旨在建立犬瘟热病毒（CDV）和犬腺病毒2型（CAdV-2）双重TaqMan荧光定量PCR（RT-qPCR）检测方法。本试验针对CDV的N基因和CAdV-2的E3基因设计两对特异性引物与两条标记不同荧光基团的TaqMan-MGB探针，对引物、探针的浓度、反应体系和反应条件进行优化后检测该方法的灵敏度，特异性及重复性。结果：该方法在CDV和CAdV-2阳性参考质粒浓度1×10～1～1×10～7 copies/μL的范围中，R²值为0.997和0.993,表明所建的标准曲线具有良好线性关系，能检测到最低浓度为5 copies/μL,并对其他病原无扩增现象，特异性良好；重复性试验中组内和组间变异系数小于1.54%。综上，建立的双重TaqMan RT-qPCR检测方法具有灵敏度高且特异性好等优点，可用于CDV和CAdV-2临床快速检测和鉴别诊断及流行病学调查等领域。