禽流感病毒M基因的重组慢病毒构建

潘俊慧, 王素春, 禹兰平, 周凯钰太, 魏世萌, 祁倩, 李超, 隋金钰, 康京丽, 王楷宬

畜牧与兽医 ›› 2024, Vol. 56 ›› Issue (08) : 85-90.

禽流感病毒M基因的重组慢病毒构建

  • 潘俊慧, 王素春, 禹兰平, 周凯钰太, 魏世萌, 祁倩, 李超, 隋金钰, 康京丽, 王楷宬
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摘要

旨在建立针对禽流感病毒(AIV)的实验室快速分子检测方法。构建重组慢病毒作为分子检测方法中的阳性对照品,采用PCR扩增技术获得AIV M基因的保守区片段,并构建pLVX-M-IRES-ZsGreen1重组慢病毒穿梭载体;将鉴定成功的重组穿梭质粒与骨架质粒pMD2.G和psPAX2共转染293T细胞,获得携带AIV M基因保守区的重组慢病毒;将重组慢病毒感染293T细胞,观察其荧光表达情况,收集、浓缩病毒液并测定其滴度;用AIV实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法检测M基因。结果表明:携带AIV M基因的重组慢病毒成功拯救,且其病毒滴度高、安全性强,可作为分子检测方法的阳性对照标准品。综上,本研究成功构建了AIV M基因的重组慢病毒,可高效包装出含有M基因保守区的慢病毒颗粒,为后续AIV分子检测试剂盒的研制提供参考。

关键词

禽流感病毒 / M基因 / 293T细胞 / 重组慢病毒

中图分类号

S852.65

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潘俊慧, 王素春, 禹兰平, 周凯钰太, 魏世萌, 祁倩, 李超, 隋金钰, 康京丽, 王楷宬. 禽流感病毒M基因的重组慢病毒构建. 畜牧与兽医. 2024, 56(08): 85-90

基金

国家重点研发计划项目(2022YFD1800500)

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