有严重的胶冻样液体渗出；致死鹅胚的组织病理切片显示，心脏、肝脏、肾脏出现严重的炎性细胞浸润，肝脏细胞、心肌细胞、肾小管上皮细胞均出现严重的空泡变性坏死。结果提示，当前中国流行的鹅痛风存在多种属鹅星状病毒和其他未知病毒等多病毒感染，或可被称为雏鹅“痛风综合征”,其可能存在的多病毒感染致病机制还有待进一步研究。

为探究菟丝子黄酮(CCFs)对母鼠妊娠期暴露双酚A(BPA)导致的子代成年雌鼠生殖损伤的缓解作用，将50只妊娠母鼠随机分为5组，即空白对照组、BPA模型组、BPA+低剂量CCFs组、BPA+中剂量CCFs组、BPA+高剂量CCFs组，每组10只，分别在孕1～17 d灌胃0.2 mL含有相应剂量药物的玉米油。待仔鼠出生56日龄时，每组随机选取10只子代成年雌鼠，收集血液和卵巢，统计各组成年雌鼠的卵巢指数；检测各组子代成年雌鼠血清中促性腺激素释放激素(GnRH)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)的含量；检测每组卵巢组织中雌激素(E_2)、孕酮(P_4)、雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)水平；检测卵巢组织活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活性；HE染色观察各组卵巢组织学改变；荧光定量PCR法检测卵巢组织Nrf2、NQO1、HO-1 mRNA的表达。结果显示，BPA模型组小鼠卵巢指数升高，GnRH、FSH、LH、E_2和P_4激素水平降低，卵巢组织中ER水平紊乱。BPA对小鼠激素水平的影响可能是通过氧化应激造成的，卵巢组织SOD含量降低，ROS和MDA含量上升，同时，卵巢中HO-1、Nrf2、NQO1 mRNA的表达水平下调。但不同剂量的CCFs可保护雌鼠卵巢功能，下调卵巢指数、激素水平和氧化应激指标与BPA组小鼠趋势相反。研究表明，菟丝子黄酮对母鼠妊娠期BPA暴露引起的生殖损伤有一定的缓解作用，尤其是高剂量菟丝子黄酮的缓解效果相对显著。

为建立鸭腺病毒3型(duck adenovirus 3,DAdV-3)一种基于SYBR Green I染料的荧光定量PCR诊断方法，本试验根据DAdV-3基因组序列中相对保守的Fiber-2基因，通过普通PCR扩增，构建pMD19-Fiber2重组质粒为阳性标准品，在此基础上设计合成特异性引物进行实时荧光定量PCR方法的建立，对其灵敏性、特异性和重复性进行评价，并初步应用于临床样本检测。结果显示，针对DAdV-3的Fiber-2基因建立的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法线性关系良好，相关系数0.998 9;检测DAdV-3的灵敏度为3.6×10~(2 )copies/μL,敏感性比普通PCR检测方法高100倍；该方法对鸭腺病毒1型、鸭疫里默杆菌等其他常见病原均无交叉扩增反应，批内、批间变异系数均小于5%;临床样本检测与普通PCR符合率100%。以上结果表明，所建方法特异性强、敏感性高且重复性好，适用于临床检测，该方法可为DAdV-3的临床诊断、流行病学调查以及防控提供技术支持。

旨在探讨绿原酸(cholorogenic acid, CGA)是否能通过内质网应激减轻犊牛肝细胞的线粒体自噬。从犊牛中分离出的原代肝细胞经处理后进行培养。首先通过检测犊牛肝细胞中的ROS筛选CGA的最佳质量浓度。用1.2 mmol/L FAs刺激犊牛肝细胞12 h,并用CGA处理12 h。试验设置4个处理组(Ctrl、FAs、CGA、CGA+FAs),分别检测线粒体功能相关指标(CypD)以及线粒体自噬相关蛋白(Parkin、LC3)的表达。结果表明，FAs增加了线粒体功能相关指标(CypD)以及线粒体自噬相关蛋白(Parkin、LC3)的表达，而CGA可减轻这些影响。为进一步研究CGA对线粒体功能的影响，用内质网应激诱导剂毒胡萝卜素(thapsigargin, TG)处理犊牛肝细胞12 h。结果显示，TG中线粒体功能相关指标(CypD)以及线粒体自噬相关蛋白(Parkin、LC3)的表达均有所增加，而CGA可减轻这些影响，说明CGA可通过内质网应激下调线粒体自噬。总之，本研究结果表明，CGA是一种有效缓解犊牛肝细胞线粒体自噬的治疗工具。

将猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)流行毒株的S胞外区基因克隆至含有gG基因上、下游同源臂以及抗性筛选基因的转移质粒pUC-ABK中，构建供体质粒pUC-ABK-S,获得线性同源重组片段A-S-K-B。利用Red同源重组技术将线性同源重组片段电转化至含有pPRVBac-GFP~(TK-gE-gI-11k-28k-)的感受态中获得重组pPRVBac-S,最后拯救获得重组病毒rPRV-S。PCR及IFA鉴定结果显示，S胞外区基因成功转录且表达，生物学特性评价结果表明重组病毒能够稳定遗传，为研制猪流行性腹泻病毒活载体疫苗提供了思路。

牛轮状病毒(bovine rotavirus, BRV)是引起犊牛腹泻的主要病原体，世界范围内腹泻样本中BRV感染率为20%～60%,该病的发生对全球的牛养殖业造成严重的危害。目前，尚无BRV特效抗病毒药物和高效的疫苗，早期诊断显得尤为重要。然而，国内外已建立了PCR、等温扩增、免疫组织化学技术、胶体金免疫层析技术、间接免疫荧光法、酶联免疫吸附试验、电化学生物传感器等检测方法，这些方法在BRV防制中发挥了重要作用。通过对现有BRV检测方法进行综述和比较，以期为BRV新型检测方法的建立及防控提供参考。

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)感染家猪和野猪引起的一种出血性、高度接触性传染病。由于目前我国尚无针对ASF的有效疫苗，猪场仍以生物安全防控为主，消毒则是生物安全防控中极其重要的一环。当前，猪场的消毒方式众多，但对消毒效果的评价技术甚少，无法辨别消毒后病毒是否具有感染性，存在巨大的安全隐患。通过对灭活病毒的方式、常见的活病毒鉴别方法及局限性进行综述，并探讨光敏核酸染料结合分子检测技术运用到ASFV灭活效果评价中的可行性，以期对ASF的防制提供帮助。

18日龄AA肉鸡随机分为试验组和对照组2组，每组9只。气管滴注尿素100μL/只(1.2 g/L),每3 d滴注1次，共滴注3次，对照组肉鸡滴注等量的PBS溶液。在最后1次气管滴注后3 d,采集肺脏进行病理形态学分析；采用免疫组化法检测内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)和Ⅱ型精氨酸酶(arginase 2,ARG2)的表达；采用Western blot法检测炎症因子的表达；采用丙二醛(malondialdehyde, MDA)检测试剂盒检测肺组织中MDA水平；采用体内基质胶试验观察尿素对内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)血管生成能力的影响；无菌收集空肠内容物，采用16S rRNA测序鉴定肠道菌群。结果显示，气管内滴注尿素显著促进肺血管重构和丛样病变形成，上调肺血管内皮ARG2的表达，抑制eNOS生成，促进MDA和炎症因子生成；尿素处理显著抑制EPCs血管生成能力；与对照组相比，尿素处理组肉鸡肠道中与促炎反应和氧化应激相关的菌属(Tyzzerella＿3)丰度升高，与抗炎有关的产短链脂肪酸的菌属(Virvallis,Papillibacter和Barnesiella)丰度降低。结果表明，肺脏局部尿素生成增多可诱导炎症反应和氧化应激，引起肺血管内皮和EPCs功能障碍，促进肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension, PAH)形成；肠道微生物群变化可能在PAH进程中发挥作用。

通过滑动运动试验、透射电镜观察和生物被膜抑制试验等分析山苍子油抑制产气荚膜梭菌Ⅳ型菌毛系统(typeⅣpilus system, TFP)功能的作用；建立产气荚膜梭菌感染肉鸡坏死性肠炎模型，测定各组肉鸡体质量变化、小肠炎性反应、细菌载量和组织病理学变化以探究山苍子油对肉鸡坏死性肠炎的防治作用。结果显示，16 mg/L山苍子油不影响细菌生长，但可显著抑制产气荚膜梭菌Ⅳ型菌毛介导的滑动运动和生物被膜形成(P<0.05);与产气荚膜梭菌感染肉鸡相比，山苍子油处理能够有效缓解肉鸡的小肠病变，肠道细菌载量降低1.3个log_(10)(P<0.05),降低肉鸡料肉比(P<0.05),提高饲料转化率；山苍子油通过调控紧密连接蛋白的表达促进产气荚膜梭菌感染肉鸡肠道屏障功能的修复，显著抑制肠道炎性因子水平(P<0.05),进而促进肠道健康。结果表明，山苍子油能够抑制产气荚膜梭菌TFP生物学功能，修复感染肉鸡肠道屏障，发挥抗产气荚膜梭菌感染作用，为肉鸡坏死性肠炎感染防控提供新型策略。

选取鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)LP78蛋白，将LP78基因克隆至pMD19-T载体上后，采用腺病毒Ad-Max系统将pMD-LP78重组克隆质粒连接到穿梭载体pDC316-mCMV-EGFP上构建重组穿梭质粒pDC-LP78,将pDC-LP78重组穿梭质粒与腺病毒大骨架pBHGlox(delta)E1、3cre共转染HEK 293A细胞包装成重组腺病毒pBH-LP78,RT-PCR及Western blot鉴定HEK 293A细胞系包装的重组腺病毒pBH-LP78。测定病毒滴度；再通过腿部肌肉免疫接种构建的重组腺病毒pBH-LP78,并用ELISA方法检测免疫鸡血清中的特异性抗体和细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-6)的分泌情况。PCR、双酶切鉴定和测序结果显示，成功构建了重组克隆质粒pMD-LP78和重组穿梭质粒pDC-LP78;RT-PCR及Western blot结果显示，目的基因在HEK 293A细胞中稳定表达；ELISA结果显示，血清中LP78特异性抗体和细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-6)的分泌量极显著升高(P<0.01),表明pBH-LP78重组腺病毒能刺激鸡机体产生体液和细胞免疫应答。结果表明，成功构建了MS重组腺病毒载体疫苗pBH-LP78,其可有效引起鸡机体产生体液和细胞免疫应答，为MS新型重组腺病毒载体疫苗的研发奠定了基础。

旨在探讨H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)NP蛋白对小鼠的免疫效果，为研制AIV疫苗奠定基础。试验将H9N2亚型病毒NP基因的扩增产物连接到pET-32a表达载体中，构建重组质粒pET-32a-NP,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)细胞，IPTG诱导后，通过SDS-PAGE和Western blot验证蛋白表达，用NP重组蛋白免疫小鼠，测定小鼠血清中IgG抗体和脾细胞培养上清多细胞因子分泌情况评价其免疫效果。结果显示：NP基因编码区序列全长1 497 bp, NP重组蛋白以可溶性和不可溶性蛋白两种形式存在，Western blot结果可见特异性条带。免疫小鼠后血清产生IgG结合抗体，抗体效价为1∶40 000,与对照组相比，IL-2、IL-5、IL-13分泌量极显著提高(P<0.001),IL-6分泌量显著提高。IL-4和IL-12 p70分泌量与对照组相比升高，却没有显著性差异。而免疫组与对照组相比IL-1β、IL-18、GM-CMF、TNF-α、IFN-γ分泌量被抑制，但差异不显著(P>0.05)。结果表明，NP重组蛋白是一种良好的免疫原，为流感疫苗的深入研究奠定了基础。

产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)可引起人类食物中毒和许多非食源性人类胃肠道(GI)疾病。编码其肠毒素(Clostridium perfringens enterotoxin, CPE)的基因cpe若位于染色体的菌易引起食物中毒，cpe位于质粒的菌与非食源性GI疾病相关，因此本研究应用PCR检测、单位点序列分型分析(SLST)、耐热性测定，综合分析cpe~+菌的cpe定位。结果显示，双重PCR检测29株cpe~+菌仅扩增出600 bp的cpe目的条带，未检测出IS1470、IS1470-like、IS1151序列；通过sod、sodFPF PCR检测及SLST分析推测所有检测菌的cpe可能均位于染色体上；7-1和21-3的活菌及芽胞耐热性均高于42-2,推测两者cpe可能位于染色体，而42-2 cpe可能位于质粒上。结果为产气荚膜梭菌引起食物中毒和非食源性疾病的诊断和防控以及cpe的位置与所致疾病相关性的研究提供材料和科学依据。

非洲猪瘟是对全球养猪业危害最严重的病毒性传染病，目前尚无有效疫苗。p54蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)的重要结构蛋白之一，参与病毒的吸附和侵入，是非洲猪瘟血清学诊断的重要靶标之一。本研究采用无标签的重组p54蛋白作为包被抗原，建立了ASFV p54间接ELISA抗体检测方法，优化了检测条件，组装成了试剂盒。根据对374份阴性猪血清的检测，确定了本试剂盒检测的临界值，并利用不同猪病原阳性质控血清进行了敏感性、特异性和稳定性研究。结果显示，本方法检测阴/阳性血清的临界值为0.250;敏感性血清质控品的最小检出限为1∶1 600倍，与ASFV阳性血清、猪伪狂犬病病毒阳性血清、猪繁殖与呼吸病毒综合征病毒阳性血清、猪圆环病毒2型阳性血清、猪细小病毒阳性血清和猪抗大肠杆菌阳性血清等6种特异性质控血清均无交叉反应；试制的3批试剂盒批间和批内变异系数均小于10%。试剂盒在2～8℃贮存9个月，特异性、敏感性保持不变。以上试验结果表明，本试剂盒具有良好的敏感性、特异性和稳定性，与OIE推荐的p72阻断ELISA抗体检测试剂盒具有较高符合率，为非洲猪瘟临床血清学诊断和抗体监测提供了良好的技术支持。

狂犬病(rabies)是由狂犬病病毒(rabies virus, RABV)引起的一种严重人畜共患的急性接触性传染病，其致死率为100%,每年全球约6万人死于该病，其中亚洲和非洲发生最多。RABV是狂犬病的致病病原体，由结构蛋白和负链RNA构成。狂犬病一旦发病致死率为100%,目前疫苗接种仍是预防和控制狂犬病最为有效的策略。RNA疫苗是新一代核酸疫苗，其安全性好，有效性高，设计灵活，研发周期短，且借助高效递送系统，可刺激机体快速产生强烈免疫应答。RNA疫苗这一特点对于潜伏期短且病死率高的狂犬病的防控具有重要应用价值。现对RNA疫苗及狂犬病RNA疫苗的研究进行系统梳理，以阐明其研究现状及应用前景。

为研究橄榄苦苷(oleuropein, OP)对LPS诱导小鼠视网膜损伤的保护作用，将SPFKM小鼠随机分成5组，分别为LPS模型组(LPS)、对照组(Control)、OP高、中、低质量浓度(800、400、200 mg/kg)处理组，连续灌胃21 d,从第14天开始，各组小鼠灌胃30 min后，在异氟烷气体辅助麻醉下，小鼠腹腔注射2.0 mg/kg LPS,对照组小鼠腹腔注射2.0 mg/kg生理盐水，连续7 d,建模完成后，检测小鼠血清中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)活性及白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α (TNF-α)含量，采用免疫组化SP法检测甘油三脂脂肪酶(PNPLA2)在小鼠视网膜各层结构上的分布特点并观察视网膜组织形态学变化。结果显示，OP使小鼠血清中SOD、CAT和GHS-Px活性显著升高(P<0.01),IL-1β和TNF-α含量下降(P<0.05),视网膜中PNPLA2表达量升高(P<0.05,P<0.01);OP各剂量组均能提高SOD、CAT和GHS-Px活性，降低IL-1β和TNF-α含量，改善LPS对小鼠视网膜的病理损伤，提高视网膜中PNPLA2表达量，具有保护LPS诱导视网膜损伤的作用。

乳腺纤维化对奶牛养殖业造成巨大的经济损失，本研究的目的是探究β-谷甾醇(BSS)对TGF-β1诱导的小鼠乳腺纤维化是否具有缓解作用。试验分为空白对照组、模型组、模型+药物处理组，以乳腺灌注TGF-β1的方式构建小鼠乳腺纤维化模型，待模型构建完24 h收集小鼠乳腺组织。应用HE染色和Masson染色评价乳腺组织病理结构的变化情况；应用荧光定量PCR方法检测乳腺组织中collagenⅠ、α-SMA、vimentin (VIM)等纤维化相关蛋白的mRNA水平变化；应用Western blot和免疫荧光技术检测collagenⅡ、E-cadherin (E-cad)和α-SMA用于评价乳腺组织中纤维化蛋白表达情况。结果显示，BSS预处理后可以显著缓解TGF-β1诱导的小鼠乳腺病理损伤，显著抑制collagenⅠ、α-SMA、VIM mRNA水平的升高，显著抑制collagenⅡ、α-SMA蛋白水平的升高和E-cad蛋白水平的降低。BSS通过抑制纤维化表型指标的升高有效缓解纤维化病变的发生发展。

污蝇杆菌(Wohlfahrtiimonas chitiniclastica)是一类新出现的罕见人畜共患致病菌，可侵袭动物机体并引起化脓性病症。2018年贵州某猪场送检了2只患病仔猪，呈典型的副猪嗜血杆菌(H.parasuis)混合感染病症。无菌采集病猪肺脏组织，进行细菌培养，通过16S rRNA测序检测到污蝇杆菌。为了解该病原特性，对该菌进行分离纯化培养。从培养特性、革兰染色、生化试验、16S rRNA序列分析、电镜观察等方面对该菌进行系统鉴定；采用药敏试验测定其药物敏感性；通过人工感染小鼠确定其致病性。结果显示，该分离菌株的16S rRNA基因与污蝇杆菌参考株核苷酸相似性介于95.9%～97.6%,与参考株KBL006(NR＿133893.1)遗传距离最近；分离株在血平板、LB固体培养基等的生长良好，在高盐培养基上不生长；生化鉴定结果显示分离菌株的生化特性与污蝇杆菌符合；扫描电镜观察显示该菌菌体长宽为1.30μm×0.53μm;药敏试验结果显示分离株对头孢菌素类、多黏菌素B及部分青霉素、氨基糖苷类药物较为敏感，对四环素类、大环内酯类及喹诺酮类等药物耐药；小鼠致病性试验结果显示分离菌株对小鼠具有致死能力。本试验成功分离到1株猪源污蝇杆菌并对其病原生物学特性进行了初步研究，结果为污蝇杆菌病的病原检测和防控治疗提供了重要参考依据。

为建立高效检测牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)的血清学方法，本研究设计优化LSDV RNA聚合酶30亚基(RPO30)蛋白的密码子，构建其原核表达质粒pET-25b-RPO30,并进行诱导表达和阴离子纯化。纯化后的RPO30蛋白可以被LSDV的阳性血清识别，具有良好的反应原性。用纯化的RPO30蛋白免疫BALB/c小鼠，并将免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合，筛选到能够稳定分泌抗体且具有竞争效果的杂交瘤细胞株1H1。以重组RPO30蛋白为包被抗原，经反应条件的优化，建立了基于RPO30蛋白的竞争ELISA(cELISA)抗体检测方法。本研究建立的cELISA检测方法的最适抗原包被质量浓度为1 mg/L,用含5%牛血清白蛋白(BSA)的PBST作为封闭液37℃孵育2 h,待测血清的最适稀释度为1∶2,1H1抗体稀释度为1∶2 000,兔抗鼠HRP-IgG稀释度为1∶4 000,最佳显色条件是37℃反应15 min。当检测样品的1-S/P≥0.55,判定结果为阳性；当检测样品的1-S/P<0.55,判定结果为阴性。利用该方法检测了LSDV、牛传染性鼻支气管炎病毒(IBRV)、牛支原体(M.bovis)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛布鲁杆菌(B.abortus)、口蹄疫病毒(FMDV)阳性血清，结果显示除了LSDV检测结果阳性外，其他病原的检测结果都是阴性，说明本方法特异性强。利用本试验建立的cELISA检测有免疫背景的临床血清200份，结果显示，其可用于临床疫苗免疫效果的评估。本研究基于重组RPO30蛋白建立的cELISA方法操作简单、特异性强、敏感性高、重复性好，为LSDV的检测和预防提供了可靠的技术支持。

旨在探究饲粮中添加猴耳环提取物对黄羽肉鸡肠道黏膜组织结构、肠道炎性损伤及肠道菌群的影响。选用240只1日龄黄羽肉鸡随机分为A、B、C和D组，其中A、B和C组基础日粮分别添加0.5、1.0、2.0 g/kg的猴耳环提取物，D组为空白对照组，试验期为70 d。分别于试验第20、40和70天采集鸡十二指肠和空肠，测定各试验组十二指肠和空肠绒隐比、空肠组织炎性细胞因子和相关通路基因表达水平。并采集试验第70天各试验组盲肠内容物，采用16S rDNA测序分析微生物菌群结构。试验结果表明：饲粮中添加0.5和1.0 g/kg的猴耳环提取物可显著增加黄羽肉鸡十二指肠和空肠的绒隐比及空肠组织中紧密连接蛋白CLDN1和CLDN5的基因表达水平(P<0.05),改善肠道黏膜组织结构和物理屏障功能；饲粮中添加猴耳环提取物可显著降低黄羽肉鸡空肠组织中IL-1β、IL-8和TNF-α等炎性因子及TLR4、MyD88和NF-κB等炎性通路的基因表达水平(P<0.05),减少肠道组织的炎性损伤；饲粮中添加猴耳环提取物可显著增加黄羽肉鸡盲肠中副拟杆菌属和普雷沃菌属等有益菌群的丰度，并显著降低盲肠中变形菌门等有害菌群的丰度(P<0.05),从而改善肠道菌群结构。综上，饲粮中添加猴耳环提取物能够显著改善黄羽肉鸡的肠道黏膜组织结构和物理屏障功能，减少肠道组织炎性损伤，并改善盲肠微生物菌群结构，促进肠道健康，为将猴耳环开发为安全、有效的饲料添加剂提供科学支撑和理论依据。

为了解四川地区流行的猪腹泻病毒类型及其分子流行病学特征，本研究用荧光定量PCR对2021—2023年四川省多个地区来源的猪腹泻样本进行检测；用RT-PCR对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪A群轮状病毒(PoRVA)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪捷申病毒(PTV)进行分型鉴定，并分析其基因变异性、遗传进化特征和重组事件。结果显示，PEDV、PoRVA、PDCoV和PTV在四川地区仍呈现流行趋势，其总体阳性率分别为：14.2%(40/281)、13.2%(37/281)、15.6%(44/281)和12.5%(35/281),以PEDV与其他病原混合感染最为常见。本次检测共获得6株G2b型PEDV、3株G3型PDCoV、3株G9P[13]型PoRVA、1株G3P[13]型PoRVA、3株5型PTV、1株9型PTV。6株PEDV毒株与CV777、DR13、KPEDV-9、Chinju99、KNU-0801、AJ1102和LW/L等7个疫苗毒株相比在COE区和S1D中和表位区存在多个氨基酸突变位点；其中PSCLZ01和PSCMY04株在进化树中单独形成一个小支。3株PDCoV与四川往年流行毒株的遗传进化距离较近，但与其相比存在6～48个氨基酸的突变。4株PoRVA与早期疫苗株LLR相比，VP4基因有104～108个氨基酸变异，VP7基因有25个共同的氨基酸变异；从进化树上看，RSCMY01/G3P[13]的VP7基因与黑龙江毒株LNCY同属一个分支，但其VP4基因又与四川SCYA-C7聚为一支，表明该株PoRVA可能是在不同基因型毒株跨省际间传播过程中发生了基因重配。值得注意的是，本次检出PTV-5型和PTV-9型样本中，其他腹泻病毒均为阴性，表明上述两种基因型PTV可能是猪腹泻的重要病原。此外，PEDV PSCLZ01株和PDCoV PCSCMY02株的S基因都发生了重组事件，且亲本毒株来自国内外不同地区。上述结果揭示了近年四川地区流行的主要猪腹泻病毒类型及其基因多样性和遗传变异规律，丰富了四川地区猪腹泻病原的分子流行病学资料，为本地区猪腹泻病的防控和净化提供了重要的理论依据。

尼帕病毒(Nipah virus, NiV)是一种人兽共患病毒，能引发人类和动物的脑炎及严重呼吸系统症状，且存在传入我国风险。目前尼帕病毒病(NVD)的相关传播因素较多，但各因素的实际作用效果存在争议，本研究借助meta分析手段，旨在确定NVD当前致死率以及主要传播手段，为我国控制该病的输入，制定防控应急预案提供参考。通过检索截至2022年12月31日在Pubmed、Embase、Web of knowledge、中国知网数据库、维普中文科技期刊数据库、万方数据库发表的文献，选择纳入含NiV脑炎致死率(CFR)与风险因素的横断面、队列和病例对照研究的文献。结果显示检索并筛选后纳入Meta分析的文献共25篇，分析显示NiV脑炎致死率为64.6%(95%CI:60.8～68.2;I~2=96.8%)。亚组分析结果显示，爬树(OR=1.43;95%CI:1.05～1.96),在夜间居住所附近见过蝙蝠(OR=2.38;95%CI:1.74～3.25)及直接接触椰枣树液(OR=6.01;95%CI:4.07～8.89)、香蕉(OR=2.25;95%CI:1.31～3.85)或猪(OR=11.87;95%CI:1.15～122.23)与患者患NiV脑炎显著相关。结果表明，NiV脑炎存在高致死率现象，而爬树、夜间居住所附近见过蝙蝠以及接触猪、香蕉和椰枣树液会增加患NiV脑炎的风险。为防范NiV传播，我国应加强疫情监测，开展教育宣传，采取保护性措施。