为探索宿主限制因子(host restriction factors, HRFs)在抗病毒基因药物研发中的应用效果，本研究基于“病毒感染共有通路”及“宿主固有免疫HRFs”,将3种抗病毒HRFs,即胆固醇-25-羟化酶(cholesterol 25-hydroxylase, CH25H)、干扰素诱导跨膜蛋白3(interferon-induced transmembrane protein, IFITM3)、干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15),利用pCK载体进行融合表达，构建抗病毒基因药物。将这3种HRFs的基因编码序列通过裂解肽编码序列连接，构建了融合表达基因序列CH25H-IFITM3-ISG15(CⅡ)。随后，通过PCR扩增CⅡ序列，并将其连接至pCK表达载体上，经转化、鉴定和提取重组质粒，获得了基于DNA表达系统的候选生物药物，命名为pCK-CⅡ。然后，将重组质粒转染至HEK 293T细胞中，通过Western blot成功检测到3种抗病毒蛋白的表达。为明确pCK-CⅡ在细胞水平上的抗病毒作用，将pCK-CⅡ分别转染至HEK 293细胞和BHK-21细胞，24 h后，在BHK-21细胞上接种表达绿色荧光蛋白的水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus expressing green fluorescent protein, VSV-GFP),12 h后在荧光显微镜下观察并进行流式细胞术检测；在HEK 293细胞上接种H3N2亚型流感病毒，12 h后利用Western blot检测H3N2亚型流感病毒核蛋白的表达。结果显示，瞬时转染pCK-CⅡ质粒能显著降低感染细胞的荧光水平和感染细胞中H3N2亚型流感病毒核蛋白的表达。以上结果表明，在细胞水平上，pCK-CⅡ对VSV-GFP和H3N2亚型流感病毒的感染具有抑制作用。