2024年, 第55卷, 第09期　
刊出日期：2024-09-15

  

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  FUT6促进胃癌细胞增殖、侵袭及迁移

  韩亚娟, 王红梅, 王强强, 韩正全

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1097-1104. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.001

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  目的 探究α1,3岩藻糖基转移酶-Ⅵ（FUT6）在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法 利用GEPIA网站、癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库分析FUT6在胃癌中表达情况，并分析其与肿瘤免疫的关系。通过Western blot检测胃癌细胞（MKN-45、MGC-803、BGC-823、SGC-7901、AGS）及胃黏膜上皮细胞（GES-1）中FUT6蛋白的表达水平，选取FUT6表达量最高的胃癌细胞进行后续实验。采用瞬时转染方式在SGC-7901细胞中构建FUT6下调的胃癌细胞系，然后通过CCK-8法检测细胞增殖能力，Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力，划痕实验检测细胞迁移能力，Western blot检测细胞转染效率及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）变化。结果 FUT6在多种癌症中表达异常，在胃癌中表达显著升高（P<0.05），在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织（P<0.05）;FUT6表达与胃癌免疫细胞、免疫刺激因子、免疫抑制因子、趋化因子及趋化因子受体和免疫检查点抑制剂具有相关性（P<0.05）。与GES-1细胞相比，FUT6在胃癌细胞（MKN-45、MGC-803、BGC-823、SGC-7901、AGS）中表达增加，差异具有统计学意义（P<0.05）。敲低FUT6后，SGC-7901细胞增殖率显著下降（P<0.05），细胞迁移距离减少（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达量升高，N-cadherin、Vimentin蛋白表达量降低（P<0.05）。结论 FUT6在胃癌中高表达，且参与胃癌患者免疫微环境。敲低FUT6可抑制胃癌细胞增殖、侵袭与迁移，此过程可能与EMT有关。
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  IQGAP3在宫颈癌中的表达及其对患者预后和免疫浸润的影响

  芦娇娇, 甄帅, 江玉

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1105-1112. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.002

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  目的 探讨在宫颈癌中IQ结构域GTP酶激活蛋白3(IQ motif-containing GTPase activating protein 3, IQGAP3)的表达水平及其与患者预后、免疫浸润水平和生物学功能之间的关系。方法 使用基因表达谱交互式分析（Gene Expression Profiling Interactive Analysis, GEPIA）数据库分析宫颈癌组织和正常对照组织中IQGAP3 mRNA的表达水平。利用人类蛋白质图谱（Human Protein Atlas, HPA）数据库提供的免疫组化切片探索了IQGAP3蛋白在宫颈癌组织及正常对照组织中的表达情况。采用免疫组化检测宫颈癌组织芯片中IQGAP3蛋白表达，并采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。从癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas, TCGA）数据库获得了306例宫颈癌的RNAseq数据以及相应的临床信息，对IQGAP3相关的差异基因进行了富集分析，包括基因本体论（gene ontology,GO）和京都基因和基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）富集分析。采用EPIC算法对宫颈癌组织中免疫细胞的浸润情况进行分析，并分析IQGAP3高表达组和低表达组免疫检查点相关基因的表达情况。结果 与正常对照组织比较，宫颈癌组织中IQGAP3的mRNA及蛋白高表达（P<0.05）。Kaplan-Meier生存曲线分析显示，IQGAP3蛋白高表达组宫颈癌患者总生存期及无进展生存期明显降低（P<0.05）,IQGAP3表达水平的升高与淋巴结转移、较高的T分期及复发之间存在明显的相关性（P<0.05）。通过富集分析发现，IQGAP3可能参与间隙连接、铁死亡、Hippo信号通路的负调控等信号通路及生物学过程。此外，IQGAP3的表达与CD4+T细胞、巨噬细胞和NK细胞类型有关，在IQGAP3高表达组中，部分免疫检查点相关基因（CTLA4、HAVCR2、LAG3）的表达显著下调。结论 IQGAP3在宫颈癌中高表达，与患者的预后和免疫特征相关。
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  SUV39H1通过表观遗传调控促进宫颈癌中CCL22-CCR4表达

  张力, 高艳娥, 梁嘉伟, 盛佩婷

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1113-1121. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.003

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  目的 探索宫颈癌中C-C基序趋化因子配体22(CCL22)和CC趋化因子受体4(CCR4)的表观遗传调控机制及在宫颈癌发生中的作用。方法 收集宫颈癌组织标本16例，正常宫颈组织标本16例，RT-qPCR法和MS-PCR法分别检测宫颈癌及正常宫颈组织中CCL22和CCR4 mRNA表达水平及其基因启动子DNA甲基化水平。SiHa和HeLa细胞使用不同浓度的5-Aza(DNA甲基转移酶抑制剂，0,2.5,5μmol/L)处理后，RT-qPCR法检测细胞中CCL22和CCR4 mRNA水平。宫颈癌SiHa和HeLa细胞分别转染过表达组蛋白甲基转移酶SUV39H1的慢病毒表达载体及对照质粒，命名为SUV39H1-OE组和SUV39H1-NC组；并转染SUV39H1特异性siRNA和对照siRNA，命名为siSUV39H1组和siNC组。RT-qPCR法检测SiHa和HeLa细胞中CCL22和CCR4 mRNA表达改变，MS-PCR法检测CCL22和CCR4基因启动子甲基化程度，染色质免疫共沉淀法检测SUV39H1介导的H3K9me3在CCL22和CCR4基因启动子处的富集程度。结果 与正常宫颈组织相比，CCL22和CCR4 mRNA在宫颈癌组织中高表达（P<0.05），其编码基因启动子处呈低甲基化状态（P<0.05）。SiHa和HeLa细胞中CCL22和CCR4基因启动子处呈现部分甲基化状态，细胞经去甲基化处理后CCL22和CCR4 mRNA表达水平随浓度增加（P<0.05）。与SUV39H1-NC组相比，SUV39H1-OE组宫颈癌细胞中CCL22和CCR4 mRNA表达增加（P<0.05），基因启动子甲基化程度降低（P<0.05）。与siNC组相比，siSUV39H1组CCL22和CCR4 mRNA表达降低（P<0.05），基因启动子甲基化程度升高（P<0.05）。染色质免疫共沉淀结果显示，SiHa和HeLa细胞中CCL22-CCR4基因启动子区域均有H3K9me3富集（P<0.05）。结论 宫颈癌中SUV39H1-H3K9me3参与趋化因子CCL22及其受体CCR4的表观遗传调控。
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  1型糖尿病与卵巢癌之间的因果关系：一项孟德尔随机化研究

  张玲, 吴媛霞, 乔翠峰, 杜秀萍

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1122-1126. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.004

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  目的 探计1型糖尿病（type 1 diabetes,T1DM）和卵巢癌（ovarian cancer,OC）之间的双向因果关系。方法 采用两样本孟德尔随机化（MR）设计，使用来自全基因组关联研究（GWAS）的T1DM遗传变异（9 266例欧洲血统病例和15 574例对照）和OC遗传变异（1 218例欧洲血统病例和198 523例对照）。采用MR-Egger、加权中位数（WME）、逆方差加权法（IVW）、简单模式（simple mode）和加权模式（weighted mode）来检验T1DM与OC之间的因果关系。然后采用留一法（leave-one-out）等敏感度分析来评估结果的可靠性。最后采用MR Steiger检验来测试暴露和结果之间的假设关系。结果 IVW法结果显示T1DM与OC的发病率增高有因果关系（OR=1.000 4,95%CI 1.000 1～1.000 8,P=9.01×10-3）,5种方法的估计值在方向上保持一致，表明T1DM是OC发病率的危险因素。MR Egger模型证实了结果无显著异质性（P>0.05），留一法敏感性分析去除单个SNP并重复进行MR分析时，结果较前无显著差异。Egger截距接近于零（截距<-0.001,P=0.191），表明本研究无水平多效性。同时反向MR分析并未发现OC促进T1DM发病风险增高的证据（OR=0.988,95%CI 3.09×10-5～3.16×104,P=0.998）。结论 遗传学证据表明，T1DM与OC的发病风险增加有关，相反，并未发现OC会使T1DM发病风险增高。
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  基于4D-DIA技术研究表柔比星所致化疗相关认知障碍机制

  杜钦, 贾丽君, 魏星, 单昌友, 赵永林

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1127-1132. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.005

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  目的 基于四维数据独立采集（4D-data-independent acquisition,4D-DIA）蛋白质组学技术探究表柔比星所致化疗相关认知障碍（chemotherapy-induced cognitive impairment,CICI）发生机制。方法 用小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3构建体外血脑屏障模型，随机分为表柔比星组和空白对照组，表柔比星组接受5μmol/L表柔比星处理24 h，对照组未进行任何特殊处理。利用4D-DIA技术检测并比较两组间差异蛋白的表达，对差异蛋白进行基因本体分析（gene ontology,GO）及京都基因和基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）富集分析，并构建蛋白-蛋白相互作用（protein-protein interaction,PPI）网络。结果 通过对比分析，表柔比星组和空白对照组共鉴定出1 282种差异蛋白，其中显著上调蛋白378种，显著下调蛋白904种。GO分析显示差异蛋白主要富集于细胞内，参与生物调节、有机物代谢及细胞代谢等生物学过程，并与结合、催化等分子功能有关。KEGG通路分析显示，差异蛋白与剪接体、RNA聚合酶、mRNA监控通路的相互作用等有关。蛋白-蛋白相互作用网络（protein-protein interaction,PPI）分析显示，TP53、RNA解旋酶DHX15、小核核糖核蛋白肽D3等处于中心位置，其分别与凋亡、剪接体相关。结论 表柔比星可能通过破坏脑微管内皮细胞的剪接体功能、影响正常连接及转运系统，进而诱发化疗相关认知障碍。
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  间歇禁食通过调控FGF21分子改善压力超负荷型心力衰竭

  安慧仙, 孙梦娜, 王瑞, 曾广伟

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1133-1143. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.006

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  目的 明确间歇禁食（intermittent fasting,IF）对压力超负荷型心衰的保护作用及潜在分子机制。方法 采用主动脉弓缩窄术（transverse aortic constriction,TAC）建立压力超负荷型心衰模型,术后给予自由进食（ad libitum,ALb）或IF处理。将C57BL/6小鼠随机分为假手术+自由进食组（sham+ALb）、假手术+间歇禁食组（sham+IF）、心衰+自由进食组（TAC+ALb）和心衰+间歇禁食组（TAC+IF）。将野生型（WT）小鼠及成纤维细胞生长因子21 （fibroblast growth factor 21,FGF21）敲除(Fgf2^1-/-)小鼠随机分为WT+TAC+ALb组、WT+TAC+IF组、Fgf21^-/-+TAC+ALb组和Fgf21^-/-+TAC+IF组。饲养8周后,通过小动物超声检测各组小鼠的心脏左室射血分数（LVEF）和左室短轴缩短率（LVFS）,计算心脏质量（HW）和体质量（BW）比值,检测血清BNP水平,组织病理学染色观察心脏结构改变,透射电镜和分子生物学实验观察和检测线粒体结构和功能（ATP生成、线粒体复合物Ⅰ和Ⅴ活性）、DHE染色评估心肌活性氧（ROS）生成,ELISA试剂盒测定心肌4-羟基壬烯醛（4-HNE）水平,Western blot法测定心肌SIRT3和SOD2表达。结果 与sham+ALb组相比,TAC+ALb组小鼠心脏LVEF和LVFS值下降（P<0.01）,血清BNP水平升高（P<0.01）,HW/BW值和心肌细胞平均横截面积增大（P<0.01）,心肌间质纤维化占比增加（P<0.01）。与TAC+ALb组相比,TAC+IF组小鼠心脏LVEF和LVFS值升高（P<0.01）,血清BNP水平下降（P<0.01）,HW/BW值和心肌细胞平均横截面积减小（P<0.01）,心肌间质纤维化占比下降（P<0.01）。sham+IF组与sham+ALb组间上述指标差异均无统计学意义（P>0.05）。与WT+TAC+ALb组相比,WT+TAC+IF组小鼠心脏LVEF和LVFS值升高（P<0.01）,血清BNP水平下降（P<0.01）,HW/BW值和心肌细胞平均横截面积减小（P<0.01）,心肌间质纤维化占比下降（P<0.01）,心肌ATP生成增加（P<0.01）,线粒体复合物Ⅰ和Ⅴ活性改善（P<0.01）,ROS和4-HNE水平下调（P<0.01）,同时心肌SIRT3表达增强、SOD2乙酰化降低（P<0.01）。与WT+TAC+IF组相比,Fgf21^-/-+TAC+IF组小鼠心脏LVEF和LVFS值降低（P<0.01）,血清BNP水平升高（P<0.01）,HW/BW值和心肌细胞平均横截面积增大（P<0.01）,心肌间质纤维化占比增加（P<0.01）,心肌ATP生成减少（P<0.01）,线粒体复合物Ⅰ和Ⅴ活性下降（P<0.01）,ROS和4-HNE水平上调（P<0.01）,同时心肌SIRT3表达降低、SOD2乙酰化增强（P<0.01）。Fgf21^-/-+TAC+IF组与Fgf21^-/-+TAC+ALb组间上述指标差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 间歇禁食通过调控FGF21-SIRT3信号通路改善心肌线粒体功能和降低氧化应激水平,进而减轻压力超负荷型心衰小鼠心肌重构和心功能障碍。
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  衰老标记蛋白30对糖尿病心肌病的保护作用及其机制

  胡培静, 张学丹, 杜占奎, 屈欣怡, 安慧仙, 曹彪

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1144-1153. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.007

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  目的 观察衰老标记蛋白30（SMP30）对糖尿病心肌病（DCM）心肌损伤的保护作用并探讨其机制。方法 采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）联合高脂饮食法建立糖尿病心肌病模型。将40只野生型（WT）C57BL/6小鼠随机分为野生对照组（WT+Con组）和野生糖尿病心肌病组（WT+DCM）,每组20只。将40只SMP30转基因(SMP30^+/+)小鼠随机分为SMP30^+/+对照组(SMP30^+/++Con)和SMP30^+/+糖尿病心肌病组(SMP30^+/++DCM),每组20只。12周后,超声心动图仪检测心脏收缩功能（LVEF、LVFS）;ELISA试剂盒检测血清心肌损伤标志物CK-MB和LDH的水平;Masson染色观察心肌组织纤维化;WGA染色评估心肌细胞平均横截面积;DHE染色评估心肌组织ROS生成;免疫荧光染色观察心肌NF-κB p65表达以及NLRP3与ASC共定位;PI染色观察心肌细胞焦亡率;qRT-PCR法检测FN、CTGF、ANP、BNP、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达;蛋白印迹法检测SMP30、NLRP3、ASC、IL-1β、IL-18和cleaved caspase-1蛋白的表达。结果 与WT+Con组比较,WT+DCM组小鼠心脏LVEF、LVFS值下降（P<0.01）,血清CK-MB和LDH水平升高（P<0.01）;心肌组织纤维化和心肌肥厚明显加重（P<0.01）;心肌组织NF-κB荧光表达和ROS生成增强,IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达增加（P<0.01）;心肌组织炎症小体形成增多（P<0.01）;心肌细胞焦亡率及IL-1β、IL-18和cleaved caspase-1蛋白表达上调（P<0.01）。与WT+DCM组比较,SMP30^+/++DCM组小鼠心脏LVEF、LVFS值升高（P<0.01）,血清CK-MB和LDH水平降低（P<0.01）;心肌组织纤维化和心肌肥厚明显缓解（P<0.01）;心肌组织NF-κB荧光表达和ROS生成减弱,IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达下降（P<0.01）;心肌组织炎症小体形成减少（P<0.01）;心肌细胞焦亡率及IL-1β、IL-18和cleaved caspase-1蛋白表达下调（P<0.01）。结论 SMP30通过抑制炎症小体形成进而减少心肌细胞焦亡,发挥减轻糖尿病心肌病心肌损伤的作用。
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  长链非编码RNA LOC102639982和LOC102636309与自身免疫性肝炎肝损伤的关联

  吕思学, 刘莹, 李鑫, 魏诗雅, 蔡粉情, 刘杨

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1154-1162. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.008

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  目的 探讨差异表达长链非编码RNA(lncRNA)LOC102639982和lncRNA LOC102636309参与自身免疫性肝炎肝损伤的生物学机制。方法 选取SPF级雌性C57BL/6小鼠12只，随机分为正常组和模型组。模型组采用尾静脉注射刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)制备自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis,AIH）小鼠模型，正常组注射生理盐水。收集各组小鼠的肝脏和血清，采用HE染色观察肝细胞坏死程度和肝脏炎症细胞浸润程度，ELISA法检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、一氧化氮（NO）和丙二醛（MDA）含量的变化。qRT-PCR检测lncRNA LOC102639982和lncRNA LOC102636309在肝脏中的表达水平，并对两种lncRNA共表达的mRNA进行GO和KEGG富集分析以及lncRNA-转录因子关联分析。结果 HE染色结果显示，模型组小鼠肝细胞变性坏死，出现大量炎性细胞浸润。与正常组比较，模型组小鼠肝组织NO、MDA水平及血清ALT、AST水平均显著升高（P<0.01）。qRT-PCR结果显示，lncRNA LOC102639982和lncRNA LOC102636309表达变化的结果与微阵列芯片的表达趋势一致。qRT-PCR结果结合肝损伤结果表明，微阵列芯片的结果变化趋势与肝损伤指标变化趋势一致。生物信息学研究结果表明，lncRNA LOC102639982和lncRNA LOC102636309共表达的mRNA的主要分子功能是蛋白结合，主要富集在生物过程中的转录调控、DNA模板化。与lncRNA LOC102639982共表达的mRNA主要富集于细胞因子与细胞因子受体相互作用和TNF信号通路，而与lncRNA LOC102636309共表达的mRNA主要富集于MAPK和NF-kappa B信号通路。lncRNA LOC102639982与转录因子NR4A1和ATF3的相关性最强，而lncRNA LOC102636309与转录因子Fosl2的相关性最强。结论 lncRNA LOC102639982和lncRNA LOC102636309的差异表达与自身免疫性肝炎肝损伤密切相关，两者均可能是预防和治疗自身免疫性肝炎的潜在靶点。
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  抑郁症与非酒精性脂肪性肝病因果关系的双向孟德尔随机化研究

  艾楠, 王馨晨, 刘星宇, 王锐, 杨婧

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1163-1169. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.009

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  目的 采用两样本孟德尔随机化方法（Mendelian randomization,MR）研究抑郁症（major depression disease,MDD）与非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）的因果关系。方法 使用公开的全基因组关联研究（GenomeWide Association Study,GWAS）的汇总数据进行分析，所采用的GWAS汇总数据均来源于欧洲人群。采用逆方差加权法（inverse variance weighted,IVW）、MR-Egger回归法和加权中位数法进行双向两样本MR分析，评估抑郁症与非酒精性脂肪性肝病的因果关系。采用敏感性分析对结果的稳定性和可靠性进行评估。结果 正向MR分析结果显示，抑郁症对非酒精性脂肪性肝病风险的增加存在因果关系（IVW:OR=1.307,95%CI 1.051～1.626,P=0.016）。敏感性分析结果显示，不存在水平多效性和异质性，且留一法显示剔除任一单核苷酸多态性位点（single-nucleotide polymorphisms,SNP）均不影响总体效应估计值。反向MR结果显示，非酒精性脂肪性肝病对抑郁症发生风险不存在因果关联（P>0.05）。结论 孟德尔随机化结果显示抑郁症会增加非酒精性脂肪性肝病发病风险。
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  鞘氨醇-1-磷酸对肺成纤维细胞活性的作用及其机制

  王贵佐, 徐海娟, 杨淑梅, 刘璐

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1170-1176. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.010

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  目的 探讨鞘氨醇-1-磷酸（sphingosine-1-phosphate, S1P）对肺成纤维细胞活性的影响及其可能机制。方法 以0,0.01,0.03,0.1,0.3,1,3μmol/L S1P干预肺成纤维细胞24 h，筛选最佳干预浓度；随后以确定的S1P干预浓度刺激细胞0,24,48,72 h,CCK-8法检测细胞增殖。将肺成纤维细胞分为对照组、S1P组、JTE013+S1P组、CAY10444+S1P组、control siRNA+S1P组和YAP siRNA+S1P组。S1P组以1μmol/L S1P干预肺成纤维细胞24 h;JTE013+S1P组和CAY10444+S1P组细胞先分别用10μmol/L选择性S1P受体2(sphingosine-1-phosphate receptor 2, S1PR2)拮抗剂JTE013或10μmol/L选择性S1PR3拮抗剂CAY10444预处理1 h后再给予1μmol/L S1P干预24 h;control siRNA+S1P组和YAP siRNA+S1P组细胞先分别转染control siRNA或YAP siRNA，再给予1μmol/L S1P干预24 h。CCK-8法检测细胞增殖；免疫印迹法检测t-Yes相关蛋白（Yes-associated protein, YAP）、p-YAP、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（CollagenⅠ）、纤维粘连蛋白（Fibronectin）水平。结果 S1P干预后，肺成纤维细胞增殖随浓度和时间依赖性增加（P<0.05），筛选最佳干预浓度为1μmol/L。与对照组相比，S1P组细胞p-YAP水平减少（P<0.001）,α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin蛋白水平增多（P<0.05）。与S1P组相比，JTE013+S1P组和CAY10444+S1P组细胞p-YAP水平均增多（P<0.05）,α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin蛋白水平均减少（P<0.05），细胞增殖均受到抑制（P<0.05）；细胞增殖均受到抑制（P<0.05）；且JTE013的作用效果较CAY10444显著（P<0.05）;YAP siRNA+S1P组细胞α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin蛋白水平，以及细胞增殖均降低（P<0.05）。结论 S1P通过与S1PR2/3结合激活YAP，诱导肺成纤维细胞活化。
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  血红素加氧酶-1对哮喘模型中Th1/Th2/Th17/Treg亚群及相关细胞因子分泌格局的影响

  蔚京京

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1177-1183. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.011

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  目的 探讨血红素加氧酶-1对哮喘动物模型中Th1/Th2/Th17/Treg亚群及相关细胞因子分泌格局的影响。方法将Balb/C小鼠随机分为5组:正常对照组、卵清蛋白（OVA）组、氯化血红素（Hemin）组、锡原卟啉（SnPP）组、Hemin+SnPP组,每组10只。OVA组使用OVA对小鼠进行致敏和激发建立哮喘模型,其他3个干预组在OVA致敏和激发前2d及第27天分别给予Hemin、SnPP或同时给予Hemin和SnPP溶液腹腔注射。造模成功后通过肺组织病理切片及支气管肺泡灌洗液（BALF）炎症细胞分类计数观察哮喘动物模型气道炎症程度,流式细胞计数法检测脾脏CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Treg细胞、CD4⁺IL-10R⁺IFN-γR⁺Treg1细胞和CD4⁺IL-17⁺Th17细胞的比例,ELISA方法检测血清及BALF中Th1/Th2/Th17/Treg相关细胞因子IL-4、IFN-γ、IL-2、IL-17、TNF-α、IL-10和TGF-β的水平,免疫组化测定肺组织IL-17的表达。结果（1）与正常对照组比较,其他四组小鼠肺组织均有不同程度的炎症细胞浸润,其中OVA组小鼠最严重,Hemin组最轻。与正常对照组比较,OVA组小鼠BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞（EOS）明显增多,脾脏组织中CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Treg细胞比例下降,CD4⁺IL-17⁺Th17细胞比例升高,血清中IL-4、TNF-α增多而IFN-γ、IL-2、IL-10和TGF-β减少,BALF中IL-17增多,肺组织IL-17阳性表达增多（均P<0.01）;Hemin组BALF中细胞总数和EOS增多,CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Treg、CD4⁺IL-10R⁺IFN-γR⁺Treg1和CD4⁺IL-17⁺Th17细胞比例升高（均P<0.01）,其余指标无明显变化;SnPP组和Hemin+SnPP组TNF-α以及Hemin+SnPP组CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Treg比例和IL-10水平差异无统计学意义,其余各指标变化趋势同OVA组（均P<0.01）。（2）与OVA组比较,Hemin组BALF中细胞总数和EOS明显减少,脾脏CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Treg细胞和CD4⁺IL-10R⁺IFN-γR⁺Treg1细胞比例均升高,CD4⁺IL-17⁺Th17细胞比例下降,除TGF-β外其他细胞因子变化差异均有统计学意义（均P<0.05）。其他两组变化趋势与OVA组基本相同,与Hemin组比较免疫失衡和炎症因子变化更明显。结论 血红素加氧酶-1在哮喘动物模型中可影响Th1/Th2/Th17/Treg细胞亚群的分化和功能以及相关细胞因子的分泌格局,发挥免疫调节功能。
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  基于网络药理学和细胞实验探索山奈酚治疗阿尔茨海默病的作用机制

  李慧红, 刘嘉

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1184-1190. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.012

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  目的 基于网络药理学和细胞实验探讨山奈酚治疗阿尔茨海默症的作用机制。方法 使用中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）获取山奈酚相关靶点,基因表达综合数据库（GEO）获取阿尔茨海默病（GSE5281）的差异表达基因。使用DAVID数据库进行两者交集靶点的基因本体（GO）功能富集分析和京都基因和基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。通过Autodock Vina实现分子对接。将SH-SY5Y细胞分为对照组、Aβ组和山奈酚组。对照组未经任何处理,Aβ组使用10μmol/L Aβ_1-42干预处理,山奈酚组使用10μ_mol/Aβ_1-42处理后再使用10μ_mol/L山奈酚干预处理。AnnexinⅤ-PI双染色法检测细胞凋亡,实时定量PCR和Western blot检测细胞中钙调蛋白1（CALM1）、毒蕈碱型乙酰胆碱受体M1（CHRM1）和蛋白磷酸酶3催化亚基α（PPP3CA）的表达水平。结果 共得到山奈酚相关靶点60个,阿尔茨海默病差异表达基因2 155个,山奈酚治疗阿尔茨海默病的潜在作用靶点6个。山奈酚治疗阿尔茨海默病潜在作用靶点的GO功能富集分析主要涉及磷蛋白磷酸酶活性的正向调节,突触后膜电位的调节,对钙离子的反应和G蛋白偶联受体信号通路的生物过程。KEGG通路富集分析主要包括钙信号通路,阿尔茨海默病和神经退行性疾病等。分子对接结果显示,山奈酚与CHRM1,CALM1和PPP3CA的结合能均<-5.0 kcal/mol。与对照组相比,Aβ组细胞凋亡增加（P<0.05）;与Aβ组相比,山奈酚组细胞凋亡减少（P<0.05）。与Aβ组相比,山奈酚组细胞中CHRM1,CALM1和PPP3CA的mRNA和蛋白表达显著上调（P<0.05）。结论 山奈酚可能通过调节钙信号通路中的关键基因（CHRM1,CALM1和PPP3CA）改善SH-SY5Y细胞凋亡,从而发挥治疗阿尔茨海默病的作用。
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  孕期不同阶段补充维生素D对仔鼠学习记忆能力的影响

  孙晓霞, 韩雨, 乔瑜, 侯雨霏, 邱服斌

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1191-1197. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.013

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  目的 探索孕期不同阶段补充维生素D(vitamin D,VD)对后代仔鼠空间学习和记忆能力的改善作用。方法 按照体质量将4周龄SD雌性大鼠随机分为5组：对照组（control group,Ctrl组）、VD缺乏组（vitamin D deficiency group,VDD）、孕早期补充组（first trimester supplementation group,FTS）、孕中期补充组（second trimester supplementation group,STS）和孕晚期补充组（third trimester supplementation group,TTS），每组5只。Ctrl组采用标准饲料喂养，VDD组、FTS组、STS组和TTS组采用VD缺乏饲料喂养。喂养8周后，雌雄合笼，交配成功后，Ctrl组采用标准饲料喂养，VDD组采用VD缺乏饲料喂养，FTS组从妊娠0 d(GD0)开始采用标准饲料喂养，STS组从GD7开始时采用标准饲料喂养，TTS组从GD14开始时采用标准饲料喂养，直至仔鼠21 d离乳。所有仔鼠按照母鼠饲养条件喂养。GD20时检测母鼠血清25-羟基维生素D[25(OH)D]水平，仔鼠断乳后进行Morris水迷宫实验（包括定位航行实验4 d和空间探索实验1 d），于行为学实验结束后检测仔鼠血清25(OH)D、1,25-二羟基维生素D[1,25(OH)2D]水平，苏木精-伊红（HE）染色观察仔鼠海马体组织形态学变化。结果 VD缺乏8周后，与Ctrl组相比，VDD组、FTS组、STS组和TTS组母鼠血清25(OH)D水平均显著降低（P<0.01）。GD20时，与Ctrl组相比，VDD组母鼠血清25(OH)D水平显著降低（P<0.01）；与VDD组相比，FTS组、STS组和TTS组母鼠血清25(OH)D水平均显著升高（P<0.01）。FTS组仔鼠血清25(OH)D水平显著高于VDD组（P<0.01）,FTS组、STS组和TTS组仔鼠血清1,25(OH)2D水平显著高于VDD组（P<0.01）。孕期不同阶段补充VD后子代的体质量均明显增加。定位航行实验中，各组仔鼠随着训练天数的增加，逃避潜伏期逐渐降低；第3天时FTS组、STS组和TTS组仔鼠的逃避潜伏期均显著低于VDD组（P<0.01）；与TTS组相比，FTS组和STS组逃避潜伏期都略有降低，但差异无统计学意义。空间探索实验中，FTS组和STS组仔鼠的逃避潜伏期显著低于VDD组（P<0.05）；与TTS组相比，FTS组和STS组逃避潜伏期显著降低（P<0.05）。与VDD组相比，孕期补充组仔鼠海马CA1区神经元都有不同程度的改善。结论 母鼠VD缺乏会降低仔鼠的学习记忆能力，母鼠孕期不同阶段补充VD均改善了仔鼠的空间学习和记忆能力，其中孕早期补充VD对仔鼠的学习记忆能力改善效果更为显著。
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  对香豆酸对重症肌无力大鼠免疫平衡和骨骼肌线粒体生物发生的影响

  王一旭, 蒋锋, 张静, 赵璐, 吴霞

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1198-1206. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.014

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  目的 探究对香豆酸（p-CA）对重症肌无力（MG）大鼠的治疗作用及可能机制。方法 将雌性Lewis大鼠分为5组：对照组、模型组、对香豆酸低剂量组（L-p-CA组）、对香豆酸中剂量组（M-p-CA组）、对香豆酸高剂量组（H-p-CA组），每组12只。对照组大鼠为未建模的大鼠，其他组均通过对大鼠皮下注射乙酰胆碱受体（AChR）α亚基97-116肽段序列（Rα97-116）建立MG大鼠模型。建模后，L-p-CA组、M-p-CA组和H-p-CA组大鼠分别灌胃1 mL的50,100,200 mg/kg对香豆酸溶液。对照组和模型组大鼠分别灌胃1 mL的玉米油。各组大鼠均灌胃4周。采用Lennon分级法进行大鼠临床症状评分，并检测大鼠的低频重复神经电刺激（RNS）衰减率。通过苏木素伊红（HE）染色观察腓肠肌形态。通过ELISA法检测血清AChR抗体（AChR-Ab）、干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平。按照试剂盒方法检测腓肠肌组织中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）的水平。通过Western blot检测腓肠肌组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)、磷酸化AMP依赖的蛋白激酶α(p-AMPKα)、AMPKα、核呼吸因子1(NRF1)和线粒体转录因子A(TFAM)的蛋白表达水平。通过免疫荧光染色观察腓肠肌组织中的TFAM表达。结果 与对照组比较，模型组大鼠的Lennon评分和RNS衰减率均显著升高（P<0.05），血清AChR-Ab和IFN-γ水平显著升高（P<0.05）；腓肠肌出现损伤，腓肠肌中SOD、GSH-Px水平、以及PGC-1α、p-AMPKα、NRF1和TFAM蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）,TFAM相对荧光强度显著降低（P<0.05）,MDA水平显著升高（P<0.05）。与模型组比较，L-p-CA组、M-p-CA组和H-p-CA组大鼠的Lennon评分和RNS衰减率显著降低（P<0.05），血清AChR-Ab和IFN-γ水平显著降低（P<0.05）；腓肠肌形态明显改善，腓肠肌中SOD、GSH-Px水平、以及PGC-1α、p-AMPKα、NRF1和TFAM蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）,TFAM相对荧光强度显著升高（P<0.05）,MDA水平显著降低（P<0.05）。与L-p-CA组和Mp-CA组比较，H-p-CA组大鼠的Lennon评分和RNS衰减率显著降低（P<0.05），血清AChR-Ab和IFN-γ水平显著降低（P<0.05）；腓肠肌形态明显改善，腓肠肌中SOD、GSH-Px水平、以及PGC-1α、p-AMPKα、NRF1和TFAM蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）,TFAM相对荧光强度显著升高（P<0.05）,MDA水平显著降低（P<0.05）。结论 对香豆酸对MG大鼠具有良好的治疗效果，其机制可能与改善免疫平衡和激活AMPK/PGC-1α信号通路介导的线粒体生物发生有关。
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  HPLC法测定氯法齐明原料药中有关物质的含量

  王文涛, 高彦红, 张升盛, 王二兵, 赵正保, 曲婷丽

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1207-1213. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.015

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  目的 建立测定氯法齐明原料药中有关物质的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）法,以Caprisil C₈-P（250 mm×4.6 mm,5μm）为色谱柱;取十二烷基硫酸钠4.5 g,四丁基硫酸氢铵1.7 g和十二水合磷酸氢二钠1.77 g,加水1 000 mL溶解,用稀磷酸调节pH值至3.0,取上述溶液与乙腈以35:65混合作为流动相;流速1.0 mL/min;检测波长280 nm;柱温30℃;进样量20μL。对建立的HPLC方法进行方法学考察,对3批氯法齐明原料药进行有关物质检测,并比较外标法与加校正因子的主成分自身对照法测得结果。结果 氯法齐明、杂质A和杂质B分别在0.019～0.959μg/mL、0.017～0.858μg/mL和0.060～2.995μg/mL范围内线性关系良好（均R²>0.999）;检测限分别为0.22 ng、0.27 ng、0.23 ng,定量限分别为0.72 ng、0.91 ng、0.76 ng;精密度、重复性、稳定性、耐用性实验的RSD值均小于5%,平均回收率为93.37%～98.17%。3批氯法齐明原料中均检测出杂质A和杂质B,杂质A的含量范围为0.013%～0.014%;杂质B的含量范围为0.025%～0.026%。加校正因子的主成分自身对照法与外标法测得的有关物质的含量无显著差异。结论 建立的HPLC方法便捷、高效、准确度高,可用于氯法齐明原料药中有关物质的含量测定,且加校正因子的主成分自身对照法成本低,实用性强。
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  保和丸HPLC指纹图谱方法研究及质量评价

  杨艳, 王爱娜, 史宪海, 申国华

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1214-1218. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.016

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  目的 建立保和丸指纹图谱的分析方法，为其有效质量控制及科学评价提供参考。方法 采用Kromasil C₁₈（5μm,4.6 mm×250 mm）色谱柱，以乙腈-0.5%冰醋酸溶液为流动相，梯度洗脱，流速0.7 mL/min，检测波长320 nm，对指纹图谱进行共有峰标定，以橙皮苷为参照峰，采用2012年版中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件对61个生产企业共244批不同剂型的保和丸进行相似度评价。结果 建立的保和丸HPLC指纹图谱分析方法指认了7个共有峰，采用药材及化学对照品进行归属，分别为焦山楂（1、2号峰）、莱菔子（3、6号峰）、连翘（4号峰）、连翘酯苷A（5号峰）、橙皮苷（7号峰）。水丸的39批供试品各共有峰的相似度均≥0.90,17批供试品各共有峰的相似度<0.90；大蜜丸的56批供试品各共有峰的相似度均≥0.90,25批供试品各共有峰的相似度<0.90；浓缩丸的56批供试品各共有峰的相似度均≥0.90,51批供试品各共有峰的相似度<0.90。结论 建立的HPLC指纹图谱，方法简单快捷，重现性好，能够表达保和丸中多组分的整体特征，为保和丸的质量控制提供了科学依据。
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  靶向BCMA/CD3的双特异性抗体药物的质量控制研究

  杜加亮, 武刚, 段茂芹, 李萌, 倪永波, 崔永霏, 郭璐韵, 梅玉婷, 王兰, 于传飞

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1219-1227. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.017

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  目的 研究并建立靶向B细胞成熟抗原（BCMA）和白细胞分化抗原3(CD3)的双特异性抗体（双抗）药物的关键质量属性（CQA）质量控制方法。方法 从特异性鉴别、纯度、电荷异质性、产品相关杂质、翻译后修饰和生物学活性几个方面对靶向BCMA/CD3的双抗药物开展质量控制研究。采用基于赖氨酰肽链内切酶（Lys-C）酶切和反相高效液相色谱（RP-HPLC）技术的肽图法对靶向BCMA/CD3的双抗药物进行特异性鉴别确认；采用分子排阻色谱法（SEC）和还原/非还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳法（CE-SDS）进行纯度控制；采用离子交换色谱法（IEC）测定电荷异质性和产品相关杂质；采用反相超高效液相色谱（RPUHPLC）和在线质谱联用的多属性监测方法（MAM）监测靶向BCMA/CD3双抗中的翻译后修饰；采用T细胞激活和报告基因法测定该双抗的生物学活性。结果 肽图法检测可有效识别双抗中的关键肽段，起到特异性鉴别确认的作用；SEC和CE-SDS法可有效区分双抗中的主成分、聚体和片段，对有效成分的纯度控制发挥关键作用；IEC法可有效区分酸碱变异体、目标双抗及亲代残留同源二聚体，有利于产品相关杂质的控制；MAM法可检测到天冬氨酸异构化和天冬酰胺脱酰胺化等翻译后修饰的存在，可作为CQA控制的有力补充；T细胞激活结合报告基因法可有效评估该双抗的生物学活性。结论 针对靶向BCMA/CD3的双抗药物的理化和生物学特性，研究并建立了针对其CQA的质量控制方法，从质量可控的角度确保该类双抗产品的临床安全性和有效性。
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  基于多分网络和网络药理学探讨中医治疗类风湿性关节炎的用药规律和作用机制

  李琦, 李保珍, 马艳苗, 梁傲雪, 吕艳华

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1228-1237. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.018

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  目的 系统性深入挖掘清宫痹症医案为治疗类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）提供参考。方法 基于频数分析获得医案治疗痹症的常用药物和常见证型，在检验数据质量的基础上构建“方剂-中药”及“方剂-证型”二分网络，并构建“证-药-方”三分网络，针对挖掘结果，从中医药系统药理数据库和分析平台（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP）下载核心中药的成分和靶点并通过UniProt数据库对靶点进行标准化，从GeneCards数据库获取RA靶点，利用微生信平台取交集靶点后，应用STRING数据库和Cytoscape构建蛋白互作网络（protein-protein interaction networks,PPI），并筛选核心成分和核心靶点，完成GO、KEGG富集分析。结果 共梳理清宫痹症医案347例，包括203种药物和137类证型，频次最高的10种常用药物为当归、茯苓、白芍、生甘草、生地黄、白术、黄芩、川芎、香附、陈皮，以及11种常见证型包括气血亏虚证、风寒束表证、湿盛着痹证、气机郁滞证、湿热蕴结证、肝阴不足证、血不荣筋证、湿热下注证、表寒里饮证、湿热阻络证、饮溢四肢证；多分网络挖掘出重要药物组合为当归-白芍-白术，治疗RA主要是当归中2个有效成分、白芍中13个有效成分、白术中7个有效成分，治疗RA的关键作用靶点有12个，主要涉及MAPK信号通路。结论 医案治疗RA用药方向主要为缓解疼痛、除湿、益气补血，当归-白芍-白术组合对RA具有潜在治疗效果。
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  呼吸道标本中腿伤克斯特菌生物学性状及体外抗菌活性特点

  张斌, 王玉洁, 孙倩倩, 陈双

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1238-1242. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.019

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  目的 通过初步探究腿伤克斯特菌基本的生物学特点及药物敏感性，为该菌的鉴定及临床合理用药提供指导和帮助。方法 按照年龄、性别、主要诊断等，对10例呼吸道标本进行统计分析。采用细菌培养、革兰染色和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）仪进行菌株鉴定，通过基本的生化反应实验分析其生物学特性，通过VITEK 2全自动微生物鉴定药敏系统进行体外药物敏感性分析。结果 腿伤克斯特菌好发于有基础疾病且长期处于炎症刺激下的中老年男性患者。临床上易与其他细菌表现出混合感染。一般细菌培养结果表明：该菌在血平板及含万古霉素的巧克力平板上呈现灰白色，在麦康凯上为淡紫色，且菌落均呈现表面粗糙、迁徙生长的现象。镜下显示为革兰氏阴性球杆菌，经飞行质谱仪鉴定为腿伤克斯特菌。经综合分析该菌药敏结果，发现其对喹诺酮类抗生素表现为中介或耐药，对青霉素类、头孢类、酶抑制剂类、碳青霉烯类抗生素一般表现为敏感。结论 腿伤克斯特菌是一种革兰氏阴性球杆菌，常与其他菌造成混合感染，对临床不优先推荐使用喹诺酮类抗生素。
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  尿苷-胞苷激酶在肿瘤生物学中的作用及其研究进展

  薛孟恩, 朱孝仁, 刘娜, 王安然, 吴雨娇, 陈敏斌

  山西医科大学学报. 2024, 55(09): 1243-1250. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.09.020

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  <正>核苷酸代谢包括核苷酸的合成、降解和转化，涉及嘌呤和嘧啶核苷酸的代谢过程。核苷酸不仅是DNA和RNA的基本组成部分，还是能量传递、信号转导和酶促反应的关键分子^[1]。恶性肿瘤的快速生长和免疫系统的激活都需要大量核苷酸，因此，核苷酸代谢成为抗癌药物研发的重要靶点^[1,2]。核苷酸合成途径包括从头合成和补救合成，而癌细胞主要通过补救合成途径满足其快速增殖对核苷酸的需求。因此，核苷酸补救合成途径的研究尤为重要^[1]。尿苷-胞苷激酶（uridine-cytidine kinases,UCKs）是嘧啶核苷酸补救途径的限速酶，催化尿苷和胞苷生成尿苷一磷酸（UMP）和胞苷一磷酸（CMP）。目前，已有尿苷-胞苷激酶1（uridine-cytidine kinase 1,UCK1）、尿苷-胞苷激酶2（UCK2）和尿苷-胞苷激酶样1（uridine-cytidine kinase-like 1,UCKL-1）3种酶被表征，它们在功能上既有相似之处也有差异。本文对UCKs的生物学功能、UCKs的潜在治疗靶点、与UCKs相关的药物及其在肿瘤治疗中的联合应用策略等方面进行全面阐述，旨在为未来的UCKs功能研究及以UCKs为靶向的药物开发提供新的视角和思路。