为了解信阳地方土鸡中J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的遗传进化情况，对疑似感染ALV的鸡进行了核酸检测、病理组织学观察，并采集肝脏组织接种鸡胚成纤维细胞DF-1进行病毒分离；对分离到的ALV-J全基因组进行PCR扩增并测序；使用MegAlign软件对病毒全序列进行核苷酸相似性比对，同时对gp85、3′UTR和U3区进行序列分析，并使用MEGA 11.0软件构建遗传进化树。结果：PCR扩增出ALV-J特异性条带；病理组织学观察结果显示，病鸡肝脏、脾脏组织结构紊乱，可见大量髓样瘤细胞增生；肝脏组织处理液接种DF-1细胞后，细胞上清液经ELISA检测P27抗原呈阳性，将分离株命名为HN24XY03。全基因组序列分析表明，HN24XY03株全长7 609 bp,符合典型禽反转录病毒基因组结构特点，与25株ALV-J参考毒株全基因组核苷酸序列的同源性为94.3%～95.8%,其中与广西分离株GX14NN01和GX16YL02株同源性最高，亲缘关系最近；gp85基因及推导氨基酸序列分析显示，HN24XY03株与ALV-J广西分离株GX14NN01、GX17NN05亲缘关系较近，处于同一分支；与ALV-J原型株HPRS103相比，HN24XY03 gp85蛋白存在34个氨基酸变异位点和1个位点(D61-)缺失，其中9个位于hr1区，9个位于hr2区；3′UTR序列分析结果显示，分离株HN24XY03为UTR-Δr-TM毒株；利用SoftBerry NSITE在线分析程序分析发现，与英国分离株HPRS103相比，HN24XY03 U3区转录调控元件相对保守。本研究结果丰富了信阳地方土鸡ALV-J的分子流行病学资料，为进一步研究ALV-J在我国地方品种鸡群中的遗传进化和致病性奠定了基础。