诺卡菌（Nocardia）是一种革兰阳性菌，能感染奶牛乳腺引起乳房炎，导致奶牛乳腺组织出现化脓性肉芽肿病变等临床症状。为建立一种快速而准确的牛源诺卡菌检测方法，通过对NCBI上已登记的诺卡菌16S rRNA基因序列进行比对，筛选出一段保守序列，并针对该序列设计了1对引物及TaqMan荧光定量探针。经过验证，结果显示本研究建立的TanMan荧光定量PCR检测方法的Ct值与重组质粒在1×10¹⁰～1×10～2拷贝/μL范围内具有良好的线性关系，其回归方程为y=-3.536x+43.78,相关系数R²=0.997 5,斜率为-3.536,扩增效率（E）=91%,且满足90%<110%的标准，特异性强，与其他病原之间无交叉反应。标准曲线的灵敏度较高，最低检测拷贝数为1×10～2拷贝/μL,灵敏度是普通PCR方法的100倍，且标准曲线具有良好的重复性，组内和组间的变异系数均小于2%。使用该方法检测了234份乳房炎奶样和80份牧场环境样本，阳性检出率为27.07%,而普通PCR方法的阳性检出率为19.43%,因此，该方法比普通PCR方法更灵敏。本试验建立的荧光定量PCR检测方法为牛源诺卡菌的临床检测提供了有效的工具。