牛呼吸道疾病(bovine respiratory disease, BRD)是牛场中重要的疾病之一，给我国养牛业造成了严重的经济损失。多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)和溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)是与BRD相关的主要细菌性病原。为分离纯化到目前Pm和Mh流行的优势毒株，建立合适的小动物攻毒模型，给BRD疫苗研制提供有效的疫苗候选株。本研究首先从患BRD牛的病料中进行Pm和Mh的检测、分离鉴定，确定基因型且评估分离株对小鼠的致病性，筛选合适的疫苗候选株。结果显示，本研究在2022年11-12月从我国3个省份的6个牛场采集到48份患有BRD的牛鼻拭子，PCR检测结果显示Pm的检出率为47.9%(95%CI:33.3～62.8),Mh的检出率为37.5%(95%CI:24.0～52.6),Pm/Mh共感染的检出率为18.8%(95%CI:8.9～32.6)。在阳性样本中分离纯化得到12株Pm,经血清型鉴定均为A型多杀性巴氏杆菌(PmA);分离到11株Mh,其中7株为A1型，4株为A6型，且在同一头牛的鼻拭子中同时分离到A1型和A6型的Mh。随后建立PmA和Mh的小鼠感染模型，筛选到PmA和Mh的强毒株分别是PmA GDP001株和Mh GDM019株，并且测定PmA GDP001株对小鼠的LD_(50)为10~(1.1) CFU,Mh GDM019株对小鼠的LD_(50)为10~(8.2) CFU。本研究揭示了我国部分地区牛场中BRD主要细菌性病原的流行病学，分离到了重要的病原(PmA和Mh),并且鉴定了分离株的血清型，且通过小鼠感染致病模型筛选到毒力强的PmA和Mh菌株，为BRD多联多价疫苗的研发提供了良好的疫苗候选株。