旨在建立一种快速鉴别检测鸭坦布苏病毒（DTMUV）、基因C型鸭甲肝病毒（DHAV-C）、鸭圆环病毒（DuCV）的多重PCR方法。参考GenBank中DTMUV E基因序列、DHAV-C VP1基因序列、DuCV Cap基因序列分别设计特异性检测引物，建立鉴别检测DTMUV、DHAV-C、DuCV的一步法多重PCR。该方法对DTMUV、DHAV-C、DuCV分别扩增出720、480和250 bp片段，对基因A型鸭甲肝病毒（DHAV-A）、新城疫病毒（NDV）、H9亚型禽流感病毒（AIV-H9）、鸭瘟病毒（DEV）、鸭细小病毒（DPV）、鸭呼肠孤病毒（MDRV）均无扩增产物；对DTMUV、DHAV-C、DuCV最低检测限度分别为3.8×10^-5、5.4×10^-5 和6.2×10^-5 μg/μL;与DTMUV、DHAV-C、DuCV单项PCR方法的符合率均为100%;该方法检测290份临床病料样品，DTMUV阳性率为8.97%,DHAV-C阳性率为10.69%,DuCV阳性率为2.07%,DTMUV/DuCV混合感染阳性率为4.14%,DHAV-C/DuCV混合感染阳性率为3.10%,DTMUV/DHAV-C/DuCV混合感染阳性率为0.34%。结论：成功建立了一种能同时鉴别检测DTMUV、DHAV-C、DuCV的一步法多重PCR,可用于临床中3种病毒单独感染或混合感染的鉴别检测和流行病学调查。