基于CRISPR/Cas12a系统联合重组酶聚合酶扩增的鸭星状病毒2型核酸检测试纸条的制备

李建柱, 赵利琴, 王露遥, 师睦然, 王成才, 张梦圆, 马超锋, 焦凤超, 何书海

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畜牧与兽医 ›› 2025, Vol. 57 ›› Issue (07) : 125-130.

基于CRISPR/Cas12a系统联合重组酶聚合酶扩增的鸭星状病毒2型核酸检测试纸条的制备

  • 李建柱, 赵利琴, 王露遥, 师睦然, 王成才, 张梦圆, 马超锋, 焦凤超, 何书海
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摘要

为建立鸭星状病毒2型(DAstV-2)核酸现场快速检测方法,基于CRISPR/Casl2a切割原理,联合重组酶聚合酶等温扩增(recombinase ploymerase amplification, RPA),设计用于DAstV-2核酸RPA扩增的引物和基于CRISPR/Cas12a反应的向导RNA(crRNA),优化反应条件确立最佳检测体系,并用胶体金横向流动试纸条(lateral flow dipstick, LFD)报告检测结果。结果:该检测体系对DAstV-2重组质粒的检出下限为10 copies/μL,灵敏性强且重复性好;用此检测体系检测鸭常见病毒,除DAstV-2核酸阳性外,其他均为阴性,特异性强;与普通RT-PCR的检测结果相比较,符合率达到100%,且更加方便快捷。研究结果提示,基于RPA-CRISPR/Cas12a-LFD系统的DAstV-2核酸检测方法灵敏性好、特异性强、操作简单,可在37℃恒温下实现DAstV-2的现场快速可视化检测。

关键词

鸭星状病毒2型 / 重组酶聚合酶扩增 / CRISPR/Cas12a / 横向流动试纸条

中图分类号

S858.32

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李建柱, 赵利琴, 王露遥, 师睦然, 王成才, 张梦圆, 马超锋, 焦凤超, 何书海. 基于CRISPR/Cas12a系统联合重组酶聚合酶扩增的鸭星状病毒2型核酸检测试纸条的制备. 畜牧与兽医. 2025, 57(07): 125-130

基金

2023年度河南省重点研发与推广专项(科技攻关)(232102111043); 信阳农林学院家禽重大疫病防控科技创新团队项目(2022CXTD06)

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