旨在建立一种免疫酶测定方法，用于定量检测金黄色葡萄球菌肠毒素B。以金黄色葡萄球菌重组肠毒素B免疫BALB/c小鼠，制备鼠源单抗；筛选针对该毒素的配对单抗，构建双抗体夹心ELISA检测体系，在保证检测特异性基础上增加生物素/链霉亲和素放大系统，进一步提升敏感度。通过杂交瘤技术共获得6株针对重组B毒素的单抗克隆，其中由0085(捕获抗体)和0020(检测抗体)构建的双抗体夹心ELISA检测体系表现出良好的特异性，与肠毒素A、C、D、E均无交叉，对肠毒素B的检测敏感度可达0.625 ng/mL。增加生物素/链霉亲和素放大系统后敏感度可提升至0.156 ng/mL。本研究构建的检测方法具有高特异性及高敏感性，具有较强的应用前景。