马立克病(MD)是由马立克病病毒(MDV)感染引起的一种重要的家禽免疫抑制病与肿瘤病，严重危害世界养禽业。随着MDV持续进化及毒力增强，急需研发新型高效的MD疫苗以加强该病的有效防控。本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，以MDV变异株HN302为亲本毒株，成功构建了meq基因缺失的毒株HN302Δmeq,经过PCR扩增鉴定及测序分析，证实meq基因缺失且传代稳定。间接免疫荧光试验(IFA)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析均证实HN302Δmeq感染鸡胚成纤维细胞(CEF)中无meq基因表达，并且meq基因的缺失不影响其他病毒基因的表达。利用RT-qPCR分析HN302Δmeq在CEF中的体外增殖曲线，结果显示meq基因的缺失不影响MDV体外复制。1日龄SPF鸡攻毒试验结果显示，与亲本毒株HN302相比，HN302Δmeq对宿主无致病性，其诱导的MD发病率、死亡率和肿瘤发生率均为0,且未观察到明显的免疫器官萎缩。上述数据表明，HN302Δmeq的毒力明显丧失，具备继续作为疫苗候选株开展相关研究的可能性。本研究成功构建了MDV变异株HN302的meq基因缺失毒株，为后续MDV的致病机制及新型疫苗研究奠定了基础。