犬细粒棘球绦虫抗原ELISA检测方法的建立

班万里, 徐晶, 刘帅, 卡马力·吾力江, 潘星羽, 王冰洁, 王延, 塔力甫汗·古丽扎提, 特列吾汗·穆尼拉, 赵莉, 张壮志

畜牧与兽医 ›› 2024, Vol. 56 ›› Issue (09) : 70-74.

犬细粒棘球绦虫抗原ELISA检测方法的建立

  • 班万里, 徐晶, 刘帅, 卡马力·吾力江, 潘星羽, 王冰洁, 王延, 塔力甫汗·古丽扎提, 特列吾汗·穆尼拉, 赵莉, 张壮志
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摘要

旨在建立敏感特异的犬细粒棘球绦虫(Eg)抗原ELISA检测方法。用细粒棘球绦虫表膜抗原(EgSfAg)免疫兔获得抗血清,同时利用抗EgSfAg杂交瘤细胞株4E8制备单抗,通过亲和层析获得纯化的多抗和单抗4E8,制备Eg、多房棘球绦虫、泡状带绦虫、多头绦虫和犬弓首蛔虫等5种蠕虫抗原作为特异性质控样品,利用单抗4E8进行Western blot检测,通过人工感染犬结合氢溴酸槟榔碱下泄法制备阳性对照样品,同时设置敏感性质控样品和阴性对照样品,构建样品盘,以多抗为捕捉抗体,HRP标记的单抗4E8为检测抗体,建立犬Eg抗原ELISA检测方法,并验证该方法的敏感性和特异性。结果:Western blot检测证明单抗4E8仅与EgSfAg有特异性反应;建立的ELISA检测方法最低检出量为1∶512;对130份阳性样品的平均检出率为95.38%;交叉试验结果显示仅EgSfAg结果为阳性;检测150份阴性样品的平均符合率为95.56%。综上,建立的ELISA方法具有较好敏感性和特异性,为终末宿主棘球蚴病的诊断和流行病学调查提供了一种安全、简便、高效的免疫学检测方法。

关键词

细粒棘球绦虫 / 抗原 / 单克隆抗体 / ELISA / 样品盘

中图分类号

S855.99

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班万里, 徐晶, 刘帅, 卡马力·吾力江, 潘星羽, 王冰洁, 王延, 塔力甫汗·古丽扎提, 特列吾汗·穆尼拉, 赵莉, 张壮志. 犬细粒棘球绦虫抗原ELISA检测方法的建立. 畜牧与兽医. 2024, 56(09): 70-74

基金

新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(2022D01B18)

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