猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体的构建及功能研究

张金霞, 曹莹, 张昊文, 刘德鹏, 李铎, 王晓冉, 田似报, 吴香菊, 齐静, 周萌, 王先炜, 杜以军

PDF(4423 KB)
PDF(4423 KB)
畜牧与兽医 ›› 2025, Vol. 57 ›› Issue (06) : 98-104.

猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体的构建及功能研究

  • 张金霞, 曹莹, 张昊文, 刘德鹏, 李铎, 王晓冉, 田似报, 吴香菊, 齐静, 周萌, 王先炜, 杜以军
作者信息 +
History +

摘要

旨在构建猪三基序蛋白(TRIM)56 E3泛素连接酶活性突变体并验证其在干扰素刺激蛋白(STING)介导的Ⅰ型干扰素信号通路中的作用。对猪源、人源TRIM56进行同源性比对、氨基酸序列分析,确定猪TRIM56 E3泛素连接酶活性位点;设计猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体引物,定点突变猪TRIM56 E3泛素连接酶活性位点,构建猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体质粒并通过蛋白质免疫印迹(Western blot)验证表达;通过双荧光素酶报告基因(Luciferase)试验、实时荧光定量PCR(Real-time PCR)试验及免疫共沉淀(Co-IP)试验研究猪TRIM56及其E3泛素连接酶活性突变体在STING介导的Ⅰ型干扰素信号通路中的作用。结果:猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体构建成功;猪TRIM56促进STING介导的干扰素β(IFN-β)mRNA水平和启动子活性,促进STING K63连接的多聚泛素化修饰,而猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体没有显著促进作用。本研究为后续开展猪TRIM56在抗病毒天然免疫中的作用提供了有效工具。

关键词

猪TRIM56 / E3泛素连接酶 / 定点突变 / STING

中图分类号

S852.4

引用本文

导出引用
张金霞, 曹莹, 张昊文, 刘德鹏, 李铎, 王晓冉, 田似报, 吴香菊, 齐静, 周萌, 王先炜, 杜以军. 猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体的构建及功能研究. 畜牧与兽医. 2025, 57(06): 98-104

基金

中央引导地方基金发展项目(YDZX2024019); 山东省科技型中小企业创新能力提升项目(2024TSGC0274); 山东省农业科学院农业科技创新项目(CXGC2024D10,CXGC2025A04)

评论

PDF(4423 KB)

Accesses

Citation

Detail

段落导航
相关文章

/