圆圈病毒禽源1型(GyVg1)和圆圈病毒人源1型(GyH1)是两种新发现的可引起鸡腺胃炎相关症状的环形病毒，目前在全球多个地区均有检测报道。本研究旨在建立一种能快速同时鉴别GyVg1和GyH1的二重荧光定量PCR方法。使用GenBank中现有的GyVg1和GyH1基因组序列，基于其保守区分别设计相应的特异性引物和探针，经过优化反应条件，建立了GyVg1和GyH1的二重荧光定量PCR检测方法。应用该检测方法对2023年在广西南宁8个地区采集的256份临床样本进行检测，与常规PCR检测和测序结果进行分析比较，进一步验证该方法的有效性。结果显示，所建立的二重荧光定量PCR方法可在1 h内鉴定出GyVg1和GyH1,两套引物探针均可有效扩增，且与其他病原体无交叉反应；检测下限为7.5拷贝/μL,标准曲线相关系数>0.99,批内和批间变异系数<0.45%。临床样品检测结果显示，当模板量≥100.0拷贝/μL时，二重荧光定量PCR测定与常规PCR测定之间的一致性分别为94.3%(GyVg1)和100%(GyH1)。综上，所建立的二重荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好，适用于GyVg1和GyH1的快速鉴别检测。