猪繁殖与呼吸综合征病毒2型TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法的建立

徐之恒, 孙少辉, 董友富, 唐伟明, 徐孝宙, 邢军, 李豪, 孙刘妹, 万进, 王聪, 张振东

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畜牧与兽医 ›› 2024, Vol. 56 ›› Issue (04) : 84-88.

猪繁殖与呼吸综合征病毒2型TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法的建立

  • 徐之恒, 孙少辉, 董友富, 唐伟明, 徐孝宙, 邢军, 李豪, 孙刘妹, 万进, 王聪, 张振东
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摘要

为了准确、特异、高效地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒2型(PRRSV2),本研究根据GenBank上登录的PRRSV2不同谱系流行毒株的ORF6基因序列,选取保守区域设计合成了1对特异性检测引物和1条MGB探针,经优化退火温度、引物和探针比例等反应条件及敏感性、特异性、重复性试验,建立了检测PRRSV2的TaqMan MGB荧光定量PCR方法。结果:以猪繁殖与呼吸综合征病毒1型(PRRSV1)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪圆环病毒3型(PCV3)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)及猪细小病毒(PPV)等阳性核酸为模板,均无扩增;对标准质粒的最低检测下限为1×10~1 copies/μL,建立的标准曲线呈现良好的线性关系,相关系数R~2为0.994;稳定性和重复性好,批内和批间变异系数均小于1.78%。应用该方法对保留的30份临床阳性样品进行检测,结果阳性100%,Ct值在22~36间。综上,本研究建立的TaqMan MGB荧光定量PCR方法可用于临床和实验室中PRRSV2的快速检测,为猪繁殖与呼吸综合征的防控提供了技术支持。

关键词

猪繁殖与呼吸综合征病毒 / ORF6基因 / TaqMan MGB / qPCR

中图分类号

S852.651

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徐之恒, 孙少辉, 董友富, 唐伟明, 徐孝宙, 邢军, 李豪, 孙刘妹, 万进, 王聪, 张振东. 猪繁殖与呼吸综合征病毒2型TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法的建立. 畜牧与兽医. 2024, 56(04): 84-88

基金

江苏省基础研究计划(自然科学基金)青年基金项目(BK20201005); 江苏农林职业技术学院校企合作项目(2020kj021)

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