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2025年, 第45卷, 第01期　
刊出日期：2025-01-15
  

  • 全选
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  • 非洲猪瘟病毒p30抗体竞争化学发光法的建立
    温升辉, 邵军军, 高闪电, 彭德财, 常惠芸, 丁嘉烽, 刘伟, 师铭咸
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 1-7. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.01
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    非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)感染引起猪的一种急性、热性、高致死性疾病。鉴于当前尚缺乏商业化的疫苗，并且近年来ASFV不断演变，中等毒力基因Ⅱ型毒株的涌现以及基因Ⅰ型弱毒株的传入，导致猪仅出现了持续性和慢性感染的状况。因此，对ASFV的特异性抗体检测变得势在必行。本研究利用p30单克隆抗体建立了一种检测ASFV p30抗体的竞争化学发光法——p30-cCLIA。通过检测背景清晰的阴阳性血清，确定该方法的Cut-off值为50%时，诊断敏感性(Dsn)和诊断特异性(Dsp)均为100%。在最佳反应条件下筛选出适用于p30单抗16-5E7E8-HRP的酶标稳定剂。此外，本研究建立的p30-cCLIA方法的灵敏度比商品化阻断ELISA试剂盒更高(1∶2 048 vs 1∶512),并具有良好的重复性。通过检测其他病毒感染猪阳性血清，结果表明与这些血清无交叉反应性。该方法的建立为ASF早期诊断提供了有力工具。
  • 嵌合CTB和WPRE PEDV病毒样颗粒的构建及免疫原性分析
    李德龙, 周建方, 余远迪, 付利芝, 杨柳, 蒋婧, 范泓灵, 谭宇航, 王昕, 孙悦茵
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 8-15. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.02
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    霍乱毒素B亚基(cholera toxin B subunit, CTB)可增强抗原呈递并促进T细胞增殖、B细胞分化和B细胞同种型转换；土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(woodchuck hepatitis virus post transcriptional regulatory element, WPRE)可通过优化RNA多聚腺苷酸化、出核和/或翻译增强基因表达效率。为构建嵌合CTB和WPRE的猪流行性腹泻病毒样颗粒(VLPs)并评价其免疫原性，本研究以GⅡ型PEDV S基因为基础，添加几种可以提高蛋白表达量和增强免疫效果的元件，命名该基因为TSCW,将TSCW经公司合成后克隆至pET32a(+),双酶切并胶回收后克隆至pFastBac1,构建重组质粒pFastBac-TSCW,进一步转化DH10Bac感受态细胞以获得重组杆粒Bacmid-TSCW,用Bacmid-TSCW转染sf9细胞获得重组杆状病毒BV-TSCW,将BV-TSCW与BV-M共感染sf9细胞获得病毒样颗粒VLP-TSCW,用其免疫小鼠评价其免疫原性。结果显示，成功构建重组质粒pFastBac-TSCW;PCR鉴定结果表明，重组杆粒Bacmid-TSCW构建成功；重组杆状病毒转染sf9细胞后可出现明显细胞病变；PCR和Western blot结果显示，重组杆状病毒可稳定存在于sf9细胞中，且目的蛋白也能稳定表达；电镜结果显示，BV-TSCW和BV-M成功组装成病毒样颗粒VLP-TSCW;ELISA结果表明，VLP-TSCW可诱导小鼠产生较高水平的特异性抗体。本研究结果将为后续继续开展PEDV VLPs亚单位疫苗优化、设计和研发奠定基础。
  • 2型PRRSV N蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定
    庞燕丽, 覃建光, 刘沐阳, 任同伟, 刘嘉琪, 周玲杉, 陈樱, 欧阳康, 黄伟坚, 韦祖樟
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 16-21+45. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.03
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    为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）N蛋白的单克隆抗体，用原核表达系统表达并纯化后的2型PRRSV毒株的N蛋白免疫BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，通过间接ELISA和间接免疫荧光（IFA）对杂交瘤细胞进行鉴定，使用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行亚克隆筛选。结果显示，成功获得1株单克隆抗体细胞株4A7。Western blot和IFA结果表明，该单克隆抗体能够准确识别1型和2型PRRSV的N蛋白。同时，通过原核表达系统对N蛋白基因进行截短表达，利用Western blot试验筛选出4A7识别的B细胞抗原表位的氨基酸序列为51EKPHF55。在不同毒株的N蛋白基因序列中对该表位的氨基酸进行比对，发现单克隆抗体4A7识别的抗原表位51EKPHF55与1型PRRSV毒株中3个亚型、2型PRRSV毒株中9个谱系的序列无氨基酸差异，具有较高的保守性。研究结果为研发PRRSV诊断试剂盒和新型疫苗奠定了理论基础。
  • A型塞内卡病毒、口蹄疫病毒和猪捷申病毒3重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
    甘诗琪, 魏千禾, 倪语晨, 倪健波, 赵秀玲, 董婉玉, 周莹珊, 王晓杜
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 22-29. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.04
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    针对A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)、口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)和猪捷申病毒(porcine teschovirus, PTV)核酸的保守区域，设计了用于构建TaqMan荧光定量PCR体系的引物和探针。以含有这3种病毒核酸保守序列的重组阳性质粒标准品为模板，建立了3重TaqMan荧光定量PCR方法，并对该体系进行了优化，确定了该方法的特异性、重复性、灵敏性及标准曲线，同时建立了混合感染模型。此外，利用所构建的3重TaqMan荧光定量PCR方法对临床样品进行了检测。结果显示，该方法能够特异性检测SVA、FMDV和PTV 3种病毒，与其他病原体无交叉反应；检测SVA、FMDV和PTV的最低浓度均可达到1×10～1拷贝/μL;组间和组内变异系数均小于5%;在126份样品中未检出这3种病毒。上述结果表明，该方法具有较强的特异性、高灵敏性和良好的稳定性，可用于临床检测。
  • 利用量子点单病毒示踪技术研究水貂肠炎病毒的感染机制
    董奕彤, 王晓萌, 岳凤娇, 王淑杰, 王春生
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 30-38. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.05
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    利用量子点单病毒示踪技术探究水貂肠炎病毒（mink enteritis virus, MEV）在细胞内的感染过程，为MEV的抗病毒治疗提供了潜在靶点。本研究通过生物素-链霉亲和素系统对MEV进行了量子点标记，经TCID50滴度测定和电镜表征后用于感染猫肾细胞（CRFK）。CRFK细胞膜经DiO染色后用量子点标记的MEV进行侵染，利用活细胞工作站系统GE Dleta vision观测病毒进入细胞膜的过程；对CRFK细胞转染pEGFP-Rab5和pEGFP-Rab7载体来标记早期内体和晚期内体，当细胞感染量子点标记的MEV后观测MEV病毒粒子与早期内体和晚期内体的相互作用。为了进一步验证内体与病毒感染的关系，利用氯喹（chloroquine, CQ）和NH4Cl两种内体酸性抑制剂来抑制内体的酸性环境，对加入抑制剂的感染后的细胞提取细胞内总RNA和蛋白，通过qPCR及Western blot检测细胞内MEV的含量；MEV在胞内的转运与细胞骨架相关，为了探究MEV转运与哪种细胞骨架相关，对CRFK细胞分别转染GFP-lifeact和EGFP-MAP4质粒，经GE Dleta vision观测MEV与细胞骨架的关系。选择微管抑制剂Nocodazole和微丝抑制CytoD剂对感染MEV的CRFK细胞提取细胞内RNA及总蛋白，通过qPCR及Western blot检测细胞内MEV的含量。活细胞成像显示MEV首先附着在细胞膜上，并通过内吞作用进入细胞；成像结果显示MEV与Rab5和Rab7在宿主细胞中共定位，用内体酸化抑制剂NH4Cl或CQ预处理宿主细胞后，病毒感染被抑制，表明MEV感染需要内体的酸性环境；活细胞图像显示量子点（QD）-MEV沿着微管运动，使用微管抑制剂Nocodazole抑制了病毒感染，而微丝抑制剂CytoD的加入对感染没有影响。研究结果表明，MEV是通过内吞作用进入CRFK细胞膜，随后进入早期内体及晚期内体，在细胞内的转运过程依赖于微管。
  • 牛源诺卡菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用
    赵岩, 任美奕, 仝静迪, 苏娅澜, 宋德源, 姜国均, 程佳, 高健, 刘明超
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 39-45. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.06
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    诺卡菌（Nocardia）是一种革兰阳性菌，能感染奶牛乳腺引起乳房炎，导致奶牛乳腺组织出现化脓性肉芽肿病变等临床症状。为建立一种快速而准确的牛源诺卡菌检测方法，通过对NCBI上已登记的诺卡菌16S rRNA基因序列进行比对，筛选出一段保守序列，并针对该序列设计了1对引物及TaqMan荧光定量探针。经过验证，结果显示本研究建立的TanMan荧光定量PCR检测方法的Ct值与重组质粒在1×1010～1×10～2拷贝/μL范围内具有良好的线性关系，其回归方程为y=-3.536x+43.78,相关系数R2=0.997 5,斜率为-3.536,扩增效率（E）=91%,且满足90%<110%的标准，特异性强，与其他病原之间无交叉反应。标准曲线的灵敏度较高，最低检测拷贝数为1×10～2拷贝/μL,灵敏度是普通PCR方法的100倍，且标准曲线具有良好的重复性，组内和组间的变异系数均小于2%。使用该方法检测了234份乳房炎奶样和80份牧场环境样本，阳性检出率为27.07%,而普通PCR方法的阳性检出率为19.43%,因此，该方法比普通PCR方法更灵敏。本试验建立的荧光定量PCR检测方法为牛源诺卡菌的临床检测提供了有效的工具。
  • 华南虎源嗜水气单胞菌的分离鉴定及其生物学特性分析
    李雨琪, 康娅莉, 卓钰槟, 黄玲珊, 丘淑琪, 薛羽希, 吴晓萍, 范思思, 廖玉婷, 林伟业, 陈婵, 林开雄, 陈腾腾, 林锡潘, 范克伟
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 46-52+58. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.07
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    为明确引起福建省梅花山华南虎繁育研究所1只华南虎幼虎死亡的病原，本试验无菌采集了该死亡华南虎的肝脏、脾脏、肺脏等组织样品进行病原菌的分离培养。通过形态观察、生化特性鉴定及管家基因gyrB序列分析对分离菌进行鉴定，并对其进行毒力基因检测、动物致病试验及药物敏感性试验。结果成功从死亡华南虎的气管中分离到1株致病性嗜水气单胞菌，命名为FJ/Tiger-201809。该分离菌与11株气单胞菌的gyrB核苷酸序列同源性为91.2%～99.1%,其中与嗜水气单胞菌（AF208251.1）的同源性最高，达到99.1%;遗传进化分析显示，该分离菌FJ/Tiger-201809与其他嗜水气单胞菌参考菌株处于同一进化分支，亲缘关系较近。小鼠致病性试验发现，用该菌株人工感染小鼠可导致多个器官出现不同程度的病变，半数致死量(LD50)为1×107.8 CFU/mL。毒力基因检测结果显示，分离菌FJ/Tiger-201809携带有aer和act两种毒力基因；药物敏感性试验结果显示，分离菌FJ/Tiger-201809对18种常用抗菌药物中的恩诺沙星、氨苄西林2种药物高度敏感，对青霉素G、多西环素相对敏感，对其余14种抗菌药物均表现出耐药性。综上，本试验从死亡华南虎气管中分离鉴定到1株呈现多重耐药且致病性较强的华南虎源嗜水气单胞菌，为华南虎细菌性疾病的防控提供了重要的参考依据。
  • 3种人源宿主限制因子CH25H-IFITM3-ISG15的共表达及抗病毒活性分析
    蒋嵘, 李乐天, 崔春梅, 李昌
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 53-58. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.08
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    为探索宿主限制因子(host restriction factors, HRFs)在抗病毒基因药物研发中的应用效果，本研究基于“病毒感染共有通路”及“宿主固有免疫HRFs”,将3种抗病毒HRFs,即胆固醇-25-羟化酶(cholesterol 25-hydroxylase, CH25H)、干扰素诱导跨膜蛋白3(interferon-induced transmembrane protein, IFITM3)、干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15),利用pCK载体进行融合表达，构建抗病毒基因药物。将这3种HRFs的基因编码序列通过裂解肽编码序列连接，构建了融合表达基因序列CH25H-IFITM3-ISG15(CⅡ)。随后，通过PCR扩增CⅡ序列，并将其连接至pCK表达载体上，经转化、鉴定和提取重组质粒，获得了基于DNA表达系统的候选生物药物，命名为pCK-CⅡ。然后，将重组质粒转染至HEK 293T细胞中，通过Western blot成功检测到3种抗病毒蛋白的表达。为明确pCK-CⅡ在细胞水平上的抗病毒作用，将pCK-CⅡ分别转染至HEK 293细胞和BHK-21细胞，24 h后，在BHK-21细胞上接种表达绿色荧光蛋白的水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus expressing green fluorescent protein, VSV-GFP),12 h后在荧光显微镜下观察并进行流式细胞术检测；在HEK 293细胞上接种H3N2亚型流感病毒，12 h后利用Western blot检测H3N2亚型流感病毒核蛋白的表达。结果显示，瞬时转染pCK-CⅡ质粒能显著降低感染细胞的荧光水平和感染细胞中H3N2亚型流感病毒核蛋白的表达。以上结果表明，在细胞水平上，pCK-CⅡ对VSV-GFP和H3N2亚型流感病毒的感染具有抑制作用。
  • 圆圈病毒禽源1型和圆圈病毒人源1型二重荧光定量PCR检测方法的建立
    余丹, 谢芝勋, 赵俊柯, 张艳芳, 谢志勤, 谢丽基, 尹文巧, 喻华英
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 59-65+73. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.09
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    圆圈病毒禽源1型(GyVg1)和圆圈病毒人源1型(GyH1)是两种新发现的可引起鸡腺胃炎相关症状的环形病毒，目前在全球多个地区均有检测报道。本研究旨在建立一种能快速同时鉴别GyVg1和GyH1的二重荧光定量PCR方法。使用GenBank中现有的GyVg1和GyH1基因组序列，基于其保守区分别设计相应的特异性引物和探针，经过优化反应条件，建立了GyVg1和GyH1的二重荧光定量PCR检测方法。应用该检测方法对2023年在广西南宁8个地区采集的256份临床样本进行检测，与常规PCR检测和测序结果进行分析比较，进一步验证该方法的有效性。结果显示，所建立的二重荧光定量PCR方法可在1 h内鉴定出GyVg1和GyH1,两套引物探针均可有效扩增，且与其他病原体无交叉反应；检测下限为7.5拷贝/μL,标准曲线相关系数>0.99,批内和批间变异系数<0.45%。临床样品检测结果显示，当模板量≥100.0拷贝/μL时，二重荧光定量PCR测定与常规PCR测定之间的一致性分别为94.3%(GyVg1)和100%(GyH1)。综上，所建立的二重荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好，适用于GyVg1和GyH1的快速鉴别检测。
  • 犬弓首蛔虫超氧化物歧化酶的免疫保护性分析
    吴天乐, 游怡宁, 王磊, 王冰楠, 孙雪, 周荣琼
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 66-73. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.10
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    为探究犬弓首蛔虫(Toxocara canis,T.canis)超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)对小鼠的免疫保护效果，选取75只6周龄昆明系小鼠随机分为5组进行免疫保护试验，分别于试验0、14、28 d对每只小鼠皮下注射50、75和125 mg/L的Tc-SOD 0.1 mL,空白组不做任何处理，PBS组注射等量的无菌PBS。共免疫3次，每次免疫间隔14 d;第3次免疫后14 d,经口感染3 000个/只感染性虫卵。在每次免疫前、第3次免疫后14 d和攻虫后7 d对小鼠尾静脉采血并分离血清，采用间接ELISA法检测血清中特异性IgG抗体；通过CCK-8和qRT-PCR法分析小鼠脾淋巴细胞的增殖能力及Th1(IFN-γ,IL-2)和Th2 (IL-4,IL-10)型细胞因子mRNA的表达水平；计算攻虫后7 d的幼虫减虫率并采用苏木精-伊红(H&E)染色观察肝脏和肺脏的病理变化。结果显示，与PBS组相比，Tc-SOD免疫组小鼠血清IgG抗体水平随着免疫次数的增加和时间延长而升高，攻虫感染后仍维持在较高水平，差异极显著(P<0.001)。三免后14 d, IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10的mRNA表达水平均极显著增高(P<0.01),其中IL-4和IL-10显著高于IFN-γ和IL-2(P<0.05),表现为Th2型为主的免疫反应。小鼠脾淋巴细胞的增殖能力显著增强(P<0.01)。50、75和125 mg/L的Tc-SOD免疫组的幼虫减虫率分别为18.7%、24.9%、37.6%,其中125 mg/L Tc-SOD组差异显著(P<0.05),具有较好的免疫保护效果。H&E染色结果显示，3个Tc-SOD免疫组均缓解了小鼠肝脏和肺脏的炎性细胞浸润(中性粒细胞、嗜酸粒细胞、巨噬细胞)和出血性病变。上述研究结果表明，Tc-SOD可诱导小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答，以Th2型免疫反应为主，并对T.canis的感染具有一定程度的免疫保护作用。
  • 基于转录组学测序研究白屈菜碱缓解H2O2诱导IPEC-J2细胞炎症损伤的作用机制
    莫佳荣, 陆伟峰, 张偌益, 林惠莹, 曾春丽, 林福, 李健
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 74-83+106. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.11
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    将处于对数生长期的猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）分为空白组（K组）、H2O2组（S组）和白屈菜碱（chelidonine）组（L组）,每组设3个重复样本。L组给予含2.5 mg/L白屈菜碱进行预处理，24 h后，S组和L组给予含1 mg/L的完全培养基，培养12 h后，提取各组细胞的总RNA,构建测序文库，并对组装数据进行功能注释、差异基因分析以及GO和KEGG富集分析。采用qPCR法验证关键差异基因的表达情况，ELISA法检测白屈菜碱对IPEC-J2细胞通透性的影响。结果显示，测序数据的质控合格，样本间相关性良好。GO功能注释结果表明，白屈菜碱的干预作用主要涉及细胞氧化应激反应、有丝分裂周期G2/M转变调控等生物学过程，与跨膜转运活性等分子功能密切相关。KEGG富集分析结果显示，IPEC-J2细胞经H2O2处理后，差异表达基因（DEGs）主要富集于p53信号通路、补血和凝血级联反应、FoxO信号通路等多种信号通路，而白屈菜碱预处理后，DEGs主要富集在TNF信号通路、突触囊泡循环、IL-17信号通路等炎症相关信号通路。qPCR验证结果与测序结果一致。白屈菜碱还能显著抑制LDH释放、升高GLN含量、降低DOA含量。结果表明，白屈菜碱可以通过调控TNF信号通路等炎症相关通路，降低细胞通透性，缓解H2O2诱导的IPEC-J2细胞炎症损伤。
  • RFRP-3对小鼠卵泡发育和类固醇激素合成的影响
    刘威辰, 高正婕, 李秋叶, 龚玲, 罗萍, 王水莲
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 84-90. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.12
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    旨在探究RFRP-3对小鼠卵泡发育和类固醇激素合成的影响。本试验将40只6周龄KM雌鼠分为4组，分别为0（对照组）、100、500、2 000 ng/d组，每日腹腔注射对应剂量RFRP-3,试验期共7 d。通过测量卵巢湿质量，计算并统计各组卵巢系数；通过HE染色，分析不同浓度RFRP-3对小鼠卵泡发育的影响；通过Western blot检测小鼠卵巢内细胞凋亡、类固醇合成酶和卵母细胞分泌因子的蛋白表达；通过放射免疫法检测小鼠血清中孕酮（P4）和雌二醇（E2）的浓度。结果表明，与对照组相比，各试验组小鼠体质量没有显著差异；500和2 000 ng/d处理组卵巢系数与对照组相比极显著下降（P<0.01）;与对照组相比，500和2 000 ng/d处理组次级卵泡和窦卵泡数极显著下降（P<0.01）,闭锁卵泡数极显著升高（P<0.01）;500和2 000 ng/d处理组Bax和Caspase3蛋白表达与对照组相比显著升高（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达对照组相比极显著下降（P<0.01）;与对照组相比，500和2 000 ng/d处理组3βHSD、StAR、CYP11a1、CYP17a1蛋白表达极显著降低（P<0.01）;与对照组相比，500 ng/d处理组E2浓度显著下降（P<0.05）,2 000 ng/d处理组E2浓度极显著下降（P<0.01）,各试验组P4浓度没有显著变化；500和2 000 ng/d处理组BMP15和GDF9的基因与蛋白表达与对照组相比均显著下降（P<0.05）。综上，RFRP-3可通过调控小鼠卵巢内凋亡因子、卵母细胞分泌因子和类固醇合成酶的表达，从而抑制小鼠卵泡发育和类固醇激素的分泌。本试验为RFRP-3对哺乳动物卵泡发育和类固醇激素合成的调控机理提供了理论依据。
  • 辅酶Q10通过自噬调控双酚A诱导的TM3细胞凋亡
    杨文哲, 赵彤, 潘飞龙, 王锦浩, 陈芳芳, 邵雯琪, 王诗睿, 赵树臣, 刘克祥, 赵立佳
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 91-99. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.13
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    旨在探讨膳食补充剂辅酶Q10(CoQ10)是否通过自噬途径缓解双酚A(BPA)暴露诱导的小鼠睾丸间质细胞株(TM3)损伤。利用不同浓度的BPA处理TM3细胞24 h后，采用CCK8法检测细胞活力。随后，将TM3细胞分为5组，分别为CON组、BPA组、Torin2组、CQ组和BPA+CoQ10组，每组设有3个重复。使用倒置光学显微镜观察TM3细胞的状态。通过Western blot检测各组中p62和LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白的相对表达水平，利用MDC细胞自噬染色法检测TM3细胞自噬水平，RT-qPCR检测Atg7、Beclin1、p62和Atg5基因的mRNA表达水平，流式细胞仪检测TM3细胞的凋亡率。结果显示，与0μmol/L BPA处理组相比，60μmol/L BPA处理24 h后，TM3细胞活力极显著下降(P<0.01)。与CON组相比，BPA处理组TM3细胞数量明显减少；自噬相关蛋白(p62、LC3-Ⅱ)的表达量极显著升高(P<0.01),与CQ组相当；MDC荧光强度极显著增强(P<0.01);自噬相关基因(Atg7、Beclin1、p62、Atg5)的mRNA表达水平极显著升高(P<0.01);细胞凋亡率极显著升高(P<0.01)。与BPA组相比，BPA+CoQ10处理组TM3细胞自噬相关基因Atg7和Beclin1 mRNA表达水平显著降低(P<0.05),p62和Atg5 mRNA表达水平极显著降低(P<0.01);自噬相关蛋白p62的表达量极显著下降(P<0.01),LC3-Ⅱ的表达量显著降低(P<0.05);MDC荧光强度显著下降(P<0.05);细胞凋亡率极显著下降低(P<0.01)。结果表明，CoQ10可通过改善BPA引起的TM3细胞自噬通量异常，从而减少细胞凋亡。
  • 脂多糖通过PI3K/AKT和Wnt/β-catenin信号通路对BESCs增殖和凋亡的影响
    董俊升, 王梓, 李汉卿, 郑芳玲, 张敏, 郭龙, 刘康军, 崔璐莹, 王亨, 李建基
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 100-106. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.14
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    通过脂多糖(LPS)处理原代奶牛子宫内膜基质细胞(bovine endometrial stromal cells, BESCs),利用流式细胞术检测细胞凋亡率，利用CCK-法检测细胞活性，利用细胞划痕实验观察细胞迁移能力，利用荧光定量PCR法检测结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子-β3(TGF-β3)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达情况，利用Western blot技术检测PI3K/AKT和Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白的表达情况，探讨了LPS诱导BESCs发生炎性反应时对其修复方面的影响。结果显示，LPS处理BESCs后，细胞活性明显降低(P<0.01);细胞迁移能力明显下降(P<0.05);BESCs凋亡率明显升高(P<0.01);CTGF和TGF-β3 mRNA表达量明显下降(P<0.01),但VEGF mRNA表达量上升(P<0.01);PI3K、AKT和GSK-3β蛋白磷酸化水平下降(P<0.05),c-Myc和Cyclin-D1蛋白表达量下降(P<0.01)。结果表明，LPS可抑制BESCs增殖，促进细胞凋亡，这可能与LPS抑制PI3K/AKT和Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。
  • 前列腺素D2对大肠杆菌诱导的奶牛骨髓源巨噬细胞中细胞因子分泌及吞噬杀伤功能的影响
    龚鹏飞, 杨效林, 郭莉莉, 王钰, 吴敬泽, 张双翼, 刘博, 毛伟, 曹金山
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 107-114. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.15
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    为了研究前列腺素D2（prostaglandin D2,PGD2）对大肠杆菌诱导的奶牛骨髓源巨噬细胞的影响，以体外培养的奶牛骨髓源巨噬细胞为研究对象，分析内源性和外源性PGD2对大肠杆菌诱导的巨噬细胞促炎性细胞因子（IL-1β、IL-6和TNF-α）的分泌和吞噬杀伤功能的影响。结果显示，由大肠杆菌诱导的巨噬细胞中PGD2的合成依赖于天然模式识别受体TLR2、TLR4和NLRP3。抑制内源性PGD2能够下调大肠杆菌诱导的巨噬细胞中促炎性细胞因子（IL-1β、IL-6和TNF-α）的分泌（P<0.001）,并可以在一定程度上增强巨噬细胞的杀伤功能（P<0.01）。此外，外源性PGD2能够上调大肠杆菌刺激后巨噬细胞中促炎性细胞因子（IL-1β、IL-6和TNF-α）的分泌（P<0.01）,一定浓度范围内的外源性PGD2能够减弱巨噬细胞的杀伤功能（P<0.01）。结果表明，PGD2对大肠杆菌诱导的巨噬细胞细胞因子的分泌和吞噬杀伤功能均具有一定的影响。
  • 玉米赤霉烯酮对梅花鹿鹿茸软骨细胞增殖与凋亡的影响
    王晨浩, 姚雪原, 李柏余, 张巧玲, 岳占碰, 杨占清, 郭斌
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 115-120+128. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.16
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    为了研究玉米赤霉烯酮(zearalenone, ZEA)对梅花鹿鹿茸软骨细胞增殖与凋亡的影响，本试验体外分离了鹿茸软骨细胞，并在培养过程中添加50μmol/L ZEA进行24h诱导。利用流式细胞术检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、线粒体膜电位和细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平。同时，通过荧光定量PCR测定肥大软骨细胞标志基因Col X、Runx2、Alpl以及凋亡相关基因Casp-3、Bax、Bcl-2的表达变化，并检测谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, GR)和氧化应激标志物丙二醇(malondialdehyde, MDA)水平。结果显示，ZEA作用于鹿茸软骨细胞24 h后，细胞增殖活性明显抑制，G0/G1期细胞数量显著增加，而S期细胞数量显著减少；肥大软骨细胞标志基因Col X、Runx2和Alpl的表达量显著升高；细胞凋亡率明显增加，促凋亡基因Casp-3和Bax的表达量升高，而抑凋亡基因Bcl-2的表达量降低；鹿茸软骨细胞的ROS水平上升，MDA含量增加，GR活性降低；线粒体膜电位下调。以上结果表明，ZEA可能通过调节细胞的氧化应激反应和凋亡相关基因的表达，抑制鹿茸软骨细胞的增殖，并促进其凋亡。
  • 黄芩素通过Nrf-2/HO-1信号通路改善脓毒血症小鼠肾损伤
    胡洋, 吕传意, 代鑫, 王宇航, 赵芮竹, 冯嘉轩, 娄石磊, 阎慧, 孙聪
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 121-128. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.17
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    探讨黄芩素调控核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)改善脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导小鼠脓毒血症(sepsis)肾损伤(acute kidney injury, AKI)的机制。60只雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组，模型组，黄芩素低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg)、高剂量黄芩素+鸦胆子苦醇(4 mg/kg)组，灌胃上述剂量的黄芩素悬液7 d后，腹腔注射LPS建立sepsis模型，并在12 h内对sepsis小鼠严重程度进行评分(murine sepsis score, MSS);生化分析仪检测血液中肌酐(serum creatinine, Scr)和尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)含量；酶联免疫吸附检测法(ELISA)测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)含量变化；苏木精-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理变化；蛋白质印迹(Western blot)法测定肾脏组织中Nrf-2、HO-1、caspase-8、TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量；试剂盒检测肾脏组织总SOD活性。结果显示，与模型组相比，黄芩素能保护AKI小鼠肾脏组织，缓解细胞损伤，降低TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子水平(P<0.01)、血清中Scr和BUN的水平(P<0.01),并在提高小鼠Nrf2、HO-1蛋白表达水平(P<0.01)的同时提高抗氧化酶活性。结果表明，黄芩素可通过干预Nrf-2/HO-1信号通路减轻氧化应激，降低炎症反应，对LPS诱导的sepsis AKI起防治作用。
  • 药食同源养荣汤通过PI3K/AKT通路治疗血虚大鼠
    明彦君, 高姗姗, 张甜, 郝健翔, 张进, 张希春, 陈书明
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 129-137. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.18
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    旨在基于网络药理学探讨药食同源养荣汤(Dietary Yangrong Decoction, DYRT)治疗血虚证的分子机制，并研究其血药效应物质成分。通过网络药理学方法预测DYRT治疗血虚证的分子机制。采用环磷酰胺和乙酰苯肼联用法构建大鼠血虚模型，分为空白对照组、模型组、门氏养荣汤组(阳性对照组，Men’s Yangrong Decoction, MYRT)和DYRT组。利用液相色谱-质谱法(HPLC-MS)分析血药效应成分，采用全自动生化分析仪检测外周血象，ELISA法检测血清中造血调控因子的含量，RT-PCR法检测肾脏促红细胞生成素(EPO)及骨髓胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶(AKT)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的相对表达量。结果显示，DYRT含有57个活性成分和128个治疗血虚证的潜在靶点，GO富集分析得到1 835个条目，KEGG富集分析得到79条通路；通过HPLC-MS鉴定出DYRT与MYRT含有12种相同的血药效应成分。动物试验结果表明，与模型组相比，DYRT组大鼠的红细胞数、血小板数和血红蛋白含量均显著升高，白细胞数显著降低(P<0.05);血清中EPO、IL-3、IL-6和GM-CSF的含量显著升高，TNF-α含量显著降低(P<0.05);肾脏EPO和骨髓PI3K、AKT及GM-CSF mRNA的相对表达量显著升高(P<0.05)。与MYRT组相比，DYRT组大鼠的白细胞数显著减少，血清中GM-CSF的含量显著升高，EPO和GM-CSF mRNA的含量显著升高(P<0.05)。本研究结果表明，DYRT含有与MYRT相同的血药效应成分，能够调控造血因子，从而激活PI3K/AKT通路，使机体恢复造血功能，改善血虚状态。
  • 中国荷斯坦奶牛C4BPA基因遗传多态性及其与乳品质的相关性分析
    朱梦云, 姜平, 陈宣旭, 唐仲群, 于海滨, 周焱龙, 刘湘豪, 赵志辉, 林紫薇
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 138-144. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.19
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    补体结合蛋白4的α链(complement component 4 binding protein alpha, C4BPA)基因作为参与补体和凝血系统的重要血浆蛋白，对牛的脂质代谢过程具有调控作用。本研究旨在深入探究C4BPA基因在中国荷斯坦奶牛中的遗传多态性特征及其与乳品质性状之间的关联性。通过对92头中国荷斯坦奶牛的血液样本进行基因组DNA提取和PCR扩增，结合直接测序法，成功获取了C4BPA基因中的单核苷酸多态性(SNP)位点，并进行了与乳品质性状的关联分析。结果显示，在C4BPA基因的第3内含子区域发现了4个SNP位点，其中I3-11 G>A位点与乳蛋白和尿素氮含量存在显著相关性(P<0.05),I3-291 T>G位点与乳糖含量显著相关(P<0.05),I3-374 C>T位点与乳糖和尿素氮含量显著相关(P<0.05),而I3-375 T>G位点则与乳糖、乳蛋白和尿素氮含量均呈现显著相关性(P<0.05)。结果表明，C4BPA基因的多态性位点可作为评估中国荷斯坦奶牛乳品质性状的重要遗传标记，为优质奶牛核心群体的选育工作提供了有价值的参考依据。
  • 猪繁殖与呼吸综合征病毒基因重组的研究进展
    帅文娜, 郭子强, 李佳乐, 罗梦, 李丽薇, 周艳君, 姜一峰, 童武, 童光志, 高飞
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 145-152+162. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.20
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    猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)主要引发母猪流产、死胎、木乃伊胎和仔猪呼吸道症状，自1996年国内首次报道以来，经过20多年的遗传演化，其复杂性显著增加，给养猪业带来了巨大的经济损失。近年来，随着各种PRRSV重组病毒的出现，防控这一疫病的难度进一步加大。现全面梳理PRRSV的基因组结构及功能、RNA病毒重组机制、重组的主要类型、流行现状和主要流行毒株的重组情况，以期为深入研究PRRSV的基因重组提供线索，同时为制定科学的防控策略提供理论支撑。
  • 坏死性凋亡在病毒性感染中作用机制的研究进展
    刘宜雨, 牛静轶, 代宇, 叶超
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 153-162. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.21
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    程序性细胞死亡在机体的生长发育及组织器官的稳态中发挥着重要作用。坏死性凋亡作为一种新型的程序性细胞死亡模式，具有坏死的形态学特征，能够导致细胞崩裂并释放大量损伤相关分子模式，在多种疾病的发生和发展中起着重要作用。病毒性感染疾病严重危害人类和家畜的健康，已有研究证实在病毒性感染中存在坏死性凋亡的细胞死亡途径。本文通过综述坏死性凋亡在病毒性感染中的研究现状，阐明病毒感染与坏死性凋亡之间的相互调控分子机制，以及坏死性凋亡抑制剂的应用进展，旨在为病毒性感染的防治提供新的思路。
  • 动物病毒感染过程中转录组m6A甲基化修饰变化及功能研究进展
    杨锡龙, 邱祥琦, 田佳静, 李梦杰, 龚乐乐, 王乐乐, 孙爱军, 庄国庆
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 163-169+174. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.22
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    动物病毒感染引起的疫病严重制约养殖业健康发展，深入研究病毒的复制和致病分子机制，将为筛选疫苗和药物靶点提供理论依据。N6-甲基腺苷（N6-methyladenosine, m6A）修饰广泛存在于病毒和宿主转录组，参与调控基因表达而影响病毒复制和致病性，是继DNA和蛋白质修饰外的一种新的基因表达调控方式。深度解析m6A甲基化修饰在病毒感染过程中的调控分子机制是生命科学领域研究热点和前沿。近几年，已有相关病毒感染过程中病毒和宿主转录组发生m6A甲基化修饰变化以及相关功能研究的报道。基于此，现综述了非洲猪瘟病毒（ASFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、马立克病病毒（MDV）、新城疫病毒（NDV）、禽白血病病毒（ALV）和鸭甲肝病毒（DHAV）感染细胞或宿主过程中引起转录组m6A甲基化修饰的变化，以及对病毒复制和致病性的影响，探讨m6A甲基化修饰在动物病毒复制和致病作用的机制，以期助力动物疫病防控。
  • CMPK2应对病原感染与调控炎症的研究进展
    吴婵玉, 彭秋月, 牛晓昕, 周作勇
    中国兽医学报. 2025, 45(01): 170-174. https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.23
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    胞苷/尿苷单磷酸激酶2 (cytidine/uridine monophosphate kinase 2,CMPK2)是一种干扰素刺激基因，在抗病毒感染中发挥着重要作用。CMPK2也是线粒体中维持细胞内UTP/CTP水平的限速酶，可影响由病原感染或其他原因引起的线粒体改变而触发的炎症。现主要从CMPK2的结构及分布、CMPK2在应对病原感染和炎症调控中的作用及信号通路进行综述。
2025年, 第45卷, 第04期
刊出日期：2025-04-15
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