目前食品安全问题越来越受到重视，市面上常见的肉源检测方法存在自身的局限性，本研究探索基于线粒体基因ATP酶8亚基(ATP8)和NADH脱氢酶亚基1(ND1)基因检测不同肉源种属，旨在为肉类掺假鉴别新技术的开发提供技术支撑。以猪、牛、羊、鸡、鸭、兔、大鼠和小鼠共8种肉源的DNA作为检测靶标，根据ATP8和ND1基因中种间特异性强的序列来设计引物，采用PCR技术对目标DNA片段进行扩增，利用琼脂糖凝胶电泳对PCR扩增产物进行检测。结果：成功构建了引物组合分别为小鼠+鸡+羊，猪+牛+兔，鸭+大鼠的复合检测体系，能准确鉴别以上8种肉源种属；随机在市场采集里脊肉、开花肠、飘香牛肉、肉肠和肥牛卷共5种样本进行测试，其中里脊肉、开花肠、肉肠与配料表成分一致，飘香牛肉、肥牛卷与配料表成分不一致，证实该方法可应用于市场肉制品检测；该方法有效识别浓度达1 ng/μL。综上，本研究建立了8种肉源的低成本、高效的复合PCR检测体系，可以为食品安全中的肉类掺假鉴别提供帮助。