为制备伪狂犬病病毒（PRV）VHS蛋白单克隆抗体，通过原核表达系统将目的基因克隆至原核表达载体pET-32a（+）,获得pET-32a-VHS重组质粒，成功制备了PRV VHS重组蛋白，将纯化后的蛋白作为免疫原接种BALB/c雌鼠，经过细胞融合、间接ELISA筛选和3轮亚克隆获得了2株PRV VHS蛋白的单克隆抗体，分别命名为1H8和4C3。使用间接ELISA方法检测，2株VHS单抗细胞均能稳定分泌抗体，且腹水抗体效价均达到1∶409 600。1H8和4C3的轻链均属于Kappa型，重链皆为IgG1亚类。Western blot和间接免疫荧光试验（IFA）显示，2株杂交瘤细胞株分泌的单抗均能与PRV病毒蛋白发生特异性反应。通过VHS蛋白的截短表达和Western blot鉴定出1H8单抗可以识别抗原表位²⁴¹VAPEDVKLKY²⁵⁰,单抗4C3可以识别抗原表位¹⁰³RADGDGAADAPP¹¹⁴。本研究制备出2株VHS的单克隆抗体，鉴定出2个新的抗原表位，为后续研究PRV VHS蛋白功能及其在病毒感染和免疫应答中的作用提供了重要依据。