2024年, 第47卷, 第01期　
刊出日期：2024-01-30

  

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  旋毛虫钙网蛋白对小鼠巨噬细胞和大鼠PBMC免疫功能的影响

  张朝莹, 文兆海, 张玥, 李嫄, 徐立新, 陆明敏, 宋小凯, 李祥瑞, 严若峰

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 1-8.

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  [目的]本文旨在研究旋毛虫钙网蛋白(TsCRT)对宿主免疫系统的影响。[方法]将原核表达纯化的重组旋毛虫钙网蛋白(rTsCRT))进行Western Blot验证；将rTsCRT与小鼠巨噬细胞共孵育，检测该蛋白对小鼠巨噬细胞增殖、NO释放和凋亡的影响；将rTsCRT与大鼠外周血单核细胞(PBMC)共孵育，检测该蛋白对大鼠PBMC转录因子和细胞因子的影响。[结果]Western blot结果显示，rTsCRT可以被感染旋毛虫的大鼠血清所识别；rTsCRT可促进小鼠巨噬细胞的增殖和NO的分泌，抑制小鼠巨噬细胞的凋亡；rTsCRT下调大鼠PBMC转录因子T-bet、Gata-3和PU.1的转录水平，上调Foxp3、Ahr、RORγt和Bcl-6的转录水平；rTsCRT上调大鼠PBMC细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-10、TGF-β、Il-9和IL-22的转录水平，下调IL-4和IL-21的转录水平。[结论]旋毛虫钙网蛋白可刺激宿主产生Th1、Th17、Treg、Th9和Th22等多种类型的免疫反应，抑制Th2和Tfh免疫，对宿主免疫调节作用复杂。
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  巨型艾美耳球虫Th1类细胞因子刺激性分子EmARM-β对鸡PBMC和T细胞亚群免疫功能的影响

  蒲响林, 潘仰栋, 相权珈, 孙晓婷, 陆明敏, 严若峰, 徐立新, 李祥瑞, 宋小凯

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 9-17.

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  [目的]本文旨在探讨巨型艾美耳球虫Th1类细胞因子刺激性分子Armadillo/β-catenin样重复序列蛋白(EmARM-β)对鸡免疫细胞功能的影响。[方法]利用密度梯度离心法和免疫磁珠分选法分别分离出鸡外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)、CD8~+T细胞和CD4~+CD25~-T细胞，之后将EmARM-β重组蛋白(rEmARM-β)分别与上述细胞进行体外共孵育6 h,利用CCK-8试剂和qPCR法分别检测并分析其对上述细胞增殖能力及相关细胞因子分泌水平的影响。[结果]经免疫磁珠分选后，流式细胞术检测鸡CD8~+T细胞和CD4~+CD25~-T细胞的纯度分别为93.01%和88.88%。与对照组相比，rEmARM-β显著促进鸡PBMC的增殖能力，显著上调Th1类细胞因子(ifn-γ和il-2)和促炎性细胞因子(il-1β、il-6和il-17a)mRNA水平；显著促进CD8~+T细胞的增殖能力，显著上调其ifn-γ、il-2和tnf-α mRNA水平，显著上调穿孔素、fasl(Fas配体)和fas mRNA水平；能显著促进CD4~+CD25~-T细胞的增殖能力，显著上调其ifn-γ和il-2 mRNA水平，下调il-4和il-10 mRNA水平。[结论]EmARM-β可以有效促进鸡PBMC和T细胞亚群(CD8~+T细胞和CD4~+CD25~-T细胞)的增殖能力，提升其Th1类细胞因子和促炎性细胞因子的分泌水平，提示EmARM-β具有研发鸡球虫病新型疫苗候选抗原的潜力。
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  H9N2 AIV灭活疫苗免疫SPF鸡攻毒后肺组织免疫相关基因表达变化研究

  李丽, 蒋作仪, 李茵婧, 常丽凤, 辛震东, 平继辉, 苏娟

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 18-27.

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  [目的]本试验旨在探究H9N2亚型禽流感病毒攻击对H9灭活疫苗免疫SPF鸡呼吸系统的影响。[方法]选用36只3周龄SPF鸡，随机分为对照组(Con)、攻毒组(Flu)、免疫后攻毒组(Vac+Flu)。以每只0.4 mL剂量免疫接种H9灭活疫苗，3周后以10~6 EID_(50)的病毒量进行攻毒，采集拭子、血清、气管、肺组织等样品，通过血凝抑制(HI)试验、RT-PCR、荧光定量PCR(qPCR)等方法检测血清中HI抗体滴度、肺脏流感病毒M基因拷贝数以及免疫相关基因CD4、CD8、GATA3、T-bet、IL-4、IL-13、TNF-α、IFN-γ、Perforin、Granzyme、FasL、Fas等的表达量；并利用HE染色、免疫组织化学的方法观察气管、肺脏的病理变化及病毒特异性抗原NP蛋白的分布特征。[结果]HI试验结果显示，SPF鸡疫苗免疫后可产生较高的H9N2 AIV抗体效价。免疫保护试验和RT-PCR结果显示，SPF鸡疫苗免疫后攻毒仍能检测到机体排毒和流感病毒M基因在肺脏组织中的表达。HE染色和免疫组化结果显示，接种H9N2 AIV灭活疫苗后能够明显减轻SPF鸡气管和肺脏的病理损伤，降低气管、肺脏中的病毒载量。荧光定量PCR结果显示，接种H9N2 AIV灭活疫苗后能够提高SPF鸡肺脏中Th1、Th2细胞因子分泌水平，促进穿孔素/颗粒酶途径相关基因表达进而增强肺脏中细胞毒性反应。[结论]H9N2疫苗免疫鸡感染H9病毒后虽然仍存在排毒现象，但其抗病毒免疫系统活跃、其主要器官病毒载量降低，建议按照流感疫苗免疫程序进行免疫接种，提高对流感的防控水平。
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  衣康酸二甲酯对H_2O_2诱导的AML-12细胞线粒体功能障碍的调节作用及机制研究

  闫巍元, 张锐, 马海田

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 28-35.

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  [目的]本文主要探究衣康酸二甲酯(dimethyl itaconate, DMI)对小鼠肝细胞线粒体功能障碍的调节作用及其机制，旨在为衣康酸二甲酯作为一种生理调节剂用于防控畜禽因线粒体功能障碍引发的相关疾病提供理论依据。[方法]以小鼠肝细胞系(AML-12细胞)为研究对象，试验分为对照组(NC)、0.5 mmol·L~(-1) DMI处理组、150μmol·L~(-1) H_2O_2处理组和0.5 mmol·L~(-1) DMI+150μmol·L~(-1) H_2O_2处理组。分别检测AML-12细胞中ATP含量、线粒体DNA(mtDNA)拷贝数、线粒体活性氧(mROS)水平和线粒体膜电位(MMP)等生化指标，并用免疫印迹法检测AMP-依赖性蛋白激酶(AMPK)信号通路关键因子蛋白的表达水平。[结果]0～0.5 mmol·L~(-1) DMI和0～150μmol·L~(-1)H_2O_2对细胞活力无显著影响。DMI处理显著抑制H_2O_2诱导的AML-12细胞中mROS水平升高以及MMP的异常下降，以及ATP含量和mtDNA拷贝数的下降(P<0.01)。DMI处理极显著抑制H_2O_2诱导的小鼠肝细胞中p-AMPK、NAD-依赖性去乙酰化酶1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(Nrf1)和线粒体转录因子A(TFAM)蛋白水平的下降(P<0.01),而AMPK抑制剂Compound C预处理则可逆转这一效应。[结论]DMI通过激活AMPK-SIRT1-PGC1α信号通路缓解H_2O_2诱导的AML-12细胞线粒体功能障碍。
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  大豆黄酮影响青春期小鼠乳腺发育的潜在机制

  谢娜娜, 黄心河, 张亚锋, 张源淑, 韩正康

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 36-43.

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  [目的]以大豆黄酮(DZ)作用于青春期雌性小鼠，探讨其通过上调雌二醇(E2)水平和雌激素受体β(ERβ)受体表达影响青春期小鼠乳腺发育的机制，为DZ及其他植物雌激素类在畜牧生产和临床应用提供依据。[方法]选取48只2周龄C57BL/6雌性小鼠，随机均分为3组：对照组，腹腔注射无菌的PBS;DZ处理组，腹腔注射DZ(100 mg·kg~(-1));阳性对照组，腹腔注射E2(0.2 mg·kg~(-1)),每组16只。分别在饲养至21和28 d,每组随机选取8只，采集血液，测定血液中E2含量，处死后摘取乳腺，测定乳腺指数并检测乳腺组织中E2含量。取同侧部位乳腺制作组织学切片，免疫组化检测核增殖抗原蛋白(PCNA)的表达，Western blot法分析乳腺组织内细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和D3(cyclin D3)、ERβ蛋白表达水平。[结果]与对照组相比，DZ处理显著增加饲养21～28 d小鼠体重及采食量；增加21 d小鼠血液和乳腺组织中E2含量，但未达到显著水平(P>0.05);显著增加28 d小鼠血液和乳腺组织中E2含量(P<0.05);E2处理血液中E2含量均极显著增加。DZ处理对饲养21 d小鼠乳腺指数影响较小，显著增加饲养28 d小鼠乳腺指数(P<0.05);E2处理具有相同趋势(P<0.05)。HE染色结果显示，DZ和E2处理均极显著增加饲养21和28 d小鼠乳腺组织小叶内的导管数(P<0.01)和乳腺组织PCNA阳性细胞数(P<0.01)。Western blot结果显示，DZ及E2处理均可上调小鼠乳腺组织cyclinD1、cyclinB1、ERβ蛋白的表达，显著上调饲养28 d小鼠cyclinD1、cyclinB1、ERβ蛋白的表达(P<0.05)。[结论]DZ处理可促进青春期小鼠乳腺发育，促进乳腺细胞增殖和分裂，这种作用可能与内源性E2水平升高及ERβ受体有关。
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  饲料中添加复合胆汁酸对皮质酮诱导的肉鸡脂肪肝综合征的缓解作用研究

  胡丹, 郝燕青, 陈渠, 邬晓婷, 倪迎冬

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 44-51.

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  [目的]本试验旨在探究饲料中添加胆汁酸(bile acid, BA)对皮质酮(corticosterone, CORT)诱导的肉鸡脂肪肝综合征的缓解作用。[方法]试验选取了120只1日龄雄性AA肉鸡，随机分为2组，分别饲喂基础日粮和含BA日粮。BA添加分为前期、中期、后期3个阶段，剂量依次递增。28日龄时，从基础日粮组中选取肉鸡20只，随机分为对照组(control, CON)、皮质酮处理组(CORT);从胆汁添加组中随机选取10只设为皮质酮+胆汁酸组(CORT+BA)。CON组颈部皮下注射乙醇PBS溶液(15%乙醇),CORT组和CORT+BA组注射4 mg·kg~(-1) CORT,连续注射7 d。肉鸡40日龄屠宰采样，记录器官与组织质量，采集血清和肝脏组织以测定生化指标、脂代谢相关基因和蛋白表达水平。[结果]饲料中添加BA可显著缓解由CORT处理引起的腹脂率升高及腿肌重降低(P<0.05)。生化测定结果表明，CORT处理显著降低了40日龄肉鸡血清中高密度脂蛋白(HDLC)水平、增加游离脂肪酸(NEFA)水平，而BA处理显著升高血清HDLC水平(P<0.05)。与CON组相比，CORT组肉鸡肝脏内甘油三酯(TG)水平显著升高(P<0.01),肝细胞内脂滴显著富集且出现空泡化现象，而BA处理可显著缓解肝脏内的TG沉积(P<0.01)。CORT处理显著上调肝脏中硬脂酰辅酶A去饱和酶(scd1)和乙酰辅酶A羧化酶(acc)基因表达水平(P<0.05),显著上调ACC和脂肪酸合成酶(FASN)蛋白表达水平(P<0.05),同时下调过氧化物增殖激活受体(PPARα)蛋白的表达水平(P<0.05);BA处理可显著逆转皮质酮引起的以上基因和蛋白表达变化，并显著增加肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(cpt1a)基因表达水平，显著降低脂肪酸转位酶(CD36)蛋白表达水平(P<0.05)。[结论]日粮中添加胆汁酸可减少肝脏内甘油三酯合成，促进其分解，抑制肝细胞对脂肪酸的摄取，从而缓解皮质酮诱导的肉鸡脂肪肝综合征。
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  外源性脂多糖对马冈鹅胚胎期胸腿肌发育的影响

  王金辉, 付梦思, 李发达, 江丹莉, 田允波, 许丹宁, 黄运茂, 张续勐

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 52-60.

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  [目的]胚胎期是脊椎动物肌肉发育的重要时期，在鹅胚发育过程中，易受到种鹅体内脂多糖(LPS)垂直污染而导致死胚和弱苗的产生。本研究通过注射外源性LPS,模拟受LPS污染的马冈鹅胚胎，探究外源性LPS对马冈鹅胚胸腿肌发育的影响。[方法]选取8胚龄(E8)马冈鹅胚，分别注射含0、25、50和100μg LPS的生理盐水100μL于尿囊腔。于15胚龄(E15)、23胚龄(E23)和雏鹅1日龄(1 d)时采集尿囊液(1日龄采集血清)进行LPS含量检测，取胸腿肌组织进行HE染色切片并统计肌束面积和密度，检测胸腿肌中基因和1 d时蛋白表达量。[结果]外源性LPS显著降低鹅胚的孵化率。E23时，100μg LPS组雏鹅尿囊液LPS含量显著高于其他3组(P<0.05)。LPS显著降低E23和1 d胸肌肌束面积，显著降低E15肌束密度，显著提高E23胸肌肌束密度，显著降低E15和1 d腿肌肌束面积(P<0.05)。LPS组E15鹅胚胸肌炎症相关因子基因(IL-6、TNF-α)和成肌增殖相关基因(IGF-1、MyoD)的表达量显著降低(P<0.05);1 d时，IGF-1基因表达量显著升高，成肌分化相关基因(Myogenin,Myh1)表达量显著降低(P<0.05);LPS组E15鹅胚腿肌IL-6、TNF-α、MyoD、Myogenin和Myh1基因表达量显著上调，IGF-1基因表达量显著下调(P<0.05),1 d时，仅100μg组IL-6和Myogenin基因表现出显著上调(P<0.05)。蛋白表达方面，1 d时，外源性LPS组胸肌TNF-α蛋白表达量显著升高，MyoD蛋白表达量显著降低(P<0.05);腿肌IL-6、TNF-α和MyHC蛋白表达量显著升高，MyoD蛋白表达量显著降低(P<0.05)。[结论]外源性LPS会导致雏鹅孵化率降低，胸腿肌肌束横截面积显著降低，炎症因子表达量上升，成肌增殖相关基因表达量降低，不利于马冈鹅胚胎肌纤维生长发育。
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  NDM-5-C208A突变大肠埃希菌的构建及大蒜辣素与NDM-5相互作用位点分析

  叶志滨, 王晓明, 吕茜, 刘雨桐, 金季赜晓, 朱馨艺, 黄金虎, 王丽平

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 61-68.

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  [目的]产新德里金属β-内酰胺酶5(NDM-5)的革兰阴性耐药菌对人畜健康产生巨大威胁。本文旨在初步探究大蒜辣素对NDM-5的抑制作用及其相关作用位点，为临床开发新型β-内酰胺酶抑制剂提供理论支持。[方法]通过AutoDock模拟分子对接，预测大蒜辣素与NDM-5的结合位点；构建突变型载体pET21a-NDM-5-C208A,测序验证无误后转入感受态大肠埃希菌BL21(DE3),通过药敏试验进行突变表型确认；采用微量肉汤棋盘法和时间杀菌曲线测定大蒜辣素与美罗培南对NDM-5突变型细菌的联合抑菌效果。通过体外表达突变蛋白NDM-5-C208A,建立酶活性测定体系，比较大蒜辣素对C208突变型NDM-5和野生型NDM-5酶活性的抑制效果。[结果]经测序证实NDM-5的C208A突变株BL21(DE3)pET21a-NDM-5-C208A构建成功，C208A突变株恢复了对头孢类和碳青霉烯类抗生素的敏感性，且大蒜辣素与美罗培南联用的联合抑菌指数由0.375增加至2,联用表现为独立作用而非协同作用；体外酶活测定结果显示NDM-5-C208A突变不仅使酶活性下降约85%,而且该位点突变导致大蒜辣素对NDM-5失去抑制作用。[结论]Cys208位点是维持NDM-5水解酶活性的关键位点，且大蒜辣素可通过与该位点结合发挥抑制酶活性的作用。该结果为大蒜辣素作为新型β-内酰胺酶抑制剂的开发和应用提供试验依据。
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  牦牛源短小芽胞杆菌TS1的分离鉴定及其生物学特性研究

  刘银坤, 李昊, 李子昕, 李知新, 张玉彦, 李文财, 任建军, 唐姝

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 69-77.

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  [目的]本试验旨在研究一株牦牛源短小芽孢杆菌(命名：TS1)的分离鉴定、抗逆性、对常用抗菌药物的耐药性以及对常见致病菌的抑菌活性，初步探索其作为益生菌添加剂在畜牧养殖中应用的可行性。[方法]对健康牦牛新鲜粪便进行100℃水浴处理10 min以筛选具有抗逆性的芽胞杆菌，进行形态学、生理生化特征及16S rRNA序列分析鉴定，通过测量生长曲线、耐酸、耐胆盐试验、药敏试验及抑菌试验等方法对其生物学特性进行研究，通过全基因测序分析其可能产生抗菌物质的类型。[结果]TS1为短小芽胞杆菌且具有耐酸、耐胆盐生长特性；TS1对于12种常见的抗菌药物敏感，且对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪链球菌具有抑菌作用。测序分析显示该菌株可编码与Amylocyclicin同源性达48.90%的一种新型抗菌肽，进而发挥其抗菌活性。[结论]短小芽胞杆菌TS1有一定的抗逆性和潜在的益生能力及广谱抗菌效果，并且在畜禽肠道微生物系统中对抗生素耐药性传递的风险较低，适合作为益生菌添加剂类抗生素替代产品。
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  饲粮添加不同水平芦丁对肉鸡肉品质和抗氧化功能的影响

  马龙飞, 陈顺, 周斌斌, 刘慧娟, 张佳琦, 王恬, 王超

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 78-86.

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  [目的]本试验旨在研究饲粮添加不同水平芦丁对肉鸡肌肉品质和抗氧化功能的影响。[方法]试验选取1日龄健康且体重相近的雄性肉鸡256只，随机分为4组，每组8个重复，每个重复8只鸡。对照组饲喂基础饲粮，试验组在基础饲粮中分别添加250、500和1 000 mg·kg~(-1)芦丁。试验期第42天，每个重复取1只接近平均体重的肉鸡屠宰取样测定肉鸡肉品质、水分分布、脂肪酸含量、抗氧化等相关指标。[结果]与对照组相比，饲粮中添加250、500和1 000 mg·kg~(-1)芦丁显著降低了胸肌宰后24和48 h的滴水损失(P_T<0.05),添加250与500 mg·kg~(-1)芦丁分别降低胸肌的蒸煮损失与剪切力值(P_T<0.05),添加500和1 000 mg·kg~(-1)芦丁显著提高了胸肌pH_(24 h)值(P_T<0.05),添加500 mg·kg~(-1)芦丁显著降低了肉鸡胸肌中自由水的弛豫时间(T_(22))值(P_T<0.05);饲粮中芦丁的添加量与pH_(24 h)值、24和48 h的滴水损失呈线性或二次相关(P_T<0.05)。在脂肪酸含量方面，饲粮中添加250和500 mg·kg~(-1)芦丁显著增加了肉鸡胸肌中硬脂酸含量(P_T<0.05),添加500和1 000 mg·kg~(-1)芦丁显著提高了肉鸡胸肌中花生一烯酸和多不饱和脂肪酸(PUFA)含量(P_T<0.05),同时500 mg·kg~(-1)芦丁组胸肌中棕榈油酸和二十四碳一烯酸含量显著增加(P_T<0.05),1 000 mg·kg~(-1)芦丁组胸肌中γ-亚油酸含量显著降低(P_T<0.05)。在抗氧化能力方面，饲粮中添加500 mg·kg~(-1)芦丁显著降低了胸肌中MDA含量(P_T<0.05),提高了T-SOD活性(P_T<0.05),并显著增加胸肌中Nrf2和SOD mRNA的表达量(P_T<0.05),250 mg·kg~(-1)芦丁能够显著提高SOD mRNA的表达量(P_T<0.05)。饲粮中芦丁的添加量与MDA含量、Nrf2和GSH-Px mRNA表达量呈线性或二次相关(P<0.05)。[结论]肉鸡饲粮中添加芦丁可通过增强肌肉的保水性，提高胸肌pH_(24 h)值并调节肉鸡胸肌中脂肪酸比例从而提高了肉鸡肉品质，这与芦丁激活肌肉中Nrf2信号通路并增强其抗氧化能力有关。在本试验条件下，芦丁的适宜添加量为500 mg·kg~(-1)。
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  姜酚和百里香酚对白羽肉鸡小肠形态结构和屏障功能的影响

  尹莉丽, 吴建民, 陈露, 赵文轩, 汪晶, 朱伟云

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 87-95.

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  [目的]本试验旨在研究日粮添加姜酚、百里香酚及其组合对白羽肉鸡小肠形态、免疫功能及肠道屏障的影响。[方法]将200只1日龄AA白羽肉鸡随机分为4组，每组5个重复，每个重复10只，试验期为42 d。4个处理组如下：对照组(Con组，基础日粮)、姜酚组(Gin组，基础日粮+60 mg·kg~(-1)姜酚)、百里香酚组(Thy组，基础日粮+30 mg·kg~(-1)百里香酚)及姜百组(Gin+Thy组，基础日粮+30 mg·kg~(-1)姜酚+15 mg·kg~(-1)百里香酚)。在试验期第42天，采集肉鸡的空肠和回肠制作切片并观察，取空肠和回肠黏膜以测定免疫球蛋白含量、细胞因子含量、抗氧化酶活性、紧密连接和抗氧化相关基因表达。[结果]与对照组相比，姜百组肉鸡回肠绒毛高度(VH)有增加的趋势(P=0.063),绒毛高度/隐窝深度(V/C)值显著提高(P<0.05);姜百组肉鸡空肠和回肠黏膜中分泌性免疫球蛋白A(sIgA)含量显著提高(P<0.05),空肠黏膜中白介素6(IL-6)和干扰素γ(IFN-γ)含量以及回肠黏膜中IL-6和白介素1β(IL-1β)含量显著降低(P<0.05);姜百组肉鸡空肠和回肠黏膜中总抗氧化能力(T-AOC)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高(P<0.05);姜百组肉鸡空肠黏膜中核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)和回肠黏膜中Nrf2、超氧化物歧化酶1(SOD1)、GPX4的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),空肠和回肠黏膜中的Occludin mRNA相对表达量显著增加(P<0.05)。[结论]日粮添加姜酚和百里香酚组合可以提高肉鸡的抗氧化能力和免疫功能，并通过改善肠道形态和肠道屏障促进肠道健康。
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  基于TMT蛋白组学分析姜黄素对热应激蛋鸡肝脏抗氧化性能的影响

  杨铭宣, 刘梦杰, 王晋, 虞德兵

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 96-104.

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  [目的]本试验旨在研究日粮添加姜黄素对由热应激引起的蛋鸡肝脏抗氧化性能损伤的影响。[方法]以南京盘滁机械化养鸡场提供的180只280日龄海兰蛋鸡为研究对象，随机分成3组：对照组(Con)饲喂基础饲粮，环境温度为(24±2)℃;热应激组(HS)是基于对照组的基础上每天维持热应激6 h以上，环境温度为(34±2)℃;姜黄素组(HS+CUR)是在热应激组的基础上，饲喂基础饲粮中添加150 mg·kg~(-1)姜黄素的试验饲粮；每组4个重复，每个重复15只鸡。采集蛋鸡肝脏组织样利用TMT(tandem mass tags)蛋白质组学技术分析蛋鸡肝脏蛋白质差异表达。[结果]实时荧光定量PCR结果显示：热应激组与对照组相比肝脏SOD1和GPX1的表达极显著降低(P<0.01),CAT表达水平显著降低(P<0.05);添加姜黄素可以极显著增加肝脏SOD1和GPX1表达水平(P<0.01),显著增加CAT表达水平(P<0.05)。TMT蛋白组学分析共检测到5 039个蛋白，其中4 235个具有定量信息，差异表达蛋白主要参与脂质和葡萄糖代谢、氧化应激、线粒体功能障碍和炎症反应等生物进程；主要参与的途径有PPAR信号通路、过氧化物酶体、脂质代谢、细胞色素P450、生物合成以及脂肪细胞因子信号通路等。选取15个显著表达的蛋白进行基因水平上的验证，结果表明基因水平和蛋白组学分析结果一致。[结论]补充姜黄素可以缓解蛋鸡由热应激引起的肝脏氧化应激以及与脂质代谢相关生物学过程。
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  不同月龄苏淮育肥猪纤维表观消化率、肠道长度与微生物差异分析

  杜陶然, 牛清, 蒲广, 李开军, 刘根盛, 牛培培, 张总平, 李强, 李平华, 黄瑞华

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 105-112.

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  [目的]本试验旨在探究不同月龄苏淮育肥猪耐粗饲特征(以纤维表观消化率为评定表型)、肠道发育及肠道微生物的差异，并分析肠道发育及微生物与纤维表观消化率的相关性。[方法]试验选取82头出生条件相近的苏淮猪，在相同饲养环境下饲养，分别在7、8月龄时进行屠宰。采集结肠后端内容物样品并测定不同月龄结肠后段各营养成分的表观消化率；测定肠道长度、周长，分析不同月龄苏淮育肥猪肠道营养成分表观消化率和肠道发育差异，并进行消化率与肠道长度、周长的相关性分析。同时，分别在7、8月龄猪中选取高纤维消化率组和低纤维消化率组各5头进行盲肠、结肠内容物常见纤维分解菌的丰度分析。[结果]8月龄苏淮猪的粗纤维、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、粗蛋白和粗脂肪的表观消化率均显著高于7月龄(P<0.05),但8月龄苏淮猪大肠、小肠及整个肠道长度、盲肠、结肠周长与7月龄间无显著差异。盲肠周长与粗纤维、酸性洗涤纤维和粗脂肪的表观消化率呈显著正相关(P<0.05)。7月龄和8月龄苏淮猪的盲肠、结肠白化瘤胃球菌和柔嫩梭菌的丰度在高、低纤维消化率组间均无显著差异。7月龄苏淮猪的结肠柔嫩梭菌丰度在高、低纤维消化组均显著高于盲肠(P<0.05)。8月龄苏淮猪结肠柔嫩梭菌丰度在低纤维消化率组显著低于7月龄(P<0.05)。[结论]不同月龄苏淮猪耐粗饲特征不同，随月龄的增加，苏淮猪的消化性能逐渐完善，8月龄苏淮猪各营养成分表观消化率显著高于7月龄，且其纤维消化率与盲肠周长呈显著正相关，但肠道内容物中白化瘤胃球菌和柔嫩梭菌可能不是影响其纤维消化的关键微生物。
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  湿法膨化和发酵豆粕对断奶仔猪生长性能、免疫功能及氨基酸消化率的影响

  张相雷, 金灵红, 杨金玉, 陶生祥, 卓儒浩, 许梦慧, 吴嘉敏, 柳清扬, 钟翔

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 113-122.

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  [目的]本试验旨在探究湿法膨化和发酵豆粕对断奶仔猪生长性能、免疫功能及氨基酸消化率的影响。[方法]选用21日龄、体重相近，公母各半的288头断奶仔猪，随机分为4组，每组6个重复，每个重复12头。常规组(Con)饲喂常规豆粕，3个试验组分别为湿法膨化1组(WeSM1)、湿法膨化2组(WeSM2)和发酵组(FSM),分别饲喂湿法膨化豆粕和发酵豆粕。在试验的14和49 d,于每个重复中随机选取1只健康状况良好的断奶仔猪采血。在试验的47～49 d,连续收集3 d的粪便用于养分及氨基酸消化率的测定。[结果]湿法膨化1组和湿法膨化2组断奶仔猪平均日增重和采食量均高于常规组(P>0.05),以湿法膨化1组的效果最优。发酵组料重比显著高于常规组(P<0.05)。与常规豆粕和发酵豆粕相比，饲喂湿法膨化豆粕可以显著提高断奶仔猪总能、粗灰分的表观消化率(P<0.05);与常规组相比，其他3组赖氨酸、精氨酸、丝氨酸和天冬氨酸表观消化率显著提高(P<0.05),以湿法膨化1组效果最好。与常规组相比，湿法膨化2组和发酵组仔猪血清游离精氨酸、赖氨酸、酪氨酸含量显著提高(P<0.05)。在试验14 d,与常规组相比，发酵组血清球蛋白含量显著提高，白蛋白与球蛋白之比显著降低(P<0.05),发酵组和湿法膨化2组断奶仔猪血清中IgM含量显著提高(P<0.05),湿法膨化1组和2组及发酵组仔猪血清中MDA的含量均显著降低(P<0.05);与湿法膨化1组、湿法膨化2组相比，发酵组试验49 d血清中GSH-Px的活性显著提高(P<0.05)。[结论]豆粕经湿法膨化和发酵处理能够提高断奶仔猪的生长性能、养分消化率、血清抗氧化和免疫相关指标及游离氨基酸含量，且发酵豆粕在提高血清抗氧化及免疫功能方面优于湿法膨化豆粕，但在提高仔猪生长性能、养分表观消化率方面不及湿法膨化豆粕。
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  大约克公猪精液质量与粪便菌群的相关性分析

  锁云鹏, 李晓彤, 李延森, 沈丹, 李春梅

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 123-132.

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  [目的]本试验旨在研究不同精液质量公猪粪便的菌群组成、睾酮及内毒素水平，分析粪便菌群丰度与精液质量、睾酮及内毒素的相关性，为通过调控公猪肠道菌群改善精液质量提供依据。[方法]依据试验前3个月的所有公猪精液质量参数，挑选33头日龄(479.33±2.85)和体况相近的大约克公猪，划分为低质量精液(LSQ)组(12头)和高质量精液(HSQ)组(21头)。采集试验公猪新鲜粪便进行睾酮和内毒素水平检测，并通过16S核糖体RNA(16S ribosomal RNA,16S rRNA)基因测序技术分析粪便的菌群组成。[结果]HSQ组公猪粪便睾酮水平显著高于LSQ组(P<0.01),内毒素水平无显著差异。HSQ组和LSQ组的公猪粪便菌群存在3个差异菌科和5个差异菌属。在科水平上，Eubacterium＿coprostanoligenes＿group在LSQ组中显著富集(P<0.05),Atopobiaceae和Akkermansiaceae在HSQ组中显著富集(P<0.05);在属水平上，g＿norank＿f＿Eubacterium＿coprostanoligenes＿group和Faecalibaculum在LSQ组中显著富集(P<0.05),g＿norank＿f＿Atopobiaceae、Akkermansia和Clostridium＿sensu＿stricto＿6在HSQ组中显著富集(P<0.05)。Eubacterium＿coprostanoligenes＿group丰度与精子活力及精子密度存在显著的负相关关系(P<0.01),与粪便睾酮水平呈负相关(P=0.11);Atopobiaceae丰度与精子活力、精子密度和粪便睾酮水平存在显著的正相关关系(P<0.05);Akkermansiaceae丰度与精子活力(P<0.01)及精子密度(P<0.05)存在显著的正相关关系，与粪便睾酮水平呈正相关(P=0.09)。[结论]不同精液质量的公猪粪便睾酮水平和菌群组成存在差异，公猪粪便菌群结构与精液质量、粪便睾酮水平存在不同程度的相关性，研究结果为通过调控肠道菌群来改善公猪精液质量提供新的理论支撑。
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  日粮精粗比对舍饲育肥牦牛瘤胃菌群结构、挥发性脂肪酸及其转运载体表达量的影响

  徐俊杰, 王莹, 丁宁, 马向花, 刘塔, 周天赐, 李涛, 袁朝海, 张威, 蔡亚非

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 133-141.

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  [目的]本试验以舍饲育肥牦牛为研究对象，探究日粮精粗比对舍饲育肥牦牛瘤胃代谢的影响，期望为青海牦牛规模化、产业化和现代化养殖过程中日粮精粗比调控提供参考。[方法]对15头试验牛群进行分组，分别饲喂精粗(质量)比为3∶7(A组)、5∶5(B组)、7∶3(C组)的全混合日粮(total mixed ration, TMR)。饲喂90 d后于凌晨空腹屠宰，采集瘤胃液和瘤胃上皮组织，通过16S核糖体RNA(16S ribosomal RNA,16S rRNA)高通量测序、气相色谱、RT-qPCR以及Western blot试验方法，探究不同精粗比日粮饲喂下，舍饲育肥牦牛瘤胃细菌菌群结构、瘤胃发酵参数以及瘤胃上皮中挥发性脂肪酸(VFA)转运载体表达量的变化。[结果]日粮精粗比显著影响瘤胃细菌菌群结构，随着精料占比升高，在门水平上，拟杆菌门(Bacteroidetes)、螺旋体门(Spirochaetes)和黏胶球形菌门(Lentisphaerae)相对丰度显著上升(P<0.05),厚壁菌门(Firmicutes)和软壁菌门(Tenericutes)相对丰度显著下降(P<0.05);属水平上，随着精料比例提高，理研菌科RC9肠道群(Rikenellaceae RC9 gut group)、克里斯腾森菌科R7群(Christensenellaceae R7 group)、Saccharofermentans、产琥珀酸菌属(Succiniclasticum)和Lachnoclostridium相对丰度显著升高(P<0.05),C组牦牛瘤胃球菌属(Ruminococcus)和拟杆菌属(Bacteroides)相对丰度显著低于A组(P<0.05),B组和C组牦牛普氏菌属(Prevotella)、假丁酸弧菌(Pseudobutyrivibrio)和密螺旋体属(Treponema)相对丰度显著高于A组(P<0.05)。日粮精粗比对瘤胃pH值及VFA产量影响显著，精粗比上升显著下调瘤胃内容物pH值(P<0.05),乙酸浓度、乙酸浓度/丙酸浓度显著降低(P<0.05),丙酸、戊酸和总VFA浓度显著升高(P<0.05),与A、B组相比，C组丁酸和异丁酸浓度显著升高(P<0.05)。日粮精粗比对瘤胃上皮VFA转运载体表达量影响显著。随着日粮精料比例升高，腺瘤下调蛋白基因(DRA)、假定阴离子转运载体1基因(PAT1)、单羧酸转运载体1基因(MCT1)和单羧酸转运载体4基因(MCT4)在mRNA水平的相对表达量显著升高(P<0.05),而阴离子交换蛋白2基因(AE2)在mRNA水平和蛋白水平的相对表达量则显著下降(P<0.05),上述基因的蛋白表达趋势与mRNA的一致。随着日粮精粗比例升高，牦牛的生产性能，即平均日增重、饲料转化率、屠宰率也随之提高，且具有显著差异(P<0.05)。[结论]饲喂高精料日粮可提升牦牛瘤胃中非纤维素降解菌的相对丰度，使大量能量饲料和蛋白饲料快速转化为VFA,为机体供能。激活瘤胃上皮细胞中VFA转运载体，提高其表达量，加快VFA转运入血的速度，以提高脂肪代谢底物，最终达到快速育肥的效果。
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  日粮添加蚕豆皮对湖羊空肠屏障相关基因表达、消化酶活性和微生物菌群的影响

  刘静, 王钊, 于昊, 夏雨婷, 李鹏, 牛伟强, 万永杰, 茆达干

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 142-150.

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  [目的]本试验旨在研究日粮添加蚕豆皮对湖羊空肠屏障相关基因表达、消化酶活性和微生物菌群的影响。[方法]30只4月龄体重相近[(27±2.0)kg]的雄性湖羊分为2组，分别饲喂基础日粮(对照组，CON)和添加30%蚕豆皮日粮(蚕豆皮组，BBS)。预饲期10 d,正式期50 d。试验结束后采集空肠组织及食糜(n=5),通过RT-qPCR检测黏膜屏障相关基因的表达，生化试剂盒检测消化酶活性，高通量测序分析食糜微生物菌群。[结果]与对照组相比，BBS组空肠黏膜细胞连接基因Claudin-1、Occludin、MUC-2和ZO-1,促炎因子IL-6、IL-10和TNF-α mRNA水平无显著变化(P>0.05),而IL-1β mRNA水平显著降低(P<0.05)。2组空肠黏膜α-淀粉酶、胰蛋白酶和脂肪酶活性无显著变化(P>0.05)。BBS组食糜微生物Shannon、Chao1和Observed＿otus指数显著降低(P<0.05);门水平上，BBS组变形菌门(Proteobacteria)相对丰度显著升高(P<0.05),厚壁菌门(Firmicutes)、髌骨细菌门(Patescibacteria)相对丰度和F/B值显著降低(P<0.05);属水平上，BBS组克里斯滕森氏菌R7菌群(Christensenellaceae＿R-7＿group)、未分类厚壁菌属(Firmicutes＿unclassified)、糖单胞菌属(Candidatus＿Saccharimonas)、糖酵解菌属(Saccharofermentans)、毛螺科NK3A20菌群(Lachnospiraceae＿NK3A20＿group)和聚乙酸菌属(Acetitomaculum)的相对丰度显著下降(P<0.05)。16S rDNA基因组的PICRUSt 2功能预测结果显示，空肠微生物差异菌群主要富集在三羧酸循环、脂肪酸β氧化、原儿茶酸降解和L-亮氨酸降解通路。[结论]日粮添加30%蚕豆皮可降低空肠黏膜炎症因子IL-1β mRNA表达量，改变空肠食糜微生物菌群多样性和相对丰度，调节肠道发酵环境。研究结果为蚕豆皮在养羊业发展中的应用提供参考。
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  发酵饲料对育肥湖羊生产性能、养分表观消化率、瘤胃发酵特性及肉品质的影响

  金宏, 柏杨, 邓孟云, 张敏, 马婷, 华金玲

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 151-156.

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  [目的]本试验旨在研究饲粮中不同比例发酵饲料对育肥湖羊瘤胃发酵特性、营养物质表观消化率、生产性能及肉品质的影响。[方法]选取6月龄左右、体重(30.86±4.50)kg健康湖羊70只，随机均分5组(每组14只),分别在基础日粮中添加0%(对照组)、2%、4%、6%、8%的发酵饲料(有益菌含量≥1×10~8 CFU·g~(-1))。预饲期15 d,正试期45 d。正试期第45天采集瘤胃液用于瘤胃发酵特性测定；正试期43～45 d,采集饲粮和粪样，测定养分表观消化率；根据正试期采食量、初末重测定生长性能指标；试验结束当天每组随机选择3只育肥羊屠宰，用于胴体性状及肉品质测定。[结果]添加6%发酵饲料的湖羊平均日增重(ADG)显著增加(P<0.05),料重比(F/G)、平均日采食量(ADFI)、干物质采食量(DMI)极显著降低(P<0.01);添8%发酵饲料的湖羊屠宰率较对照组有显著提高(P<0.05)。添加2%、4%发酵饲料时，各养分表观消化率显著提高(P<0.05)。添加不同比例发酵饲料对育肥羊瘤胃液氨态氮(NH_3-N)、菌体蛋白(BCP)、乙酸、丁酸、乙酸丙酸比和总挥发性脂肪酸(TVFA)含量以及肉品质无显著影响(P>0.05),但在添加量为6%时，pH值显著降低(P<0.05),丙酸含量显著提高(P<0.05)。[结论]在饲粮中添加6%发酵饲料能提高育肥湖羊养分表观消化率及生产性能，对改善瘤胃发酵特性有积极作用。
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  不同包被缓释尿素的瘤胃缓释效果的评价

  曹力文, 冯春燕, 温世宝, 郑文金, 申军士, 毛胜勇, 朱伟云

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 157-165.

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  [目的]本文旨在通过体外批次发酵、瘤胃灌注和持续动态人工瘤胃模拟系统等不同方法评价包被缓释尿素的瘤胃缓释效果。[方法]体外发酵试验：选取1种普通尿素和4种商业包被缓释尿素，体外培养24 h,采集不同时间点(0、1、3、6、9、12、24 h)发酵液测定氨氮浓度，将筛选出缓释效果最好的缓释尿素用于进一步的研究。瘤胃灌注试验：12只体重(平均27.6 kg)相近的安装有瘤胃瘘管的育肥公湖羊，随机平均分为2组，分别向瘤胃中灌注剂量为日干物质采食量0.5%的普通尿素或日采食量0.55%的缓释尿素(等氮当量),灌注后不同时间点(0、1、3、6、9、12和24 h)采集瘤胃液，测定pH值和氨氮浓度。人工瘤胃试验：在基础日粮中分别添加3.5%的豆粕(普通日粮组)、0.5%的普通尿素(普通尿素组)和0.55%的缓释尿素(缓释尿素组),使用玉米补充普通尿素和缓释尿素组能量的缺乏；试验重复3次，每次持续7 d(4 d适应期和3 d采样期),采样期每天早上投料前后不同时间点采集发酵液和溢流液，测定发酵参数和微生物蛋白浓度。[结果]体外发酵试验：在发酵开始的9、12 h,缓释尿素A组的氨氮浓度显著低于普通尿素组和其余3个缓释尿素处理组(P<0.05)。体内瘤胃灌注试验：在灌注尿素后1 h,缓释尿素组瘤胃pH值和氨氮浓度显著低于普通尿素组(P<0.05),在灌注尿素后6 h,缓释尿素组的pH值显著高于普通尿素组(P<0.05)。人工瘤胃模拟试验：相比于其他2组，日粮添加缓释尿素显著提高了发酵液中丙酸和微生物蛋白的浓度(P<0.05);相比于普通日粮组，日粮添加缓释尿素显著降低了发酵液pH值(P<0.05)。[结论]不同包被缓释尿素的瘤胃缓释效果存在差异，体外发酵筛选出的缓释尿素A在动物瘤胃灌注条件下同样表现出较好的缓释效果。在人工瘤胃发酵试验中添加缓释尿素A能够改善瘤胃发酵，促进微生物蛋白的合成，但对生长性能和瘤胃菌群的影响仍需动物饲养试验做进一步的验证。
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  神经营养因子受体Trkb对湖羊垂体细胞增殖及促性腺激素分泌的影响

  陈培勇, 蔡玉, 杨花, 徐辉, 王锋, 张艳丽

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 166-173.

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  [目的]本研究旨在探究神经营养因子酪氨酸激酶B受体(Trkb)基因对湖羊垂体促性腺激素分泌的影响。[方法]利用qPCR方法对Trkb进行组织表达谱分析；构建Trkb过表达载体并转染至湖羊垂体细胞，利用qPCR、Western blot、EdU以及ELISA等技术检测过表达Trkb对垂体细胞增殖及促性腺激素分泌的影响。[结果]Trkb在湖羊心、肝、脾、肺、肾以及下丘脑和垂体等各个组织中均有表达，但在垂体中表达水平显著高于其他组织(P<0.05)。Trkb在湖羊垂体组织不同发育阶段差异表达，其中在6月龄垂体组织中高表达(P<0.05),在5日龄和3月龄表达水平较低。与对照组相比，过表达Trkb基因显著促进了垂体细胞增殖率(P<0.05),增殖标记基因Pcna表达水平与Bcl2/Bax比值均显著提高(P<0.05)。此外，过表达Trkb显著提高了促性腺激素相关基因Fshβ和Lhβ的表达水平，促进了垂体细胞促卵泡素(FSH)分泌(P<0.05)。[结论]过表达Trkb能够显著促进湖羊垂体细胞增殖，降低细胞凋亡水平从而显著提高促性腺激素的分泌水平。本研究初步验证Trkb基因在湖羊垂体细胞中功能，为深入研究Trkb调控垂体功能的分子机制提供了试验依据。
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  湖羊lncRNA-269的鉴定及转录调控分析

  舒嘉傲, 曹少先, 孟春花, 钱勇, 张俊, 张建丽, 丁强, 李隐侠, 李齐发

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 174-182.

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  [目的]本文旨在研究湖羊长链非编码RNA-269(long no-coding RNA-269,lncRNA-269)序列特征、表达模式和转录调控，为后续开展lncRNA-269的功能研究提供理论基础。[方法]以湖羊为研究对象，采用5′/3′RACE结合PCR扩增方法获得其序列全长，利用RT-qPCR方法鉴定其在湖羊组织中的表达模式，并利用PCR方法扩增其启动子区，鉴定其启动子区特征，分析其转录调控情况。[结果]湖羊lncRNA-269全长3 146 bp,组织表达谱显示其在湖羊各组织中广泛表达，且在健康卵泡中显著高表达，其表达水平与NR5A1 mRNA水平和血清中雌二醇(E_2)水平呈正相关。荧光素酶活性分析发现在lncRNA-269启动子区的-359～-17 nt有1个转录激活基序，在-1 485～-942 nt有1个转录抑制基序。JASPAR软件预测发现在lncRNA-269转录抑制启动子区域存在FOXO3、PDX1等转录因子结合位点，在转录激活区域有SMAD4、YY1等转录因子结合位点。过表达SMAD4可显著提升lncRNA-269启动子区荧光素酶活性，染色质免疫沉淀(ChIP)-PCR试验进一步确认了SMAD4特异性与lncRNA-269启动子区结合。[结论]湖羊lncRNA-269在健康卵泡中显著高表达，其启动子区存在一个转录激活区域和一个转录抑制区域，转录因子SMAD4可通过与lncRNA-269启动子区结合显著上调lncRNA-269的启动子活性。
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  维甲酸对热应激小鼠睾丸损伤的保护作用

  石一凡, 李晓彤, 锁云鹏, 刘俊泽, 李春梅, 李延森

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 183-192.

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  [目的]本试验旨在探讨维甲酸对热应激小鼠睾丸损伤的保护作用。[方法]试验选用40只7周龄雄性ICR小鼠，随机分为4组：对照组(CON)、热应激组(HTRA_0)、5 mg·kg~(-1)·d~(-1)维甲酸处理组(HTRA_5)和10 mg·kg~(-1)·d~(-1)维甲酸处理组(HTRA_(10))。小鼠灌胃相应剂量维甲酸或玉米油后，42℃全身热应激2 h,处理7 d,试验结束后屠宰采样。[结果]与CON组相比，HTRA_0组小鼠睾丸重、最小直径以及生精小管的横截面积、直径和上皮厚度显著降低(P<0.05),附睾精子活力显著下降(P<0.05),丙二醛(MDA)含量显著升高(P<0.05),总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性显著降低(P<0.05),抗氧化相关基因(nrf2、ho-1、nqo1、sod1、gpx1)表达量显著增加(P<0.05),bax基因表达量显著升高(P<0.05),血睾屏障相关基因(occludin、zo-1、n-cadherin和connexin 43)表达显著增加(P<0.05),精子发生相关基因(plzf、c-kit)表达量显著增加(P<0.05)。与HTRA_0比，HTRA_5组小鼠生精小管的横截面积、直径和上皮厚度显著升高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05),T-SOD活性显著升高(P<0.05),plzf和c-kit mRNA表达量显著降低(P<0.05);HTRA_(10)组小鼠生精小管的横截面积、直径和上皮厚度显著升高(P<0.05),精子的活力显著提高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05),T-SOD活性显著提高(P<0.05),nqo1、bax、bcl-2、zo-1、n-cadherin、plzf和c-kit基因表达量显著降低(P<0.05)。[结论]维甲酸能够改善热应激小鼠的睾丸重、睾丸组织形态和附睾精子活力，使之更接近对照组水平；这种保护作用可能是通过增加小鼠睾丸抗氧化能力、减少生精细胞凋亡、增强血睾屏障、改善生精微环境实现的。
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  热应激对羊成肌细胞部分miRNA的影响及其生物信息学分析与靶基因预测

  卢佳伟, 赵鹏, 刘媛, 魏宗友, 李惠侠

  南京农业大学学报. 2024, 47(01): 193-204.

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  [目的]本文旨在探究热应激对羊成肌细胞部分miRNA的影响，并对miR-23a、miR-24、miR-27a-3p和miR-30a-5p进行生物信息学分析与靶基因预测，揭示热应激下miRNA影响骨骼肌发育的调控机制。[方法]通过RT-qPCR技术研究热应激对羊成肌细胞miRNA表达量的影响；利用miRBase数据库获取不同物种中miR-23a、miR-24、miR-27a-3p和miR-30a-5p的前体序列和成熟序列，并利用MEGA X软件构建系统进化树进行相似性分析；通过TargetScan、miRDB、RNA22、miRWalk对上述miRNA进行靶基因预测，使用DAVID对预测出的共同靶基因进行GO功能与KEGG通路富集分析，最后进行miRNA、共同靶基因与KEGG通路的关联分析。[结果]热应激显著下调羊成肌细胞在增殖阶段与分化阶段miRNA的表达。miR-23a、miR-24、miR-27a和miR-30a在不同物种间的保守性较高，除了牛的miR-24以外，成熟序列基本相同，种子序列完全一致。预测出的共同靶基因主要富集在细胞增殖、分化、周期、凋亡、迁移等GO条目，以及mTOR、TGFβ、MAPK、Ras、ErbB、FoxO和PI3K-Akt等KEGG通路。关联分析表明miR-24和miR-27a-3p可能靶向NLK和TAOK1以参与MAPK和FoxO信号通路来调控骨骼肌的发育。[结论]miR-23a、miR-24、miR-27a和miR-30a在不同物种中保守性较高，热应激下调羊成肌细胞部分miRNA的表达，可能影响骨骼肌的发育。