绵羊肺炎支原体核糖体蛋白30S rpsE基因的原核表达及多克隆抗体的制备

刘晓艳, 王永飞, 邓博文, 哈尔勒哈·阿曼太, 蔡江, 李有文

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畜牧与兽医 ›› 2024, Vol. 56 ›› Issue (07) : 78-84.

绵羊肺炎支原体核糖体蛋白30S rpsE基因的原核表达及多克隆抗体的制备

  • 刘晓艳, 王永飞, 邓博文, 哈尔勒哈·阿曼太, 蔡江, 李有文
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摘要

旨在了解绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)30S rpsE蛋白的生物学特性及其蛋白免疫原性。用在线分析软件预测30S rpsE蛋白的理化性质、B细胞抗原表位、糖基化位点、二级结构及三级结构等;采用PCR方法从病羊鼻拭子样品中扩增得到30S rpsE基因片段,经NdeⅠ、XhoⅠ酶切纯化后,将其连接到pET-42b载体上,构建原核表达载体pET-42b-30S rpsE,使用不同浓度IPTG诱导蛋白在大肠杆菌BL21中表达;重组蛋白通过SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,用镍层析法纯化蛋白后,与弗氏佐剂1∶1混合注射免疫家兔,然后采取全血,检测血清抗体效价及特异性。结果:经预测30S rpsE蛋白是亲水无信号肽的膜外蛋白,无跨膜结构域,有一个糖基化位点;成功构建了原核表达载体pET-42b-30S rpsE,表达的重组蛋白分子量约为25.9 ku,以包涵体和可溶性的形式存在;免疫家兔后血清抗体效价为1∶25 600,证实30S rpsE蛋白具有较好的免疫原性。

关键词

肺炎支原体 / 30S rpsE基因 / 原核表达 / 多克隆抗体

中图分类号

S858.26

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刘晓艳, 王永飞, 邓博文, 哈尔勒哈·阿曼太, 蔡江, 李有文. 绵羊肺炎支原体核糖体蛋白30S rpsE基因的原核表达及多克隆抗体的制备. 畜牧与兽医. 2024, 56(07): 78-84

基金

新疆生产建设兵团区域创新基金项目(2021BB014); 塔里木大学校长基金项目(TDZKCX202305)

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