猪伪狂犬病病毒LAMP-Taqman检测方法的建立与应用

李宇, 石磊, 时国强, 张莹露, 董振国

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中国兽医学报 ›› 2024, Vol. 44 ›› Issue (10) : 2110-2115. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.04

猪伪狂犬病病毒LAMP-Taqman检测方法的建立与应用

  • 李宇, 石磊, 时国强, 张莹露, 董振国
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摘要

基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)和荧光定量PCR技术建立一种猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)LAMP-Taqman快速检测体系。针对PRV保守序列设计LAMP引物组,并将环引物修饰荧光基团和淬灭基团作为Taqman探针,以实际阳性样本和重组质粒为模板,测试体系组分添加量、特异性、灵敏度和重复性;同时,使用市售恒温检测试剂盒平行测试38份实际样本,验证LAMP-Taqman检测体系的实际检测效果。结果显示,各组分最佳终浓度为:PRV-FIP/BIP 0.8μmol/L,Bst DNA聚合酶0.7 U/μL,TaqDNA聚合酶0.24 U/μL,dNTPs 1.6 mmol/L,MgSO4 7.2 mmol/L;体系特异性好,不与其他病毒样本产生交叉反应,梯度样本的线性相关系数(R2)为0.995,重复性测试的变异系数小于3.000%,最低检出限可达2.81×10~2拷贝/μL;对实际样本的测试结果与市售恒温荧光法检测试剂完全一致。结果表明,基于LAMP-Taqman方法建立的PRV检测体系特异灵敏、稳定准确,是一种适用于猪群PRV精准检测的可靠技术方法。

关键词

伪狂犬病病毒 / 环介导等温扩增技术 / Taqman / 检测方法

中图分类号

S852.65

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李宇, 石磊, 时国强, 张莹露, 董振国. 猪伪狂犬病病毒LAMP-Taqman检测方法的建立与应用. 中国兽医学报. 2024, 44(10): 2110-2115 https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.10.04

基金

石家庄市高层次科技创新创业人才基金资助项目(05202001)

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