旨在探究夏季日粮添加槲皮素对湖羊睾丸组织基因表达的影响。采集对照组（基础日粮）和槲皮素组（每千克体重添加150 mg槲皮素的基础日粮饲喂5周）各3个湖羊睾丸组织样本，提取总RNA进行转录组测序（RNA-seq）,并进行差异表达分析、基因本体论（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）验证测序结果。结果：共获得36.5 Gb的有效数据，以P≤0.05和|log₂（FC）|≥1,检测出2 268个差异表达基因。相比于对照组，槲皮素组有980个基因表达显著上调，1 288个基因表达显著下调，涉及氧化应激和类固醇激素合成相关基因。GO富集分析发现，差异基因主要富集在胞质运输、细胞质囊泡部分、高尔基体相关囊泡和GTP酶结合等19个条目。KEGG富集分析发现，差异基因主要富集在肌动蛋白细胞骨架调节、细胞凋亡、血管内皮生长因子（VEGF）和p38丝裂原活化蛋白激酶/热休克蛋白B1（p38MAPK/HSPB1）等37条显著通路，其中25条为极显著通路。随机抽取的6个差异基因的RT-qPCR分析结果与测序结果一致。结论：筛选出夏季高温条件下日粮添加槲皮素影响湖羊睾丸组织氧化应激和类固醇激素合成相关基因及p38MAPK/HSPB1等通路，为进一步阐明槲皮素缓解夏季高温影响湖羊繁殖性能的分子机制提供参考。