为了解广东地区鸡球虫耐药性情况，分别从惠州、肇庆和韶关地区采集鸡场样品，利用球虫单卵囊分离纯化技术得到优势虫株柔嫩艾美耳球虫纯种卵囊，通过鸡体试验对各地区优势虫株进行复方磺胺氯吡嗪钠、尼卡巴嗪、地克珠利等11种常用抗球虫药物的耐药性评估。以抗球虫指数(ACI)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和最适抗球虫百分率(POAA)4项指标，综合评估不同地区虫株对不同抗球虫药物的耐药性及耐药程度。结果：柔嫩艾美耳球虫惠州株(ETHZ-Y)对氯羟吡啶耐药性最强，对马度米星铵呈中度耐药；肇庆株(ETZQ-Y)对氯羟吡啶、盐酸氯苯胍、癸氧喹酯、甲基盐霉素和地克珠利等药物完全耐药，对拉沙洛西钠耐药性最弱；韶关株(ETSG-Y)对氯羟吡啶和地克珠利等药物耐药性最为严重，而尼卡巴嗪的抗球虫效果相对较好；3个地方虫株普遍对复方磺胺氯吡嗪钠、地克利珠、癸氧喹酯、二硝托胺、氯羟吡啶、甲基盐霉素、莫能菌素和盐酸氯苯胍均产生完全或重度耐药。综上，惠州、肇庆和韶关地区的鸡球虫耐药情况较为严重，应及时针对性地改变用药策略，加强防控、改善环境，避免鸡球虫病暴发的风险。