犬冠状病毒和犬细小病毒双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

宫英杰, 扈富哥, 王蕾, 毕振威, 钱晶, 王建发, 谭业平

畜牧与兽医 ›› 2025, Vol. 57 ›› Issue (01) : 74-78.

犬冠状病毒和犬细小病毒双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

  • 宫英杰, 扈富哥, 王蕾, 毕振威, 钱晶, 王建发, 谭业平
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摘要

旨在建立犬冠状病毒(CCoV)和犬细小病毒(CPV)双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。针对CCoV的3′UTR与CPV的VP2设计引物与探针,通过对反应体系与条件进行优化,建立了CCoV与CPV的双重荧光定量PCR检测方法,并对该方法进行敏感性、特异性、重复性验证与临床样品检验。结果:CCoV与CPV阳性参考质粒浓度在10~2~10~7 copies/μL,CCoV与CPV的标准曲线R2分别为0.999与0.996,线性关系良好,CCoV与CPV的最低检测限均为5 copies/μL,与其他病原无交叉反应,组内与组间的变异系数均小于1.38%,说明该方法灵敏度高、特异性强、重复性良好;对113份临床样本进行检测,与普通PCR比较,该方法对CCoV和CPV的检出率较高,分别为37.2%和40.7%。研究表明,本试验建立的CCoV和CPV双重荧光定量PCR方法检测效果良好,为相关疾病的临床诊断、流行病调查等提供了有力工具。

关键词

犬冠状病毒 / 犬细小病毒 / 双重实时荧光定量PCR / TaqMan探针

中图分类号

S852.65

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宫英杰, 扈富哥, 王蕾, 毕振威, 钱晶, 王建发, 谭业平. 犬冠状病毒和犬细小病毒双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立. 畜牧与兽医. 2025, 57(01): 74-78

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