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2024年, 第44卷, 第10期　
刊出日期：2024-10-15
  

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  • 热烈庆祝吉林大学兽医学科创建120周年暨《Animals and Zoonoses》创刊揭幕
    刘效森, 郭建顺
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2083-2083.
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    <正>2024年9月21日，吉林大学兽医学科创建120周年暨中国人民解放军原军需大学（兽医大学、农牧大学）校庆日庆祝大会在吉林大学和平校区举行。吉林大学兽医学科历史悠久，可追溯到1904年创办的北洋马医学堂，也是我国历史上第一所专门的军事兽医学校。回望120载来时路，兽医学科走出了一条凝心聚力、奋勇争先的发展之路，经历过中国人民解放军兽医大学、农牧大学、军需大学、吉林大学农学部的历史变迁。
  • 新城疫、血清4型和8型禽腺病毒病二联三价嵌合型病毒样颗粒的构建及鉴定
    郭春红, 李金斗, 丁佳欣, 冯嘉轩, 陈凯楠, 姜峰, 丁壮
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2087-2093+2115. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.01
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    基于昆虫杆状病毒表达系统和新城疫病毒样颗粒载体平台，采用间接免疫荧光、Western blot和透射电镜等方式，构建一种表面展示NDV HN蛋白、FAdV4 Fiber-2蛋白、FAdV-8a Fiber蛋白和FAdV-8b Fiber蛋白的二联三价嵌合型病毒样颗粒(ND-FAdV-4/8a/8b cVLPs)。结果显示，成功构建了表达FAdV-8a Fiber和FAdV-8b Fiber蛋白的重组杆状病毒rBV-c8aFiber和rBV-c8bFiber。此外，ND-FAdV-4/8a/8b cVLPs各组分蛋白均正确表达，是一种约100 nm、具备囊膜和纤突的纳米颗粒，为新城疫、禽腺病毒病的防控提供了一种安全的病毒样颗粒新型疫苗候选株。
  • 表达非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组猪瘟兔化弱毒疫苗的构建及其免疫原性评价
    李树稳, 杨晓柯, 管翔雨, 张广柱, 黄淑坚, 李永锋, 仇华吉
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2094-2100+2122. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.02
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    通过同源重组构建pHCLV-p54感染性克隆，将其转染至SK6细胞盲传拯救出重组病毒rHCLV-p54,并测定其在体外的遗传稳定性、生长曲线，同时免疫家兔评价其免疫效果。结果显示，E183L基因能够在重组病毒中稳定遗传，但是插入的外源基因影响C株的复制；家兔免疫试验结果显示，重组病毒rHCLV-p54能够诱导家兔产生抗ASFV的特异性抗体。结果表明，表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)p54蛋白的重组病毒rHCLV-p54具有良好的免疫原性，有望作为候选疫苗进一步评价。
  • 猪流行性腹泻病毒CH/GSMQ/2022株的分离鉴定与致病性
    梁志博, 张中旺, 张莉萍, 于瑞明, 潘丽, 王永录, 曾巧英, 刘新生
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2101-2109+2233. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.03
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    采集了我国甘肃省民勤县某养殖场疑似猪流行性腹泻发病猪的粪便和肠道内容物，通过RT-PCR方法对疑似阳性病料进行检测后，利用Vero细胞对其进行体外分离培养，对成功分离的病毒进行实验室鉴定，对其全基因组序列进行遗传进化分析，并通过动物回归试验对其致病力进行评价。结果显示，该猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）阳性病料处理液接种Vero细胞盲传至第4代时可观察到典型的合胞体病变现象，第6代病毒滴度达到10-4.75 TCID50/mL;电镜观察可以看到直径约为100 nm、圆形、表面有明显囊膜和纤突的PEDV样病毒粒子；全基因组测序分析表明该毒株全长28 085 bp,与经典毒株CV777代表的G1亚型毒株亲缘关系较远（同源性为96.6%）,与G2b型毒株BJ-2011-1、IA1、USA/Colorado/2013和WELL同源性较高（为98.6%）,表明该毒株属于G2b型流行毒株。动物回归试验结果显示，5日龄的仔猪在攻毒后12 h即出现呕吐、急性水样腹泻、消瘦和精神沉郁等临床症状，于24 h内症状加重而死亡，剖检后可以观察到感染仔猪的胃部肿胀，小肠高度臌气、肠壁薄而透明，内部还有未消化完的乳汁凝块。结果表明，本试验成功分离鉴定到1株PEDV G2b型流行毒株，并对其全基因组序列和致病性进行了分析，为今后针对PEDV基因功能、致病机制的研究及疫苗的开发提供了研究材料。
  • 猪伪狂犬病病毒LAMP-Taqman检测方法的建立与应用
    李宇, 石磊, 时国强, 张莹露, 董振国
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2110-2115. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.04
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    基于环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）和荧光定量PCR技术建立一种猪伪狂犬病病毒（pseudorabies virus, PRV）LAMP-Taqman快速检测体系。针对PRV保守序列设计LAMP引物组，并将环引物修饰荧光基团和淬灭基团作为Taqman探针，以实际阳性样本和重组质粒为模板，测试体系组分添加量、特异性、灵敏度和重复性；同时，使用市售恒温检测试剂盒平行测试38份实际样本，验证LAMP-Taqman检测体系的实际检测效果。结果显示，各组分最佳终浓度为：PRV-FIP/BIP 0.8μmol/L,Bst DNA聚合酶0.7 U/μL,TaqDNA聚合酶0.24 U/μL,dNTPs 1.6 mmol/L,MgSO4 7.2 mmol/L;体系特异性好，不与其他病毒样本产生交叉反应，梯度样本的线性相关系数（R2）为0.995,重复性测试的变异系数小于3.000%,最低检出限可达2.81×10～2拷贝/μL;对实际样本的测试结果与市售恒温荧光法检测试剂完全一致。结果表明，基于LAMP-Taqman方法建立的PRV检测体系特异灵敏、稳定准确，是一种适用于猪群PRV精准检测的可靠技术方法。
  • 基于猪伪狂犬病病毒gD蛋白间接ELISA方法的建立及其在免疫评估中的应用
    刘一宁, 喻晓航, 郑金, 杨振宇, 谢诗晴, 林美婷, 梁彤彤, 罗烨, 余兴龙
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2116-2122. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.05
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    以哺乳动物细胞HEK-293F表达猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)gD重组蛋白作为包被抗原，采用棋盘滴定法优化确定出间接法gD-ELISA(gD-iELISA)各项技术参数；用gD-iELISA检测211份临床猪血清的抗体水平并分析与中和抗体水平的一致关系。结果显示，抗原包被质量浓度为0.90 mg/L;待检血清1∶100稀释，37℃孵育30 min;山羊抗猪IgG-HRP抗体1∶55 000稀释，37℃孵育30 min; TMB底物37℃显色20 min。gD-iELISA能检出1∶6 400稀释的PRV阳性血清；用gD-iELISA检测CSFV、PRRSV、PCV-2、PEDV和FMDV阳性血清其结果均呈阴性，该方法与以上阳性血清不存在交叉反应；gD-iELISA与商品试剂盒阴阳性血清的符合率为95.26%,批内和批间变异系数均低于10%。相关性分析表明，gD抗体水平与中和抗体效价的相关系数(r)显著大于gB抗体水平的相关性，并且gD抗体水平与中和抗体效价有很好的线性关系。结果表明，gD-iELISA比gB-iELISA更适用于PRV的疫苗免疫评估。因此，该方法在PRV的免疫防控中将会有很好的应用前景。
  • 致羔羊脑膜炎型大肠杆菌ompA基因缺失菌株的构建及其致病性
    胡卉琪, 崔续媛, 闫乃天, 郑学博, 张福慧, 胡俊英, 王新平
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2123-2129. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.06
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    应用CRISPR/Cas9技术构建NMGCF-19ΔompA菌株，并应用小鼠模型确定ompA基因在NMGCF-19菌株感染小鼠中的作用及其机制。结果显示，与野生型菌株比较，ompA基因敲除菌株感染小鼠的海马体神经元细胞坏死明显降低，且不呈局灶性；同时，脑组织中菌体检出量明显减少，紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的mRNA水平和蛋白表达水平均明显提高。结果表明，ompA基因敲除后NMGCF-19菌株其致病性降低，该毒力基因ompA在NMGCF-19侵袭小鼠血脑屏障的过程中发挥重要作用。
  • 1例致滇金丝猴肠炎大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析
    陈雅静, 于婧, 杨劲宇, 张文公, 吴玉, 刘凇昊, 杨静, 李小兵, 江康峰
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2130-2135+2265. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.07
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    通过将昆明市某动物园1例因呕吐、口鼻流食糜、腹部鼓胀死亡滇金丝猴的胃脏、空肠、直肠组织样品的病原进行分离纯化，利用生化鉴定、PCR鉴定、药敏试验、致病性试验、血清型鉴定及对分离菌进行耐药基因和毒力基因分析，对病原种类和生物学特性进行研究。结果显示，从胃脏、空肠和直肠中分离鉴定到的病原为大肠杆菌，血清型均为O127,属于肠致病性大肠杆菌，且均对头孢西丁耐药，对庆大霉素、加替沙星和环丙沙星敏感。3株致病菌均携带blaTEM、blaCTX-M 2种耐药基因以及opmA、opmC 2种毒力基因。本试验结果为大肠杆菌致滇金丝猴肠炎的防治提供了一定的参考和数据支持。
  • 兔源罗伊乳杆菌的分离鉴定及益生效果评价
    程雨, 谢坤, 姜艳平, 崔文, 李佳璇, 王晓娜, 乔薪瑗, 唐丽杰, 李一经, 王丽
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2136-2144+2293. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.08
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    利用MRS-CaCO3 固体平板培养法从兔肠道内容物中分离并培养乳酸菌，通过形态学观察、革兰染色、生理生化特征观察、16S rDNA序列分析和ERIC-PCR分析进行鉴定，对符合乳酸菌特性的菌株进行生物学特性、抗逆性能、体外黏附性能、体内定植能力以及安全性等方面的研究。结果显示，共分离得到4株兔源罗伊乳杆菌；4株兔源罗伊乳杆菌均具有乳酸菌的典型生物学特征，对胃肠道内常见的病原菌具有一定的抑制作用，其发挥抑菌作用的主要物质为细菌素；对氯霉素、利福平及红霉素较敏感，对胃肠道环境以及高温具有一定的耐受能力；可在家兔体内成功定植且安全。本试验为开发预防和治疗兔肠道疾病的乳酸菌制剂奠定了基础。
  • 猪肺炎支原体TH-1株的分离鉴定及其传代致弱株的筛选
    李真亚, 赵晓康, 杨红玉, 李允, 孔嫄嫄, 李泳, 贾荣玲
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2145-2152+2242. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.09
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    从河南省南阳市多家猪场无菌采集40份疑似猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp）发病猪的肺脏和气管组织，通过病原分离培养、菌落观察、PCR鉴定并测序，共分离到6株Mhp。各分离株在固体培养基上呈现出圆形、边缘整齐、似露滴样中央有颗粒且隆起的菌落形态。PCR可以扩增到各个分离株P36目的基因条带，扩增产物测序后与NCBI中登录的ATCC 25934参考株（J株）P36基因序列比对，其同源性为99%以上。CCU试验测定TH-1株的生长滴度可达1011 CCU/mL,具有较高的生长滴度。选择TH-1株进行体外高温（40℃）连续传代获取不同代次的传代株（P50、P100、P150）。其中，TH-1 P150代株在40℃生长温度下仍具有较高的生长滴度(1010 CCU/mL)。将TH-1 P1、P50、P100、P150经气管注射感染25日龄断奶仔猪，毒力评估结果显示：P1代感染组有4头猪肺脏（4/5）出现典型“肉样或虾肉样”病变，肺脏HE病理切片出现严重的单核细胞、淋巴细胞的浸润，气管扫描切片显示纤毛出现杂乱、缠绕、变短脱落病理变化；P150代感染组没有出现典型Mhp特征性病变，肺脏HE和气管扫描切片也没有出现微观病理变化，这表明TH-1是1株强毒力菌株，而对其经过不断的体外传代，其毒力不断下降，TH-1 P150株是1株低毒力菌株。TH-1 P150作为弱毒疫苗株具有较好的免疫原性，其免疫攻毒后的平均肺炎病变减少率为83.3%。结果表明，本试验采用体外高温连续传代的方法，获得了1株生长滴度高的低毒力菌株（TH-1 P150）,且其免疫原性较好，为进一步Mhp弱毒疫苗研发奠定了基础。
  • 基于RAA-CRISPR/Cas13a的禽流感病毒检测方法的建立
    乐翔云, 冯之航, 樊彦莉, 张强, 蔡一村, 熊炜, 王翔, 董庆利, 李健, 薛俊欣, 王艳
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2153-2158+2171. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.10
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    对NCBI文库公布的120条不同亚型禽流感病毒的M基因序列进行分析，筛选得到一处高保守片段并进行重组酶介导等温核酸扩增(recombinase-aided amplification, RAA)引物和crRNA的设计。待测样品先进行RAA核酸扩增，再将扩增产物转移至有规律成簇间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR)/Cas13a检测体系中，通过监测该体系中荧光值的变化情况进行结果判定。使用梯度稀释(10～6～10～0拷贝/μL)的标准阳性质粒以及其他7种禽病病毒验证方法的灵敏度和特异性，并利用本试验所建方法和国标荧光RT-PCR方法对50份临床样品(21份阳性样品、29份阴性样品)进行检测以评价方法的检测性能。结果显示，本试验建立的检测方法灵敏度为10～2拷贝/μL,较普通RAA方法灵敏度提高了2个数量级；能特异性检出AIV,不与NDV、IBV、ILTV、IBDV、ALV、AMPV、AAV-1发生交叉反应；与国标荧光RT-PCR方法相比，该方法检测的特异性、准确性和一致性分别为100%、95.24%和98.00%。结果表明，本试验建立了检测AIV通用型的RAA-CRISPR/Cas13a快速诊断技术，其在37℃条件下60 min内即可完成检测，具有快速、灵敏、特异等优势，为AIV的现场快速检测提供了手段。
  • 猪源副猪链球菌的分离鉴定及全基因组测序分析
    王云飞, 陆童, 董文龙, 沙万里, 闫满, 李国江
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2159-2164. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.11
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    从我国吉林地区患有肺炎的病猪分离到优势菌株，对分离菌株进行16S rRNA鉴定，确定为副猪链球菌(Streptococcus parasuis,S.parasuis),命名为WYF-8B。药敏纸片扩散法检测结果显示，WYF-8B对杆菌肽、磺胺间甲氧苄啶、林可霉素、红霉素、磷霉素、阿奇霉素、青霉素、多西环素、复方新诺明、磺胺异恶唑、环丙沙星、恩诺沙星、四环素、苯唑西林、庆大霉素、头孢唑林、氨苄西林均耐药；对氟苯尼考，氯霉素高度敏感。生化鉴定结果显示，WYF-8B可发酵水杨酸、麦芽糖、乳糖、蔗糖、七叶苷、葡萄糖；不发酵甘露醇、尿素、棉子糖、木糖、阿拉伯糖、山梨醇。利用第二代全基因组测序技术对WYF-8B耐药基因型进行研究，结果发现其携带对大环内酯类抗生素的抗性基因Mef(E)、ErmB,对β-内酰胺类抗生素的抗性基因pbp2b、pbp1a、pbp2x,对氟喹诺酮类抗生素的抗性基因gyrA、parC、grlB,对氨基糖苷类抗生素的抗性基因ANT(6)-Ia、AAC(6')-Ie-APH(2'')-Ia、ANT(9)-Ia、APH(3')-Ⅲa,对林可酰胺类抗生素的抗性基lnuB、lmrC、lmrD,对四环素类抗生素的抗性基因tetM,对杆菌肽的抗性基因bcrA,结果显示耐药表型与测序结果的耐药基因型相符。WYF-8B毒力因子研究结果显示，WYF-8B共携带13个毒力因子(pavA、fbp54、clpP、cps4I、wbtB、cpsI、tufA、galE、hasC、groEL、wbtL、gndA、wbtF),其作用机制主要为促进细菌的扩散、转移、定居、抗吞噬及不被宿主免疫细胞识别等。药物敏感试验结果为研究副猪链球菌的临床用药提供参考，耐药表型与毒力因子为新型药物及疫苗的研发奠定基础。
  • GPR120介导NF-κB和MAPK调控LTA诱导的Mac-T细胞的保护作用
    王斯琦, 周佩瑶, 牟泉宙, 宛麟, 李鑫丽, 李杨, 何兴丽, 王昭元, 王梓, 高梓强, 赵志辉, 沈冰蕾
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2165-2171. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.12
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    采用脂磷壁酸(lipophosphatidic acid, LTA)刺激Mac-T细胞，通过Western blot检测核因子κB(NF-κB)和促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)信号通路关键蛋白的表达水平和磷酸化水平，以及上游的关键作用因子TLR4和MyD88蛋白表达水平；EDU法检测细胞增殖水平；流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果显示，激活G蛋白偶联受体120(G protein-coupled receptors 120,GPR120)能显著降低Mac-T细胞中LTA诱导NF-κB(P65和IκBα)(P<0.01)和MAPK(JNK、ERK、p38)(P<0.01)的磷酸化水平；抑制GPR120能够上调Mac-T细胞中LTA诱导NF-κB(P65和IκBα)(P<0.01)和MAPK(JNK、ERK、p38)(P<0.01)的磷酸化水平；激活GPR120可以极显著的缓解由LTA诱导的TLR4和MyD88的上调(P<0.01);抑制GPR120会显著加剧由LTA诱导的TLR4和MyD88的上调(P<0.05);LTA刺激会导致Mac-T细胞增殖水平呈减弱趋势，凋亡率显著增高，而激活GPR120基因可极显著增加细胞活性(P<0.01),促进细胞增殖，显著减少细胞凋亡(P<0.05)从而缓解了由LTA对Mac-T细胞的损伤；LTA刺激可使细胞凋亡率极显著增加(P<0.01),激活GPR120基因则可极显著(P<0.01)的逆转LTA所诱导的Mac-T细胞的凋亡率的提高；而抑制GPR120基因后可增强LTA对细胞凋亡的促进作用(P<0.05),表明激活GPR120基因可以减弱由LTA诱导的炎性Mac-T细胞导致的凋亡率增加。结果表明，GPR120可通过介导TLR4和MyD88表达抑制NF-κB/MAPK炎症通路活化调控炎症并能够促进细胞增殖。
  • LAL对奶牛脂肪细胞脂合成及脂解的调节作用
    逯璐, 都书钰, 杨赫, 许秋实, 徐闯
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2172-2178. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.13
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    检测健康奶牛及酮病奶牛脂肪组织中调节脂合成相关分子乙酰CoA羧化酶-1(ACC1)、磷酸化转录调节因子-α(CEBPα)、二酰基甘油酰基转移酶2(DGAT2)、固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARγ)和脂解相关分子脂滴包被蛋白-1(PLIN1)、甘油三酯脂酶(ATGL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)、p-HSL的蛋白表达以及目的蛋白溶酶体酸性脂肪酶(lysosomal acid lipase, LAL)的表达；研究体外培养原代牛脂肪细胞过表达LAL,并添加异丙肾上腺素(ISO)构建脂肪细胞脂解模型，采用Western blot检测脂肪细胞中脂合成及脂解相关蛋白表达的情况。结果显示，与健康奶牛相比，酮病奶牛脂肪组织中的LAL表达量显著低于健康奶牛(P<0.01)。临床型酮病奶牛脂肪组织中脂合成相关蛋白ACC1、CEBPα、DGAT2、SREBP1、PPARγ的蛋白表达水平显著降低，而脂解相关蛋白PLIN1、ATGL、p-HSL的蛋白表达及磷酸化水平显著升高，结果表明酮病奶牛脂肪组织脂质合成作用被抑制，脂解作用增强。体外试验结果显示，ISO可下调脂合成相关分子的蛋白表达水平，也会上调脂解相关分子的蛋白表达及磷酸化水平。过表达LAL的奶牛脂肪细胞基础脂合成和ISO诱导下的脂合成蛋白的含量显著升高，而基础脂解和ISO诱导的脂解蛋白含量显著降低。体外试验结果表明，LAL在奶牛脂肪细胞中能抑制脂肪细胞的脂分解，并促进脂肪细胞的脂合成。
  • 四川牦牛PPARGC1B基因SNP位点筛选及生物信息学分析
    陈宣旭, 蒋欣怡, 彭靖皓, 李靖, 苗丰帅, 赵志辉, 于海滨, 赖伟中, 姜平, 林紫薇
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2179-2189. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.14
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    采用PCR产物直接测序法检测四川牦牛过氧化物酶增殖激活受体γ辅激活因子-1β(peroxisome proliferator-activated receptor gamma, coactivator 1 beta, PPARGC1B)基因SNP位点，同时通过PCR扩增和测序获得四川牦牛PPARGC1B基因编码区，并对编码蛋白和mRNA二级结构进行了生物信息学预测分析。结果显示，本试验通过四川牦牛PPARGC1B基因的单核苷酸多态性检测结果，筛选出E9-189 A→C、E9-387 G→A、E9-542 C→T和E9-554 T→C共4个外显子SNP突变位点，其中E9-387 G→A和E9-554 T→C位点与四川牦牛肉品质性状中的剪切力和背膘厚具有显著相关性；对4个突变位点的生物信息学分析结果显示，PPARGC1B蛋白属于酸性、不稳定、非跨膜和非分泌型亲水蛋白，有卷曲螺旋结构，不存在信号肽和跨膜区域，主要在细胞核中发挥生物学作用，有106个磷酸化位点和1个糖基化位点，1个保守结构RRM结构，二级结构主要α-螺旋和无规则卷曲为主；PPARGC1B基因突变前后蛋白结构未发生变化，mRNA二级结构出现了显著差异。结果表明，PPARGC1B基因SNP位点可作为影响四川牦牛肉品质性状的分子标记，并应用于肉牛的标记辅助选择，同时对PPARGC1B基因相关SNP位点的生物信息学分析也为深入探讨该基因的生物学功能奠定基础。
  • 氯化钴对原代牛脂肪细胞缺氧相关蛋白及胰岛素信号通路的影响
    杨童, 范云珲, 郑晰丹, 逯璐, 王卓, 李晴, 杨程, 徐闯, 许秋实, 陈媛媛
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2190-2196. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.15
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    运用CCK-8法检测不同浓度CoCl2（0、50、100、200、300、400μmol/L）及其不同处理时间（0、6、12、24、48 h）对脂肪细胞活力的影响，并选择最适宜的处理条件；采用Western blot方法检测不同浓度CoCl2（0、50、100、200、400μmol/L）对脂肪细胞低氧及其下游关键分子蛋白表达的影响。结果显示，CoCl2处理组浓度越高，脂肪细胞活力越低，其中300、400μmol/L处理组细胞活力显著下降（P<0.01）,200μmol/L处理组细胞活力最高。与对照组相比，200μmol/L CoCl2处理组低氧及其下游信号通路关键分子：缺氧诱导因子1-α（hypoxia inducible factor 1-alpha, HIF-1α）、葡萄糖转运蛋白4（recombinant glucose transporter 4,GLUT4）、血管内皮生长因子受体1（vascular endothelial growth factor receptor 1,FLT-1）、脯氨酰羟化酶2（proline hydroxylase2,PHD2）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）的蛋白表达水平显著上调（P<0.01）。与对照组相比，200μmol/L CoCl2处理组中脂解代谢关键酶脂肪甘油三酯脂肪酶（adipose triglyceride lipase, ATGL）、围脂滴蛋白1（perilipin 1,PLIN1）、蛋白激酶A（protein kinase A,PKA）和300、400μmol/L处理组中激素敏感性甘油三酯脂肪酶（hormone-sensitive lipase, HSL）磷酸化的水平高于其他各组（P<0.01）。200μmol/L处理组CoCl2介导的缺氧上调了胞内磷脂酰肌醇激酶（phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K）的蛋白表达和蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）的磷酸化水平。结果表明，添加200μmol/L CoCl2能够促进原代牛脂肪细胞缺氧相关蛋白和脂解代谢酶及胰岛素相关信号蛋白的表达。
  • 板蓝根多糖通过TLR3/TRIF通路抑制PRRSV复制
    吴文义, 胡雪岩, 张云天, 张志龙, 李倩楠, 金钺, 杨明凡, 张红英
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2197-2203. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.16
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    通过Western blot、ELISA方法检测板蓝根多糖(Radix isatidis polysaccharide, IRPS)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)感染的3D4/21/CD163细胞TLR3/TRIF天然免疫途径和Ⅰ型干扰素分泌的影响，并使用TLR3激动剂Poly(I:C)处理进一步验证IRPS对PRRSV感染引起的免疫抑制的影响。结果显示，PRRSV感染18、24 h时TLR3、TRIF、IRF3、IRF7蛋白水平及Ⅰ型干扰素分泌均显著下调，同时IRPS对这一过程具有显著的抑制作用；TLR3激动剂Poly(I:C)能够缓解PRRSV感染引起的TRIF、IRF3、IRF7蛋白水平下调和IRF3、IRF7磷酸化水平降低，且IRPS与Poly(I:C)具有协同作用。结果表明，IRPS能够通过TLR3/TRIF途径缓解PRRSV感染引起的免疫抑制。
  • 小反刍兽疫病毒通过TLR2/MyD88/NF-κB信号通路介导LGD-2细胞炎症反应
    孙甜甜, 穆芸, 邝永胜, 袁书艺, 陈绍红, 郭富城, 刘铀
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2204-2212+2308. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.17
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    采用MTT试验、间接免疫荧光试验(IFA)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)观察小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus, PPRV)在山羊肾细胞(LDG-2)的增殖，采用Western blot和qRT-PCR观察PPRV感染对TLR2、MyD88、NF-κB信号通路相关因子及其下游炎症因子表达水平的影响。结果显示，PPRV感染后36 h,细胞存活率显著降低并产生明显细胞病变，PPRV-N基因mRNA表达水平显著上调；PPRV感染细胞中TLR2、MyD88、p-p65、p-IκBα表达水平、p-p65/p65和p-IκBα/IκBα比值以及下游炎症因子TNFα、IL-1β、IL-4和IL-10的mRNA表达水平均显著升高。用C29阻断PPRV诱导的TLR2激活，PPRV感染细胞中PPRV-N的mRNA、TLR2、MyD88、p-p65、p-IκBα表达水平及p-p65/p65和p-IκBα/IκBα比值、下游炎症因子IL-1β和IL-4的mRNA表达水平均显著降低。结果表明，PPRV感染可激活TLR2/MyD88/NF-κBα信号通路，促进病毒的复制和扩散；阻断PPRV诱导的TLR2激活，可抑制MyD88/NF-κB信号通路和病毒复制。
  • 复方阿苯达唑亚砜浇泼剂的处方筛选及含量测定
    赵琪, 霍雨柔, 张剑旭, 徐诗瑶, 张嘉斌, 李波, 王禹霏, 杨玉洁, 顾海泉, 王凯, 李乾学
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2213-2220. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.18
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    以二甲基亚砜和1,2-丙二醇为溶剂制备阿苯达唑亚砜（albendazole sulfoxide, ABZSO）、伊维菌素（ivermectin, IVM）复方浇泼剂；采用中心复合设计响应面法优化浇泼剂的处方；利用Franz扩散池法考察浇泼剂体外透皮性能；采用高效液相色谱法测定2种药物的渗透量。结果显示，浇泼剂的最佳配方为IVM 0.5%、ABZSO 5%、二甲基亚砜52%、丙二醇39%,余量添加无水乙醇至100%。IVM累计渗透量最高分别可达20.78μg/cm2,ABZSO累计渗透量最高分别可达249.02μg/cm2。2种药物的体外释放模型符合一级动力学方程。1～100 mg/L ABZSO、IVM与峰面积呈良好的线性关系；2种药物的含量测定方法的精密度、稳定性RSD<2%。结果表明，ABZSO复方浇泼剂的制作工艺简单，稳定性良好，易于浇泼；所建立的高效液相色谱法操作简便，准确性高，可用于浇泼剂中ABZSO和IVM的含量测定。
  • 木通与蒲公英提取物对断奶仔兔肠道氧化应激的改善作用
    张俊秋, 陈雨, 修子清, MUSA Mgeni, 蒋小雨, 吕景智, 孙雅望
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2221-2233. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.19
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    选用35日龄、体质量(1.22±0.08) kg的伊拉兔120只，根据双因素设计随机地分为4组：C组(基础饲粮)、D组(基础饲粮+0.5%蒲公英提取物)、A组(基础饲粮+0.5%木通提取物)、DA组(基础饲粮+0.5%蒲公英提取物+0.5%木通提取物),其中，C组为对照组，其余3组为试验组，每组10个重复。预饲期1周，试验期4周。试验结束后采集血清、肝脏组织、空肠和回肠黏膜样本，并测定各项指标。结果显示：(1)在试验期第1周，C组仔兔的平均日增重显著低于D组和A组(P<0.05),料重比显著高于D组和A组(P<0.05)。(2)木通提取物极显著降低了肝脏和血清中的活性氧(reactive oxygen species, ROS)含量(P<0.01),蒲公英提取物极显著降低了血清ROS含量(P<0.01),且分别在肝脏和血清中存在显著和极显著交互作用；木通和蒲公英提取物能有效降低组织和血清中氧化损伤标志物含量，但增加了肝脏组织中丙二醛(malondialehyde, MDA)的含量。(3)木通提取物显著提高了血清中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)活性和总抗氧能力(total antioxidant capability, T-AOC)(P<0.01),并极显著降低了肝脏中的T-AOC(P<0.01),显著降低空肠和肝脏中超氧化物歧化酶的活性(P<0.05);蒲公英提取物显著提高血清中T-AOC和空肠中GSH-Px活性(P<0.05);木通和蒲公英提取物对血清中的过氧化物酶具有显著互作效应(P<0.05)。(4)木通提取物显著和极显著的降低了Kelch样结合蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)和NAD (P) H醌氧化还原酶1 (NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1)基因在空肠的表达量；木通和蒲公英提取物对回肠NQO1、血红素加氧酶1和超氧化物歧化酶2有显著互作效应(P<0.05),对Keap1有极显著互作效应(P<0.01);木通提取物显著降低NQO1基因在肝脏组织表达量(P<0.05)。结果表明，蒲公英和木通提取物能够减少体内ROS含量并缓解氧化损伤，并通过Nrf2-Keap1信号通路调节抗氧化基因表达和抗氧化物酶活性来维持肠道氧化还原稳态，缓解肠道氧化应激。
  • TIGAR对酮病奶牛脂肪组织氧化应激的影响
    王卓, 方欣馨, 李贺翔, 许秋实, 徐闯
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2234-2242. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.20
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    本试验分为体内试验和体外试验两部分。体内试验选取健康和酮病奶牛各10头，采集脂肪组织。ELISA结果显示，与健康奶牛相比，临床酮病奶牛脂肪组织中丙二醛（malonaldehyde, MDA）含量和活性氧（reactive oxygen species, ROS）活性较高，谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）活性较低。Western blot结果显示，与健康组相比，酮病组脂肪组织中TIGAR蛋白表达水平显著上升，Nrf2-HMOX1信号通路蛋白表达水平显著上调，氧化应激相关指标SOD1、过氧化氢酶（catalase, CAT）和谷胱甘肽-S-转移酶（glutathione S-transferase, GST）的蛋白质水平显著上升。体内试验结果表明，酮病奶牛体内脂肪组织发生氧化应激。体外试验在分离培养牛原代脂肪细胞的基础上，分别通过腺病毒沉默或过表达TIGAR以及体外采用添加H2O2作用2 h,构建牛脂肪细胞氧化应激模型，来检测TP53诱导细胞凋亡调节因子（TP53 induces glycolysis and apoptosis factors, TIGAR）对牛脂肪细胞氧化应激的影响。Western blot结果显示，与对照组相比，H2O2组表现为氧化应激增强，核相关因子2（nuclear correlation factor 2,Nrf2）通路中Nrf2及血红素加氧酶1（hemeoxygenase-1,HMOX1）表达降低，相关氧化应激蛋白表达量降低；与H2O2组相比，过表达TIGAR加H2O2组Nrf2-HMOX1的蛋白表达水平上调，相关氧化应激蛋白SOD1、CAT和GST表达量上升。体外试验结果表明，过表达TIGAR缓解H2O2诱导的脂肪细胞氧化应激。与H2O2组相比，沉默TIGAR加H2O2组，Nrf2-HMOX1信号通路及氧化应激相关蛋白SOD1、CAT和GST的蛋白表达下调。结果表明，沉默TIGAR加剧H2O2给脂肪细胞带来的氧化应激。
  • 基于PPARα信号通路探究蓝刺头黄酮对高脂血症大鼠的降血脂作用
    刘睿宁, 张剑柄, 张慧忠, 王涵, 郝普国, 郭宇, 王宇, 赵红霞
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2243-2250. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.21
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    将50只8周龄雄性高脂血症SD大鼠随机分为5组，每组10只。按蓝刺头黄酮(total flavonoids from echinops latifolius tausch, TFET)剂量，分别设高剂量组(200 mg/kg)、中剂量组(100 mg/kg)、低剂量组(50 mg/kg)、阳性对照组(辛伐他汀20 mg/kg)和模型组(灌胃蒸馏水0.8 mL/d,并给予给予高脂鼠粮),连续给药45 d。另取10只8周龄健康雄性SD大鼠作为空白对照组，灌胃蒸馏水0.8 mL/d,同时给予普通鼠粮。试验过程中，模型组、阳性对照组、TFET各剂量组大鼠给予高脂鼠粮，对照组大鼠给予普通鼠粮。对各组大鼠分别连续45 d灌服相应浓度的TFET、辛伐他汀和蒸馏水，并检测大鼠相关血脂生化指标、抗氧化指标和PPARα通路相关基因表达量。结果显示，高剂量TFET能极显著降低TC、TG、LDL-C含量，并极显著提高HDL-C含量；中剂量TFET能极显著降低TC、TG含量，显著降低LDL-C含量；低剂量TFET能显著降低TC、LDL-C含量。高、中、低剂量TFET均能极显著降低提高SOD活性；高、中剂量TFET能极显著降低MDA含量；高剂量TFET能极显著提高T-AOC活性。高剂量的TFET能极显著提高大鼠肝脏中PPARα、CYP7A1、CPT-1基因表达量；中剂量的TFET能显著提高CYP7A1、CPT-1基因表达量，能显著提高PPARα基因的表达量；低剂量的TFET能极显著提高CYP7A1基因表达量，显著提高CPT-1基因表达量。结果表明，TFET对高脂血症大鼠具有抗氧化和降血脂的作用，其机制可能与通过激活PPARα及其下游相关基因促进脂肪酸β氧化有关。
  • 诃子鞣酸通过MAPK/NF-κB通路调控LPS诱导的奶牛子宫内膜组织炎症反应的作用
    杨英, 刘鑫煜, 赵非凡, 郭文瑞, 高瑞峰
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2251-2259. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.22
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    分离并体外培养奶牛子宫内膜组织，用1.0 mg/L脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激1 h后与诃子鞣酸(Chebulagic acid, CA)(12.5、25.0、50.0、100.0 mg/L)共培养，然后收集不同处理组的奶牛子宫内膜组织进行试验。应用ELISA和实时荧光定量PCR法检测TNF-α、IL-6、IL-1β的蛋白分泌水平和基因表达水平；HE染色观察奶牛子宫内膜组织损伤程度；应用免疫荧光技术鉴定高迁移率蛋白-1(high mobility grope boxprotein 1,HMGB-1)、透明质酸酶结合蛋白-2(hyaluronidase binding protein 2,HABP-2)的表达；Western blot检测ERK、p65和IκBα的磷酸化表达水平。结果显示，经CA处理LPS诱导的奶牛子宫内膜组织炎症反应模型后，TNF-α在6、24 h和IL-6在6、12、24 h的蛋白分泌水平显著下降，IL-1β和IL-6在6、9、12 h和TNF-α在6 h的基因表达水平均显著下调；HE染色切片发现，LPS+CA组相比LPS组均有所改善，上皮细胞脱落程度减轻，腺体和血管结构较为完整，炎性细胞浸润程度降低，无明显的坏死或出血；LPS+CA组也显著下调了HMGB-1和HABP-2的表达；LPS+CA组的ERK、IκBα和p65的磷酸化水平显著降低。结果表明，CA能够通过抑制LPS诱导的奶牛子宫内膜组织炎症反应中MAPK和NF-κB通路的激活，下调其奶牛子宫组织中炎症因子的表达水平从而减轻LPS诱导的奶牛子宫内膜组织炎症反应。由此推断，CA可能是一种潜在的奶牛子宫内膜炎的治疗药物，值得进一步的研究和开发。
  • 中国荷斯坦奶牛ACOX1基因多态性及其与乳品质性状的相关分析
    郝育嵘, 赵志辉, 游涛, 于海滨, 李光辉, 姜平, 林紫薇
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2260-2265. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.23
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    采用PCR扩增技术和直接测序法对83头中国荷斯坦奶牛群体中酰基辅酶A氧化酶1(acyl-CoA oxidase 1,ACOX1)基因的SNP位点进行检测；使用SPSS 25.0软件对ACOX1基因的遗传多态性位点基因型与中国荷斯坦奶牛乳品质性状进行关联分析。结果显示，在ACOX1基因的第3个内含子中发现了1个SNP位点即I3-2 267 G→C,属于中度多态，并在群体中处于哈代温伯格平衡；关联分析发现，该SNP位点与奶牛乳体细胞含量和校正奶量显著相关。结果表明，ACOX1基因I3-2 267 G→C位点可作为中国荷斯坦奶牛乳品质性状的分子标志物，为中国荷斯坦奶牛品质性状研究提供参考。
  • 斑蝥黄通过缓解卵巢氧化应激损伤增强生殖激素分泌对怀乡鸡产蛋率的影响
    孙卓, 谢婷婷, 赵壮志, 赵君文, 张安婷, 吴江, 效梅, 安立龙
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2266-2276. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.24
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    360只26周怀乡母鸡随机分为10组，其中，常温下饲养5组（NC、NT1、NT2、NT3、NT4）,高温条件下饲养5组（HC、HT1、HT2、HT3、HT4）,分别在基础日粮中添加0、4、6、8、10 mg/kg斑蝥黄（canthaxanthin, CX）。预试期2周，正试期9周。结果显示，高温均降低了怀乡母鸡产蛋率（P<0.05）,导致卵巢损伤出血严重，降低了血清与卵巢的超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px）的活力（P<0.05）,降低了卵巢FSH、LH、P4、E2水平（P<0.05）,降低了卵巢FSHR、LHR、ER、PR mRNA的表达量（P<0.05）,提高了卵巢丙二醛（malonaldehyde, MDA）的含量（P<0.05）;在常温与高温环境添加CX均提高了产蛋率（P<0.05）,提高了血清与卵巢SOD、GSH-Px酶的活力（P<0.05）,降低了血清与卵巢MDA的含量（P<0.05）),提高了卵巢FSH、LH、P4、E2水平及FSHR、LHR、ER、PR mRNA的表达量（P<0.05）;其中，常温日粮中添加6 mg/kg CX和高温日粮中添加8 mg/kg CX产蛋率最高，血清和卵巢组织抗氧化能力最强，卵巢组织的完整性最好，卵巢生殖激素分泌及生殖激素受体表达均较好。结果表明，在常温和高温条件下，日粮中添加CX均显著提高血清和卵巢的抗氧化能力，缓解卵巢损伤，促进生殖激素的分泌及生殖激素受体表达，提高产蛋率；在高温环境前中后期日粮添加CX,对卵巢组织损伤修复、生殖激素分泌、受体均未恢复到常温水平；CX对鸡产蛋率、卵巢组织结构、生殖激素及受体表达的作用受温度影响，高温条件使产蛋率、卵巢组织抗氧化能力、生殖激素水平及受体表达最佳值的CX添加剂量要高于常温条件相应指标最大值的CX添加剂量。
  • 真核细胞应激颗粒的产生与病毒逃逸策略概述
    郭萌, 史晨曦, 魏战勇, 祖少坡
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2277-2282+2300. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.25
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    真核细胞受到氧化应激、热休克或病毒感染等外界不利因素刺激时，会迅速启动细胞应激反应，停滞自身翻译，导致大量应激颗粒(stress granules, SGs)的产生，使细胞处于自我保护的休眠状态。SGs是一种动态、无膜的蛋白-RNA聚集物，在维持细胞内环境稳态、调控宿主基因表达的过程中发挥重要作用。SGs在抵抗病毒复制过程中也发挥重要作用，既可以停滞宿主蛋白翻译系统避免病毒“劫持”,也能够招募天然免疫相关的宿主因子，共同抵抗病毒复制。然而，病毒在长期进化中已经具备多种逃逸SGs抗病毒的策略，以便为自身复制提供更好的细胞内环境。因此，对SGs产生、抗病毒机制以及病毒进化过程中逃逸SGs抗病毒的策略进行综述，以期为抗病毒药物的研发提供新的视角。
  • 冠状病毒的反向遗传技术及其应用进展
    梁纪元, 张钰灿, 侯锐锋, 张粤, 夏永豪, 袁晋, 祖少坡, 魏战勇
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2283-2293. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.26
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    近年来，由冠状病毒引起的疫病呈现频发、暴发和新发的趋势，造成人类和动物严重的呼吸和消化系统疾病，危害全球公共卫生安全和畜禽健康养殖。目前，对冠状病毒致病、跨种传播等机制的认识不足制约了抗冠状病毒药物和疫苗产品的研制。反向遗传操作技术可用于病毒蛋白功能和病毒致病、复制机制的解析，也是减毒、基因标记疫苗和抗病毒药物研发中不可或缺的技术工具。因冠状病毒因基因组较大、结构复杂，其反向遗传操作技术曾长期发展滞后，但是随着分子生物学手段的不断更新，多种新的构建策略应运而生。通过重点介绍冠状病毒反向遗传操作系统的构建策略及其在冠状病毒传播、致病机制、疫苗研发和药物筛选中的应用，为冠状病毒感染的防控提供有利的工具。
  • 猪细小病毒感染引起宿主信号通路变化的研究进展
    周敏, 汤德元, 曾智勇, 王彬, 黄涛, 胡雯雯, 毛茵茗, 周飘, 何松
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2294-2300. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.27
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    猪细小病毒(porcine parvovirus, PPV)是猪细小病毒病(porcine parvovirus infection, PPI)的病原体，感染PPV是引起猪繁殖障碍的重要原因，给养猪业带来严重危害。本病临床以妊娠母猪产死胎、木乃伊胎、弱胎和发生流产等为特征，其发病机制尚未被完全了解，且目前尚无有效的治疗药物。近年来，人们已对PPV感染宿主后其信号通路变化做了大量地深入研究，许多相应的信号通路传导机制也已发现，但仍缺乏对其系统性的探究，通过对PPV感染后引起的相关信号通路变化的研究进行综述，以期为研究PPV的致病机制和新型药物开发提供新的思路。
  • 野生反刍动物戊型肝炎病毒流行病学研究进展
    孙通宝, 吴晨雨, 任照文, 李娜, 王娅妮, 王晓虎, 王秋悦
    中国兽医学报. 2024, 44(10): 2301-2308. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.28
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    戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)是引起急性病毒性肝炎最常见的病原体之一。目前，HEV有8种不同的基因型，其中HEV基因1型和基因2型仅感染人，而基因3型和4型则是人畜共患的病毒。HEV在一些国家主要由通过食用受污染或未煮熟的猪肉引发传播，家猪和野猪通常被认为是HEV的主要宿主。然而，在过去的几年里，越来越多的证据表明，包括野鹿、野山羊等其他几种野生反刍动物也存在HEV感染的风险。因此，了解影响野生反刍动物与人类之间传播的风险因素，对于确定它们在HEV流行病学周期中的作用至关重要。对野生反刍动物HEV流行病学的最新进展进行综述，旨在为HEV的科学防制提供依据。
2025年, 第45卷, 第04期
刊出日期：2025-04-15
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