广西医科大学学报

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高智华, 赵劲民

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 687-692. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.001

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目的：比较在不同电纺浓度、不同纺丝电压和不同纺丝距离的条件下聚己内酯（PCL）电纺纳米纤维的力学性能、结构形态及细胞活性。方法：将不同质量的PCL溶解，配制成6%、8%和10%的电纺前溶液，同时将纺丝电压设定为5 kV、15 kV和25 kV，纺丝距离设定为10 cm、15 cm和20 cm，利用静电纺丝技术制备成纳米纤维膜。采用扫描电镜、力学检测和细胞计数试剂盒（CCK-8）法分别检测纳米纤维膜的机械性能、结构形态和细胞活性。结果：随着纺丝溶液浓度的增加，纳米纤维表面串珠消失，分布均匀；当浓度相同时，随着电压升高，纳米纤维膜的力学性能及细胞活性先升高后降低（P<0.05）；在同一浓度下，随着纺丝距离的增加，纳米纤维膜的机械性能及细胞活性先升高后降低（P<0.05）。结论：PCL电纺纳米纤维膜的结构形态、机械性能及生物相容性均受到电纺溶液浓度、纺丝电压和纺丝距离的影响。

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GDF15对氧化应激诱导血管内皮损伤和血管生成的调节作用

翁依佳, 吴思毅, 罗君婷, 卢创宏, 胡邀时, 梁远盈, 白灵, 曾志羽

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 693-698. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.002

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目的：探讨生长转化因子15（GDF15）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的内皮细胞损伤和血管生成的影响。方法：用 H₂O₂诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化损伤模型，分为对照组、H₂O₂组、小分子干扰 RNA（siRNA）靶向沉默 GDF15（si-GDF15）组和si-GDF15+H₂O₂组。采用CCK-8检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞活性氧（ROS）的浓度和凋亡率，划痕实验检测细胞迁移能力，小管形成实验检测内皮细胞成管能力。结果：与对照组比较，H₂O₂组细胞ROS浓度和凋亡率显著增高，细胞增殖、迁移和小管生成能力显著降低（均P<0.05）；与H₂O₂组比较，si-GDF15+H₂O₂组细胞ROS和凋亡率显著增高，细胞增殖、迁移和小管生成能力显著降低（均P<0.05）。结论：沉默GDF15能增强H₂O₂诱导的内皮损伤，并抑制HUVECs的血管形成能力。

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鼻咽癌细胞条件培养基诱导THP-1源巨噬细胞向M2型极化

姚小暄, 杨雨嘉, 霍慧敏, 江川, 崔昆, 黄中恒, 唐锦平, 韦正波, 谢莹

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 699-704. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.003

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目的：探讨鼻咽癌细胞系（5-8F、HONE1）来源的条件培养基（CM）对THP-1来源巨噬细胞极化方向的影响。方法：分别用50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L佛波酯（PMA）刺激人单核细胞白血病THP-1细胞诱导分化为M0型巨噬细胞（THP-1-M0组），24 h后，加入10 pg/mL脂多糖（LPS）和20 ng/mL干扰素（IFN）-γ处理细胞72 h，使M0向类M1型细胞方向极化（THP-1-M1组）；加入20 ng/mL IL-4和20 ng/mL IL-13处理THP-1-M0使其向类M2型方向极化（THP-1-M2组）。流式细胞术检测巨噬细胞标记物CD14、CD68、CD86、CD163和CD206的表达。制备鼻咽癌5-8F及HONE-1细胞的条件培养基，培养THP-1-M0细胞。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）法检测白细胞介素（IL）-6、IL-10、肿瘤坏死因子（TNF）-α、转化生长因子（TGF）-β1基因表达，分析肿瘤细胞刺激M0巨噬细胞的极化方向。结果：100 nmol/L为PMA的最佳刺激浓度。THP-1-M1组CD68、CD86、CD163表达及IL-6、TNF-α、IL-10、TGF-β1基因表达上调，THP-1-M2组CD14表达下调，CD68、CD86、CD163、CD206表达及IL-10、TGF-β1基因表达上调（均P<0.05）。加入鼻咽癌细胞条件培养基后，TNF-α、TGF-β1表达降低，IL-10表达升高（均P<0.05）。结论：5-8F细胞条件培养基诱导THP-1源M0型巨噬细胞偏向M2表型极化，HONE1细胞条件培养基培养的M0型巨噬细胞极化为M1/M2混合表型。

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不同来源干细胞条件培养基对人脐静脉内皮细胞作用的比较

农娇梅, 黄春阳, 麦若曈, 余锦梅, 谭佳慧, 吴煜

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 705-712. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.004

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目的：研究比较人脐带间充质干细胞（h UCMSCs）和人牙髓干细胞（hDPSCs）来源条件培养基（CM）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）血管生成功能的影响。方法：实验分为NC组、ECM培养基组、hUCMSCs-CM组和hDPSCs-CM组。通过细胞计数试剂盒（CCK-8）法、细胞迁移实验（Transwell）、划痕、成管实验检测HUVECs在不同条件培养基中增殖、迁移、成管的功能，实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测血管生成相关基因的表达，ELISA检测hUCMSCs-CM和hDPSCs-CM中VEGF、HGF、HIF-1α水平。结果：hUCMSCs-CM组和hDPSCs-CM组均能促进HUVECs的增殖、迁移和成管（P<0.05），但两种条件培养基之间未见明显差异（P>0.05）;RT-qPCR结果显示，VEGF、KDR、HGF、Ang-2、HIF-1α在hUCMSCs-CM组和hDPSCs-CM组的表达量高于ECM培养基组和NC组（P<0.05）;ELISA结果显示，hUCMSCs-CM组和hDPSCs-CM组的VEGF、HGF和HIF-1α蛋白浓度高于NC组，hUCMSCs-CM组中HGF和HIF-1α水平高于hDPSCs-CM组（P<0.05）。结论：hUCMSCsCM和hDPSCs-CM均能促进HUVECs增殖、迁移和成管，hUCMSCs和hDPSCs均通过分泌多种血管形成相关因子促进HUVECs的血管形成，hUCMSCs表现出更强的分泌能力。

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BUB1B在肺鳞状细胞癌中的表达及其意义

丁彤彤, 王君萍, 李祖云

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 713-720. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.005

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目的：探究纺锤体装配检查点蛋白家族成员BUB1B在肺鳞状细胞癌（LUSC）中的表达及其意义。方法：收集基因表达综合数据库（GEO）、癌症基因组图谱（TCGA）数据库中BUB1B在LUSC中的表达值，通过计算标准化均数差（SMD）及绘制综合受试者工作特征曲线（sROC），综合分析BUB1B mRNA在公共数据集中的表达情况，用实时荧光定量聚合酶链式反应（RTqPCR）验证BUB1B在LUSC细胞系（NCI-H2170）与人正常肺上皮细胞系（BEAS-2B）中BUB1B mRNA的表达，免疫组化技术（IHC）验证61例LUSC组织和对应54例癌旁/正常肺组织中BUB1B蛋白的表达情况，搜索癌症中的增强子RNA(e Ric)数据库在LUSC中与BUB1B表达相关增强子RNA(eRNA),RT-qPCR验证e RNA在NCI-H2170和BEAS-2B中m RNA的表达。结果：BUB1B mRNA在公共数据集中均呈现出在LUSC组织中的高表达趋势（P<0.05）。BUB1B在LUSC细胞系中的表达高于人正常肺上皮细胞系（P<0.05）。BUB1B蛋白在LUSC组织中高表达（P<0.05），且在原发肿瘤大小、临床分期中的差异表达具有统计学意义（P<0.05），在性别、年龄、淋巴结转移、远处转移、分化程度、吸烟史中的差异表达无统计学意义（P>0.05）。ENSR00000075512在LUSC组织中与BUB1B表达相关，且ENSR00000075512 RNA在LUSC细胞系中的表达高于人正常肺上皮细胞系（P<0.05）。结论：BUB1B在LUSC中高表达，可能通过与ENSR00000075512相互作用参与LUSC的发生发展。

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高灵敏液相色谱——质谱联用方法用于HIV-1感染细胞中胞苷修饰全分析

郑瑞丽, 周欧路, 褚洁梅, 安三奇, 蒋俊俊, 叶力, 梁浩

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 721-727. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.006

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目的：建立同时检测DNA上4种胞苷修饰的高灵敏液相色谱—质谱联用（LC-MS）分析方法，并用于HIV-1病毒感染对细胞中胞苷修饰的全分析。方法：选择2-溴-1-4-二乙氨基苯基乙酮（BDEPE）作为标记试剂同时标记4种DNA胞苷修饰（5-mdC、5-hmdC、5-fdC和5-cadC），再结合LC-MS方法对HIV-1病毒感染前、后细胞中的目标修饰物进行准确定性和定量分析。比较HIV-1病毒感染细胞前、后胞苷各修饰含量的变化。结果：建立了化学标记结合LC-MS分析方法，标记反应转化率达90%以上，标记产物在反应后48 h内稳定。标记结合LC-MS分析提高胞苷修饰的检测灵敏度，5-mdC、5-fdC和5-cadC在HIV-1感染后显著升高（P<0.05）。结论：本研究建立了高灵敏度的胞苷修饰检测方法，并应用于HIV-1感染细胞DNA中的4种胞苷修饰的全分析，首次发现HIV-1病毒感染后5-mdC、5-fdC和5-cadC显著升高。

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荔仁总皂苷抗鸭乙型肝炎病毒感染的实验性研究

苏惠萍, 韦朋海, 覃彬, 黄斯梅, 蒙明虑, 熊国林, 谢志春

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 728-733. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.007

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目的：探讨荔仁总皂苷体内抗鸭乙型肝炎病毒（DHBV）感染及其护肝作用。方法：在建立鸭乙肝动物模型后，选取DHBV感染阳性幼鸭60只，按随机数字表法分为5组：模型对照组（喂蒸馏水）、阿昔洛韦阳性对照组（ACV组）和荔仁总皂苷高、中、低剂量组（每组12只），每日灌胃给药1次，连续给药14 d，同时分别在给药前、给药后7 d、14 d及停药后5 d，抽取鸭子血液，检测每组鸭子血清样本中的鸭HBV DNA(DHBV-DNA)拷贝量、鸭乙肝表面抗原（DHBsAg）和鸭乙肝病毒e抗原（DHBeAg）的OD值及天冬氨酸氨基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性的变化。实验结束时取肝脏组织苏木精-伊红（HE）染色后观察其病理学改变。结果：荔仁总皂苷高、中、低剂量组均可有效抑制DHBV-DNA的复制并呈量效关系（P<0.01）；同时荔仁总皂苷高剂量组能够抑制停药后的病毒反跳，其抑制效果优于ACV组。另外，荔仁总皂苷高剂量组还能降低AST活性（P<0.05）。肝脏病理检查显示，与模型对照组比较，荔仁总皂苷高、中剂量组能减轻鸭子感染病毒后肝脏内的炎性病变，有效改善肝组织病理损害。结论：荔仁总皂苷具有一定的抗鸭乙肝病毒、降酶以及改善肝脏病理的作用。

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基于生物信息学筛选并验证上皮性卵巢癌差异microRNA及下游mRNA

韦怡, 甘翔, 陈江静, 刘美琳, 韦丽婷, 黄玲玲

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 734-740. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.008

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目的：利用生物信息学对上皮性卵巢癌（EOC）的差异microRNA及其靶基因进行筛选及分析，探索EOC诊断及预后相关的潜在生物标志物。方法：本研究首先从GEO数据库（gene expression omnibus database）筛选符合条件的数据集，用limma包筛选差异microRNAs，用在线miRNet、TargetScanHuman、miRDB预测其下游靶基因，并利用WEB-based GEne SeT AnaLysis Toolkit数据库对靶基因进行GO和KEGG富集分析。最后用GEPIA2数据库对关键基因的表达与患者进展之间的关系进行分析。结果：经过筛选后，从GEO数据库获得8个microRNAs，与对照组相比，hsa-miR-4328、hsa-miR-450b-5p在EOC中表达上调，hsa-miR-3616-3p、hsa-miR-4283、hsa-miR-1208、hsa-miR-3180-3p、hsa-miR-617和hsa-miR-1207-3p在EOC中表达下调。通过3个在线网站获取差异microRNAs对应的下游靶基因，主要涉及biological regulation,membrane-enclosed lumen,protein binding等过程，主要富集于phosphatidylinositol signaling system,neurotrophin signaling pathway等信号通路。利用GEPIA2发现高表达MLLT6[HR(high)=1.3]、TIAM2[HR(high)=1.3]的EOC患者较低表达患者的生存率低（P<0.05）。还发现MLLT6、MSI1、PKMYT1、PLAGL2、ZNF514、FBXW7、GLCCI1、MFSD6、OCRL、PIP4K2B、SLC6A9与EOC疾病分期相关。通过RT-qPCR检测，发现与正常卵巢组织相比，MLLT6在EOC组织表达下调（Z=-2.602,P<0.05），其上游的hsa-miR-450b-5p在EOC组织中的表达上调（Z=-3.071,P<0.05）。结论：MLLT6可能与EOC的发生发展密切相关，且可作为提示EOC预后的指标之一；hsa-miR-450b-5p/MLLT6可能为提示EOC的生物指标。

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基于NLRP3研究β-胡萝卜素对大鼠心肌纤维化的作用机制

范奕好, 葛晨亮, 程阳, 何燕

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 741-746. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.009

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目的：探索β-胡萝卜素能否通过沉默核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)影响大鼠心肌纤维化（MF）的相关机制。方法：雄性SD大鼠18只，随机分成对照组、模型组及β-胡萝卜素组，对照组皮下注射生理盐水（5 mg/kg）及灌胃1 mL二甲基亚砜（DMSO）；模型组仅皮下注射异丙肾上腺素（ISO）(5 mg/kg)及灌胃1 mL DMSO,β-胡萝卜素组皮下注射ISO(5 mg/kg)及灌胃β-胡萝卜素（30 mg/kg,1 mL DMSO溶解），连续注射及灌胃10 d。称取大鼠体重及心脏重量，对SD大鼠的心脏组织进行Masson染色，行免疫组化检测Ⅰ型胶原蛋白（CollagenⅠ）、Ⅲ型胶原蛋白（CollagenⅢ）、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)的蛋白表达量，采用免疫印迹实验（Western blotting）检测NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1前体（procaspase-1）、半胱氨酸蛋白酶-p20(caspase-1-p20)的蛋白表达量。结果：与对照组比较，模型组MF更严重，心肌损伤加重，心肌间质Collagen I、CollagenⅢ、IL-1β、IL-18表达增加，NLRP3和caspase-1 p20表达升高（P<0.05）；与模型组比较，β-胡萝卜素组MF程度缓解,心肌损伤较少，NLRP3和caspase-1-p20的表达量降低，心肌间质CollagenⅠ、CollagenⅢ、IL-18、IL-1β表达量降低（P<0.05）。结论：β-胡萝卜素能够降低ISO引起的MF程度，其作用机制可能与降低了NLRP3的表达有关。

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组蛋白去乙酰化酶9在香烟烟雾暴露所致肺气肿小鼠中的作用

谢婷, 郑桂贤, 霍增榆, 韦鑫燕, 黄颜冰, 陈小丽, 白晶

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 747-751. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.010

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目的：观察组蛋白去乙酰化酶9（HDAC9）在香烟烟雾暴露所致肺气肿小鼠中的作用。方法：HDAC9^-/-C57BL/6 与野生型小鼠各20只，随机等分为4组，即：HDAC9^-/-对照组、HDAC9^-/-烟熏组与野生型对照组、野生型烟熏组；烟熏组小鼠香烟烟熏24 周建立肺气肿模型，HE 染色观察小鼠肺组织病理学改变；免疫磁珠分选 CD4⁺CD25⁺Treg 细胞，实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）法检测Treg细胞中HDAC9 m RNA相对表达量；免疫组化法检测小鼠肺组织内叉头状转录因子p3（Foxp3）蛋白表达量，RT-qPCR法检测肺组织白介素-1β（IL-1β）mRNA表达水平。结果：野生型对照组与HDAC9^-/-对照组肺泡结构正常，无炎症细胞浸润；野生型烟熏组气道壁和肺泡间隔可见炎细胞增多，肺泡壁断裂明显，肺泡腔扩大；HDAC9^-/-烟熏组肺泡间隔部分断裂，但较野生型烟熏组减轻，未见明显炎细胞浸润。与野生型对照组比较，野生型烟熏组Treg细胞中HDAC9 mRNA表达增多（P <0.01）。与野生型对照组比较，野生型烟熏组肺组织中Foxp3表达减少，HDAC9^-/-对照组Foxp3表达增多（P<0.01）；与 HDAC9^-/-对照组比较，HDAC9^-/-烟熏组 Foxp3 表达减少（P<0.01）；与野生型烟熏组比较，HDAC9^-/-烟熏组 Foxp3 表达增多（P<0.01）。与野生型对照组比较，野生型烟熏组肺组织中 IL-1β mRNA 的表达量增高（P<0.01）；与野生型烟熏组比较，HDAC9^-/-烟熏组肺组织中IL-1β m RNA的表达量降低（P<0.01）。结论：香烟烟雾暴露下，HDAC9基因缺失小鼠肺内Foxp3表达增多、IL-1β炎症介质表达减少，提示HDAC9^-/-小鼠体内Treg细胞功能增强，可能与肺气肿病情减轻有关。

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基于转录组测序分析并验证胫骨横向骨搬移术治疗糖尿病足患者外周血的miRNA

苏宏杰, 花奇凯

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 752-757. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.011

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目的：对经胫骨横向骨搬移术治疗糖尿病足患者的外周血进行转录组测序，利用生物信息学分析并验证差异显著的miRNA，探究治疗促进创面愈合可能的机制。方法：通过转录组测序，获取了miRNA的表达数据，随后进行差异表达、靶基因预测和功能富集分析，最后进行临床样本的实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）验证。结果：经过差异表达分析，发现差异表达显著的hsa-miR-103a-3p上调。预测得其109个靶基因主要与发芽血管的调控，大分子代谢过程负调控和细胞蛋白修饰过程等生物学过程相关，以及AMPK信号通路相关。而靶基因中经MNC算法获得前10的核心基因为AGO1、CDK6、TNRC6B、DICER1、CAPZA2、KIF23、KIF5A、MTMR3、MTMR4、PIK3R1；验证临床样本结果得出，TTT组的hsa-miR-103a-3p相对表达量比对照治疗组相比升高3.7倍（P<0.001）。结论：hsa-miR-103a-3p在胫骨横向骨搬移术治疗糖尿病足患者过程中表达上升，可能是手术治疗促进伤口愈合和血管生成的效应miRNA之一。

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miRNA-29c对大鼠心肌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

沈楼怡, 桂春

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 758-763. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.012

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目的：探讨miRNA-29c对大鼠心肌细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法：将大鼠H9C2心肌细胞分为空白对照（control）组、miRNA-29c模拟物转染（LV-miR-29c-mimic）组、阴性转染(LV-NC）组。实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测各组miRNA-29c、VEGF的m RNA表达情况，免疫荧光染色法检测各组细胞VEGF、Bax、Bcl-2、caspase3荧光表达，细胞计数试剂盒（CCK-8）检测各组细胞增殖情况，蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测各组VEGF、Bax、Bcl-2、caspase3的蛋白表达情况，流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果：与control组和LV-NC组相比，LV-miR-29c-mimic组H9C2大鼠心肌细胞miRNA-29c表达水平升高，细胞增殖速率、VEGF m RNA及其蛋白、Bcl-2的蛋白表达降低，细胞凋亡率、Bax、caspase3的蛋白表达则增高（均P<0.05）。结论：miRNA-29c可能通过调控细胞内的VEGF表达，影响大鼠心肌细胞的增殖和凋亡。

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CD38和p90RSK/CREB/Bcl-2信号通路在丙泊酚预处理星形胶质细胞减轻谷氨酸神经毒性中的作用

肖飞, 李春来, 覃银莹, 陈静, 关睿聪, 谢玉波, 钟妤

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 764-768. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.013

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目的：探讨CD38和p90RSK/CREB/Bcl-2信号通路在丙泊酚预处理星形胶质细胞减轻谷氨酸神经毒性中的作用。方法：将PC12细胞随机分为4组：对照组（C组）PC12细胞不做任何处理；谷氨酸组（G组）用3.5 mmol/L谷氨酸孵育PC12细胞6 h；丙泊酚预处理组（PG组）先用100μmol/L丙泊酚预处理星型胶质细胞6 h，收集培养液，并将其加入到3.5 mmol/L谷氨酸处理的PC12细胞中孵育6 h;CD38基因沉默组（CPG组）先将CD38 siRNA转染入星形胶质细胞，再用100μmol/L丙泊酚预处理星型胶质细胞6 h，收集培养液，并将其加入到3.5 mmol/L谷氨酸处理的PC12细胞中孵育6 h。应用ROS和ATP检测试剂盒测定各组PC12细胞ROS和ATP的含量变化，采用蛋白质免疫印迹实验（Western blotting）检测PC12细胞p90RSK、pCREB、Bcl-2蛋白的表达，流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡情况。结果：与C组比较，G组ROS含量升高，ATP含量降低，p90RSK、pCREB和Bcl-2蛋白表达下调，PC12细胞凋亡增多（均P<0.05）；与G组比较，PG组ROS含量降低，ATP含量升高，p90RSK、pCREB和Bcl-2蛋白表达上调，PC12细胞凋亡减少（均P<0.05）；与PG组比较，CPG组ROS含量升高，ATP含量降低，p90RSK、pCREB和Bcl-2蛋白表达下调且凋亡增加（均P<0.05）。结论：丙泊酚预处理星形胶质细胞可以减轻谷氨酸的神经毒性，其机制可能与激活星形胶质细胞膜上的CD38蛋白，从而上调PC12细胞的p90RSK/CREB/Bcl-2信号通路有关。

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生物信息学筛选骨肉瘤关键基因ITGA3及差异表达验证

徐伟华, 朱必康, 瞿洋洋, 谭曼利, 罗世兴

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 769-774. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.014

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目的：生物信息学分析筛选出骨肉瘤关键基因，探讨骨肉瘤潜在分子标记物。方法：从GEO数据库中下载GSE14359、GSE16088、GSE16091 3个数据库集，利用R语言“SVA”软件包进行合并；差异分析利用R语言“limma”软件包进行分析，并对差异基因运用R语言“clusterProfiler”进行GO和KEGG富集分析。随后，对最显著富集的KEGG通路基因进行筛选出最关键的Top5基因并进行生存分析，筛选对预后具有影响意义的关键基因，然后运用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）验证最关键基因的差异性表达。结果：通过数据合并共得到12 547个基因的数据集，分析出723个表达基因有差异；差异基因的KEGG富集最显著通路是PI3K-Akt信号通路，并且该通路的排名前5的关键基因为ITGA3、ITGA4、ITGAV、COL1A1、COL1A2。排名前5的关键基因中，与ITGA3低表达组比较，ITGA3高表达组生存预后较好（P<0.05），在143B、MNNG、U2OS3个骨肉瘤细胞系中ITGA3相对表达量低于正常成骨细胞系hFOB1.19(P<0.01)。结论：ITGA3在骨肉瘤中呈现出低表达，这可能成为预测骨肉瘤患者预后的潜在生物标记物。

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长寿人群HBB基因多态性对HBB mRNA血清表达水平的影响及其与代谢指标的关系

宋重阳, 崔晨曦, 王癸丁, 彭均华, 潘尚领

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 775-780. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.015

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目的：探讨广西红水河流域长寿人群中HBB基因多态性对血清HBB mRNA表达水平的影响及其与代谢指标的关系。方法：采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）法对广西红水河流域长寿组168例及对照组196例进行血清HBB mRNA表达水平的检测，并使用PCR-Sanger测序法对HBB基因全长进行多态性检测，分析各多态性对HBB mRNA水平的影响及其与代谢指标的关系。结果：长寿组的血清HBB m RNA表达水平低于对照组（P<0.05）;HBB基因检测出6个多态，其中长寿组rs7480526 A/A基因型的频率高于对照组（P<0.05）；长寿组rs33986703基因型T/T及等位基因T的频率低于对照组（均P<0.05）；长寿组rs7480526 A/A及rs33986703 T/T基因型的mRNA表达水平低于对照组（P<0.05,P<0.01）；在总体人群中，rs7480526 A/A基因型携带者的TG水平低于A/C携带者（P<0.05）,rs33986703 T/T携带者的ApoA1水平高于T/A携带者（P<0.05），这两个位点其他基因型携带者的代谢指标在长寿组及对照组之间无显著差异（P>0.05）。结论：HBB rs7480526及rs33986703基因多态可能通过表观遗传学影响HBB mRNA的表达，并参与对代谢指标的调控，进而影响衰老相关性疾病的发生发展及个体寿限。

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27nt-miRNA对过氧化氢诱导血管平滑肌细胞凋亡的影响及分子机制

周福隆, 周炜潜, 杨鹏, 罗雪兰, 欧和生

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 781-786. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.016

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目的：探讨 27nt-miRNA 对经过氧化氢（H₂O₂）处理的血管平滑肌细胞（VSMCs）凋亡、活力和迁移的影响及作用机制。方法：将大鼠主动脉VSMCs分为5组：空白对照组、H₂O₂组、anti-27nt-miRNA+H₂O₂组、阴性对照+H₂O₂组和27nt-miRNA+H₂O₂组。空白对照组：不做任何处理；H₂O₂组：用500 μmol/L H₂O₂处理6 h诱导细胞凋亡；anti-27nt-miRNA+H₂O₂组：转染27nt-miR-NA 反义序列慢病毒载体后，用 500 μmol/L H₂O₂处理6 h诱导细胞凋亡；阴性对照+H₂O₂组：转染随机阴性序列慢病毒载体后，用500 μmol/L H₂O₂处理6 h诱导细胞凋亡；27nt-miRNA+H₂O₂组：转染27nt-miRNA高表达慢病毒载体后，再用500 μmol/L H₂O₂处理6 h诱导凋亡。使用细胞计数试剂盒（CCK-8）法和流式细胞术检测VSMCs存活率、凋亡率，划痕实验检测细胞迁移率，蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测 Bcl-2、Bax 蛋白表达水平。结果：与空白对照组比较，H₂O₂组细胞活力和迁移率降低（P<0.05）、细胞凋亡率上升（P<0.05），提示成功构建VSMCs凋亡模型。对比阴性对照+H₂O₂组，27nt-miRNA+H₂O₂组可抑制细胞的活力和迁移能力（P<0.05），且细胞凋亡率上升（P<0.05），凋亡相关蛋白 Bax 表达水平上升，Bcl-2 表达水平下降（P<0.05），而 anti-27nt-miRNA+ H₂O₂组细胞凋亡率降低、细胞活力和迁移率增加，Bax蛋白表达水平降低，Bcl-2蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：过表达27nt-miRNA可促进H₂O₂所诱导的VSMCs凋亡和抑制其活力和迁移能力，其机制可能与凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达改变密切相关。

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金雀异黄酮对脂多糖诱导的软骨细胞氧化应激和炎症因子的影响

王勇麟, 王哲纬, 杨渊

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 787-791. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.017

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目的：探讨金雀异黄酮对脂多糖（LPS）诱导的软骨细胞氧化应激和炎症因子的影响。方法：体外培养SD大鼠乳鼠的膝关节软骨细胞，分为空白对照组、模型组和实验组。空白对照组不作处理，模型组用LPS诱导软骨细胞炎症模型，实验组用LPS处理后加入金雀异黄酮进行干预。番红O染色检测各组细胞内蛋白多糖含量。CCK-8法检测金雀异黄酮的细胞毒性，Calcein-AM/EthD-I染色检测细胞活力，DCFH-DA荧光探针检测软骨细胞内活性氧（ROS）水平，免疫荧光染色检测软骨细胞内基质金属蛋白酶（MMP）-13的分泌情况，RT-qPCR法检测白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α、MMP-13、软骨特异性基因Col2al的表达。结果：10μg/mL金雀异黄酮对软骨细胞无明显毒性作用。与模型组比较，实验组蛋白多糖分泌增多，MMP-13和ROS分泌减少，软骨细胞活力升高，炎症相关基因IL-6、MMP-13和TNF-α表达下调，软骨特异性基因Col2al表达上调（均P<0.05）。结论：金雀异黄酮对LPS诱导的软骨细胞炎症模型具有抗炎、抗氧化应激的作用。

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诊断超声与超声治疗仪联合载阿霉素超声纳米泡作用于鼻咽癌细胞的体外实验研究

陆柳桂, 黄钊希, 韦丽艳, 高泳

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 792-797. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.018

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目的：制备载阿霉素超声纳米泡（Dox-NBs），评价其基本特性并对比Dox-NBs联合诊断超声（DUS）与超声治疗仪（TUS）作用于鼻咽癌细胞的体外实验研究。方法：通过薄膜水化法、机械振荡法制备Dox-NBs并检测其基本物理特性、载药量及包封率；体外药物释放实验分为Dox-NBs组、Dox-NBs+DUS组、Dox-NBs+TUS组3组，利用多功能酶标仪检测Dox累积释放量；培养鼻咽癌5-8F细胞，按照不同的处理方法分为4组：对照组、Dox-NBs组、Dox-NBs+DUS组、Dox-NBs+TUS组，各组处理3 h后完全培养基培养3 d，细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测各组细胞活性。结果：Dox-NBs的平均粒径为（286.93±14.45）nm,Zeta电位（-13.3±2.17）m V，平均载药量（37.0±3.34）μg/mg，包封率（36.30±1.92）%；体外药物释放结果显示，Dox-NBs+DUS组与Dox-NBs+TUS组分别在2 h与24 h Dox的累积释放量比较，差异均有统计学意义（P<0.05）;CCK-8检测细胞活性显示，Dox-NBs组的细胞存活率高于Dox-NBs+DUS组与Dox-NBs+TUS组（P<0.01）,Dox-NBs+DUS组的细胞存活率最低，DoxNBs+DUS组对鼻咽癌细胞活性抑制作用最大。结论：Dox-NBs联合辐照可以提高药物释放量及协同抑制鼻咽癌细胞活性，DUS联合Dox-NBs作用效果优于TUS联合Dox-NBs,DUS可作为更普及、简便工具介导载药纳米泡的药物释放。

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HKαα及其复合-α4.2缺失型α地中海贫血的临床分析

马晨骁, 肖璇, 李树全, 陈萍, 张学

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 798-802. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.019

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目的：探讨香港型地中海贫血（HKαα）及其复合-α4.2缺失型α地中海贫血(HKαα/-α^4.2)的临床表型和血液学特征，为临床诊疗和遗传咨询提供参考。方法：收集2021年5月至2022年3月在广西医科大学第一附属医院进行地中海贫血检测的病例，采用血细胞分析仪进行血液学分析，高效液相色谱法（HPLC）进行血红蛋白分析；采用跨越断裂点聚合酶链反应（GαpPCR）和荧光PCR熔解曲线法（FCMA）进行α和β地中海贫血基因分析。结果：共检出165例患者，其中-α3.7或-α4.2缺失型α地中海贫血杂合子90例，--^SEA/-α^3.7或--^SEA/-α^4.2缺失型血红蛋白H（Hb H）病75例。在165例中检出1例罕见的HKαα/-α^4.2及5例HKαα。基因型为HKαα/-α^4.2的患者血常规检测结果：红细胞计数（RBC）5.59×10¹²/L，血红蛋白（Hb）166 g/L，红细胞平均容积（MCV）88.60 fL，红细胞平均血红蛋白量（MCH）29.70 pg，红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）335.00 g/L;5例HKαα的患者血常规结果：RBC（4.77±0.26）×10¹²/L,Hb（135.68±4.37）g/L,MCV（86.25±4.05）f L,MCH（28.47±1.12）pg,MCHC（330.48±3.75）g/L。6例患者中，Hb分析结果均未见异常，均无贫血表现，无黄疸及肝脾肿大。基因分析结果：6例患者ααα^anti4.2基因检测结果均为阳性，1例基因型为HKαα/-α^4.2,5例基因型为HKαα。结论：首次发现HKαα/-α^4.2患者无贫血症状，且血液学检测正常，提示此类病例在临床上较容易漏诊和误诊。

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γ珠蛋白基因^Aγ-225～-222缺失突变复合重型β-地中海贫血的临床特征分析

李蔺芝, 林伟雄, 肖璇, 李树全, 陈萍

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 803-808. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.020

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目的：分析γ珠蛋白基因^Aγ-225～-222AGCA缺失突变复合重型β 地中海贫血的临床特征。方法：收集2020年7月至2022 年 1 月在广西医科大学第一附属医院门诊诊断为地中海贫血患者 300 例，采用血细胞分析仪进行血常规检测，高效液相色谱法（HPLC）测定胎儿血红蛋白（Hb F）和血红蛋白A₂（Hb A₂）;DNA测序方法分析γ珠蛋白基因突变；采用荧光PCR熔解曲线法和Gap-PCR法检测地中海贫血基因突变。结果：在300例Hb F升高的病例中，共检出16例^Aγ-225～-222缺失突变复合重型 β 地中海贫血，其中 7 例轻度贫血，Hb 为 90～111.9 g/L、MCV 65.9～80.31 fL、MCH 20.22～28.06 pg；中度贫血 7 例，Hb60.7～87 g/L、MCV 62.9～86.24 fL、MCH 19.4～27.21 pg；重度贫血 2 例，其中 1 例 Hb 47.3 g/L、MCV 77.31 f L、MCH 24.8 pg，另1 例 Hb 55.5 g/L 、MCV 75.26 f L、MCH 24.49 pg。Hb 分析 16 例的 Hb F 为 8.6%～85.6%,Hb A₂为2.6%～9.3%。基因型分析显示，16例^Aγ-225～-222 AGCA缺失突变。16例β地中海贫血基因突变类型为β^CD41-42/β^-287 例、β^CD17/β^-283 例、β^-28/β^-282 例、β^IVS-I-1/β^-281 例、β^CD71-72/β^-281 例、β^CD41-42/β^CD171 例和 β^IVS-II-654/β^-281 例。结论：^Aγ-225～-222AGCA缺失突变复合重型β 地中海贫血的病例大部分表现为轻度至中度贫血，该缺失突变可使重型β 地中海贫血患者的贫血程度得到改善。

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不明原因新生儿高胆红素血症与UGT1A1基因突变的关系

谈钰培, 钟丹妮, 赵科, 谢湘芝

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 809-814. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.021

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目的：探讨不明原因新生儿高胆红素血症与胆红素—尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)基因编码的启动子区TATA盒及第1外显子区基因突变类型的关系。方法：对100例不明原因高胆红素血症新生儿（病例组）和100例健康新生儿（对照组）进行全基因组DNA提纯，对UGT1A1基因启动子区及第1外显子区进行PCR扩增、凝胶电泳、基因测序。分析比较两组的UGT1A1基因突变类型及等位基因频率。结果：两组间在启动子区存在TATA盒（TA）7插入突变，在编码区第1外显子区存在G71R错义突变和P229Q错义突变。两组间G71R错义突变等位基因频率分别为18.5%、5.0%，病例组的G71R基因型分布及等位基因频率均高于对照组（P<0.001）。两组TATA盒（TA）7插入突变和P229Q错义突变基因型分布及等位基因频率比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。Logistic回归分析显示UGT1A1 TATA盒（OR:1.362,95%CI:0.573～3.237）、G71R(OR:4.540,95%CI:2.070～9.958)、P229Q(OR:0.614,95%CI:0.119～3.161), UGT1A1 G71R错义突变是不明原因新生儿高胆红素血症的危险因素（P<0.001）。结论：本研究共检测出3种UGT1A1基因突变类型：（TA）7插入突变、G71R错义突变和P229Q错义突变；其中UGT1A1 G71R错义突变是不明原因新生儿高胆红素血症的危险因素。

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组织因子微粒、内皮细胞微粒及血小板微粒在急性髓细胞白血病中检测意义

戴益, 许玉玲, 刘莹, 孙娜, 董海群, 刘振芳, 赵卫华, 程鹏

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 815-819. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.022

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目的：探究组织因子微粒（TF+MPs）、内皮细胞微粒（EMPs）、血小板微粒（PMPs）在急性髓细胞白血病（AML）出凝血中的检测意义。方法：将62例初治AML患者分为急性早幼粒细胞白血病（APL）组（16例）和非APL组（46例），另外选取28例健康体检者作为对照（正常组）。采用流式细胞术（FCM）检测TF+MPs、EMPs、PMPs水平。免疫浊比法检测D-二聚体（DD）和纤维蛋白降解产物（FDP）水平。结果：APL组患者TF+MPs、EMPs、PMPs、DD、FDP水平高于非APL组和正常组（均P<0.05）。DD与TF+MPs(r=0.728,P<0.01)、EMPs(r=0.790,P<0.01)、PMPs(r=0.615,P<0.01)均呈正相关关系。结论：初治AML尤其是APL患者血浆中TF+MPs、EMPs、PMPs 3种微粒表达升高，微粒水平的升高可能是引起AML凝血紊乱的原因之一。

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宏基因组二代测序在肺部感染患者病原体检测中的应用价值

陈婷婷, 江文洁, 华晓兰, 谢正福

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 820-825. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.023

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目的：探讨宏基因组二代测序（m NGS）在肺部感染患者病原体检测中的应用价值。方法：回顾性分析2020年11月1日至2021年8月31日广西医科大学第一附属医院老年呼吸内科收治的肺部感染患者58例，均行传统病原学检测、血清学检测及支气管肺泡灌洗液mNGS。统计患者的病原体分布情况，比较3种检测方法在肺部感染和合并肺部基础疾病中的病原体检出率。结果：58例肺部感染患者中，共检出34种微生物，最常见的是分枝杆菌，其次为曲霉菌。mNGS检出肺部感染阳性率为72.41%，高于传统方法（24.14%）和血清学检测（25.86%）（均P<0.05）;mNGS细菌检出率高于传统方法和血清学检测，真菌检出率低于传统方法和血清学检测，非典型病原体检出率低于血清学检测（均P<0.05）,3种检测方法的病毒检出率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。在合并支气管扩张的患者中，mNGS病原体检出率高于血清学检测（P<0.05）。结论：m NGS相比传统方法和血清学检测，其细菌检出率及对合并支气管扩张的肺部感染患者病原体检出率更高。

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腓骨横向骨搬移术治疗重度糖尿病足的疗效观察

张博凯, 陈炎, 林震迅, 高伟, 何立环, 邝晓聪, 花奇凯

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 826-832. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.024

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目的：探讨腓骨横向骨搬移术治疗重度糖尿病足的疗效和安全性，并与胫骨横向骨搬移术治疗重度糖尿病足对比。方法：回顾性分析2016年8月至2021年10月接受治疗的重度糖尿病足患者30例，将患者按随机数字表法分为腓骨横向骨搬移组、胫骨横向骨搬移组和传统治疗组3组，每组10例，术后观察患者足部溃疡愈合情况，评估住院时间、疼痛评分症状等，并计算愈合率、保肢率、复发率等情况。结果：所有患者均获得随访，随访时间5～48个月，平均（19.1±2.3）个月。腓骨横向骨搬移组患者患足9例愈合，愈合率90.0%，创面平均愈合时间（15.4±4.3）周，全部保肢，保肢率100%；且患者治疗后的疼痛、麻木症状均得到显著改善。至末次随访时，所有已愈合的溃疡均未复发。腓骨横向骨搬移组、胫骨横向骨搬移组溃疡复发率和患者截肢率均优于传统治疗组（均P<0.05）。结论：腓骨横向骨搬移术对糖尿病足有较好的临床疗效，能加速创面愈合，有效降低患者糖尿病足坏死截肢率。

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耳周V形切口在腮腺区良恶性病变手术中的应用

银珍, 农东晓

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 833-837. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.025

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目的：探讨耳周V形切口在腮腺区良恶性病变手术中应用的可行性。方法：回顾性分析2019年3月至2021年9月因腮腺区病变接受手术治疗且均行耳周V形切口的患者43例（44侧），其中先天性疾病4例、炎性疾病3例、良性肿瘤31例、恶性肿瘤5例；按腮腺切除范围分为区域性腮腺切除组、腮腺腺叶切除组及全腮腺切除组3组；观察并记录患者手术情况、住院时间、术后并发症及瘢痕情况等。结果：3组手术时间、引流量比较，差异有统计学意义（P<0.05）,3组引流时间及住院时间比较，差异无统计学意义（P>0.05）;43例患者均无味觉出汗综合征的发生，唾液瘘2例，耳垂麻木15例，暂时性面瘫14例（术后8～12周均可恢复正常）；3组暂时性面瘫及耳垂麻木比较，差异均有统计学意义（均P<0.05），以全腮腺切除组的发生率最高，分别达到100%和83.3%;3组瘢痕评分比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：耳周V形切口入路对腮腺区良、恶性病变可达到完整切除的同时，能最大限度的顾及美容效果；在对术前、术中评估有良好把握的前提下，该切口对未发生淋巴结转移的腮腺中低度恶性病变的手术应用具有可行性。

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内镜下改良电刀吸引器对婴幼儿混合性先天性后鼻孔闭锁的疗效观察

吴鸿泉, 刘展, 吴正规

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 838-842. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.026

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目的：探讨内镜下利用改良电刀吸引器手术治疗婴幼儿混合性先天性后鼻孔闭锁的临床疗效。方法：选择2015年2月至2020年11月广西医科大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科收治的9例婴幼儿混合性先天性后鼻孔闭锁的临床资料，所有患儿经过鼻纤维内镜和鼻咽部CT检查确诊后均在内镜下利用改良电刀吸引器进行手术，术中常规放置扩张管，观察并记录患儿手术时间、出血量、术中并发症（术中鼻腔各结构、圆枕、咽鼓管口、颅底等结构有无损伤）、置管时间等情况，术后随访6个月。结果：9例患儿中8例1次治愈，1例双侧CCA置管1个月的患儿术后2年单侧再次狭窄，经再次手术后治愈；术后随访所有患儿鼻通气恢复正常，无手术并发症发生，鼻内镜下检查成形的后鼻孔未发生再次狭窄或闭锁。结论：内镜下利用改良电刀吸引器对婴幼儿混合性先天性后鼻孔闭锁进行手术治疗安全有效，具有创伤小、出血少、手术时间短、保护正常组织结构、手术并发症少的优势，值得推广应用。

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金花三叶降糖颗粒的薄层色谱鉴别与含量测定

庞宇舟, 罗佳静, 李芳婵, 陈清, 庞晓云, 付吉利, 王苏妃, 梁资就

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 843-848. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.027

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目的：建立金花三叶降糖颗粒中藤茶、荷叶、木姜叶柯薄层鉴别及二氢杨梅素、根皮苷、杨梅素含量测定方法，为金花三叶降糖颗粒的质量控制提供一定的依据。方法：采用薄层色谱法（TLC）对金花三叶降糖颗粒中的藤茶、荷叶、木姜叶柯三味药材进行薄层鉴别研究，采用高效液相色谱法（HPLC）测定金花三叶降糖颗粒中有效成分二氢杨梅素、根皮苷、杨梅素的含量。结果：藤茶、荷叶、木姜叶柯薄层鉴别特征斑点清晰，分离度较好，且阴性无干扰；二氢杨梅素在0.124 5～1.245 mg/mL(r=0.998 9)浓度范围内呈良好的线性关系，平均回收率为98.37%,RSD为1.24%；根皮苷在0.027 5～0.275 0 mg/mL(r=0.999 9)浓度范围内呈良好的线性关系，平均回收率为99.70%,RSD为0.73%；杨梅素在0.029 2～0.292 1 mg/mL(r=0.999 6)浓度范围内呈良好的线性关系，平均回收率为99.02%,RSD为1.49%。结论：该方法准确便捷，重现性良好，可用于金花三叶降糖颗粒的质量控制。

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计算机导航在创伤骨科手术中的应用进展

陆声榆, 沙轲, 陆彩玲

广西医科大学学报. 2022, 39(05): 849-855. https://doi.org/10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.05.028

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计算机和导航技术的迅速发展为其在创伤骨科临床应用开拓了更多更好的方法，因其具有精准性、安全性、微创、辐射损害轻、手术并发症少等突出优点而在创伤骨科手术中得到广泛应用，并显示出其他工具无法替代的优势。本文介绍计算机导航技术的发展简史，探讨计算机导航在创伤骨科手术中的应用以及存在的不足，并展望计算机导航技术在创伤骨科手术应用中的发展趋势。

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2022年, 第39卷, 第05期　
刊出日期：2022-05-28

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