旨在为解决国内禽白血病净化周期长以及净化鸡群J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染频发等问题提供新型抗ALV-J策略。本研究利用前期构建好的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与血清4型禽腺病毒(FAdV-4)纤突蛋白Fiber-2融合的重组FAdV-4为载体，并使用CRISPR/Cas9和Cre-LoxP技术构建表达ALV-J囊膜蛋白(Env)的重组FAdV-4,通过间接免疫荧光试验和Western blot验证重组病毒表达的Env蛋白，测定重组病毒在鸡肝癌细胞系(LMH)细胞中的增殖特性。结果：成功拯救了能表达ALV-J Env蛋白的重组病毒FAdV-4-ALV-J-env,该重组病毒在LMH细胞中的复制效率远低于野生型FAdV-4。本研究构建的重组病毒FAdV-4-ALV-J-env为ALV-J和FAdV-4感染的联防联控提供了二联候选疫苗株。