为制备伪狂犬病病毒(PRV)VP22蛋白单克隆抗体，将目的基因克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建pET-28a-VP22原核表达质粒，并利用大肠杆菌表达系统，获得重组VP22蛋白。将纯化后的蛋白免疫6～8周龄BALB/c雌鼠，通过杂交瘤细胞融合技术及间接ELISA方法筛选，经3次亚克隆后获得4株PRV VP22蛋白的单克隆抗体1D6、1D9、1B12和2C10。间接ELISA检测4株杂交瘤细胞传至15代均能稳定分泌抗体，且细胞上清液抗体效价均为1∶6 400。经亚型鉴定，4株单克隆抗体的重链均是IgG1亚类，轻链皆属于κ型。Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)结果表明，制备的单克隆抗体均可与PRV发生特异性反应，并鉴定出2个抗原表位；Western blot和共聚焦试验结果表明，VP22蛋白是病毒早期蛋白，且早期存在于细胞质，晚期移位至细胞核并在核中积累。本研究制备的单克隆抗体将为后续探索PRV VP22蛋白的功能提供材料支撑。