猪丹毒杆菌SpaA单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定

黄雅琴, 蔡金双, 缪芬芳, 李玉峰

畜牧与兽医 ›› 2024, Vol. 56 ›› Issue (09) : 84-90.

猪丹毒杆菌SpaA单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定

  • 黄雅琴, 蔡金双, 缪芬芳, 李玉峰
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摘要

旨在制备猪丹毒杆菌单克隆抗体,并确定其识别的抗原表位。采用原核表达、细胞融合试验、间接ELISA、亚克隆技术、Western blot、抗原表位以及抗体分型鉴定来研究猪丹毒杆菌表面保护性抗原A(SpaA)的单克隆抗体。结果:制备了SpaA重组蛋白,得到4株稳定分泌的单抗,且这4株单抗均能与SpaA蛋白发生特异性反应,其中1E8、5B3杂交瘤细胞培养上清液抗体效价为1∶1 600,5B5、9B5杂交瘤细胞培养上清液抗体效价为1∶3 200;1E8重链为IgG 2b, 5B3、9B5重链为IgG 1,5B5重链为IgG 2a,轻链均为Kappa; 1E8、5B5识别的抗原表位因SpaA蛋白C端的重复序列无法确认,5B3识别的抗原表位为258~267 aa, 9B5识别的抗原表位为462~472 aa。综上,本研究制备的单克隆抗体将为猪丹毒杆菌ELISA检测方法的建立奠定基础。

关键词

猪丹毒杆菌 / SpaA蛋白 / 原核表达 / 单克隆抗体

中图分类号

S858.28

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黄雅琴, 蔡金双, 缪芬芳, 李玉峰. 猪丹毒杆菌SpaA单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定. 畜牧与兽医. 2024, 56(09): 84-90

基金

国家重点研发项目(2022YFD1800902); 江苏南农高科技股份有限公司项目(090HMQY21042)

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