为了解信阳地区鸭甲型肝炎病毒3型的遗传变异特性，对信阳市发生疑似肝炎的金定雏鸭进行9种常见病毒PCR/RT-PCR检测，同时采集病鸭肝脏组织无菌处理后，尿囊腔接种10日龄SPF鸭胚进行病毒分离，并对分离毒株进行全基因组和VP1基因序列分析。结果：成功分离到1株鸭甲型肝炎病毒3型(DHAV3),命名为HNXY23;接种病毒的鸭胚发育不良，死亡胚体全身呈出血水肿；序列比对和系统发育树表明，分离株HNXY23属于DHAV3 GⅠ基因型，与2022年分离株HB-1、HZ-1、HZ-2和HZ-3亲缘关系较近；利用DNAMAN软件比对31株DHAV3 VP1氨基酸位点变异情况，发现在184、187、195、206和209位这5个氨基酸位点有较为明显的变化差异。本研究结果丰富了信阳地区DHAV3的分子流行病学资料，为进一步研究DHAV3的致病机制奠定了基础。