旨在建立可以检测非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pK205R抗体的血清学检测方法。基于杆状病毒表达系统构建重组杆粒Bacmid-pK205R,以纯化的pK205R蛋白为包被抗原，优化各项反应条件，建立间接ELISA抗体检测方法，验证方法的特异性、灵敏性、重复性，并对临床血清样品进行检测。结果显示：pK205R蛋白可以与ASFV阳性血清发生发应，ELISA方法的抗原包被浓度为50 ng/孔，4℃过夜包被，封闭液为2%牛血清白蛋白(BSA),37℃封闭1 h,待检血清以5%脱脂乳进行1∶200稀释，37℃孵育0.5 h;二抗工作浓度为1∶5 000,37℃孵育0.5 h, 37℃下显色10 min;该方法的阳性临界值为0.186(≥0.186为阳性，<0.186为阴性),且具有良好的特异性、灵敏性、可重复性，与商品化试剂盒符合率为79.92%。本研究成功建立pK205R非洲猪瘟间接ELISA抗体检测方法，为进一步优化和研制非洲猪瘟抗体的快速检测试剂盒提供了参考。