针对A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)、口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)和猪捷申病毒(porcine teschovirus, PTV)核酸的保守区域，设计了用于构建TaqMan荧光定量PCR体系的引物和探针。以含有这3种病毒核酸保守序列的重组阳性质粒标准品为模板，建立了3重TaqMan荧光定量PCR方法，并对该体系进行了优化，确定了该方法的特异性、重复性、灵敏性及标准曲线，同时建立了混合感染模型。此外，利用所构建的3重TaqMan荧光定量PCR方法对临床样品进行了检测。结果显示，该方法能够特异性检测SVA、FMDV和PTV 3种病毒，与其他病原体无交叉反应；检测SVA、FMDV和PTV的最低浓度均可达到1×10～1拷贝/μL;组间和组内变异系数均小于5%;在126份样品中未检出这3种病毒。上述结果表明，该方法具有较强的特异性、高灵敏性和良好的稳定性，可用于临床检测。