为了解河北省部分地区猪源大肠杆菌的致病性、耐药性及其生物学特性，本研究从猪场采集的仔猪腹泻粪便进行大肠杆菌分离鉴定，并对分离菌株进行药敏试验、生物被膜形成能力检测、致病性试验、毒力基因检测、耐药基因检测以及系统进化分群鉴定。结果显示，从腹泻仔猪粪便中共分离到35株致病性大肠杆菌，其中多数为多重耐药菌，至少对3种抗生素耐药。分离菌对阿莫西林（88.57%）、氨苄西林（88.57%）、强力霉素（88.75%）、磺胺异恶唑（77.17%）、林可霉素（100%）和氯霉素（100%）表现出严重耐药；所有分离菌株均携带毒力基因，共检测到5种毒力基因，包括EAST1基因（77.14%）、eaeA基因（17.14%）、stx2e基因（5.71%）、LT基因（2.86%）、STb基因（2.86%）;并且分离菌株携带多种耐药基因，共检出bla_TEM-1（65.71%）、bla_CTX-M（20.00%）、tetA（82.86%）、tetB（14.29%）、aadA2（17.14%）、aac（6′）-Ib（14.29%）、qnrS（17.14%）、sul1（40.00%）、sul2（34.29%）、floR（60.00%）10种耐药基因；系统进化分群分析表明，分离菌株B1群和A群所占比例较高；小鼠致病性试验显示，35株分离菌株感染小鼠后均呈现不同程度的致病性。本研究为河北省猪源致病性大肠杆菌的有效治疗药物选择和防控策略制定提供了科学依据。