为建立一种牛呼吸道合胞体病毒(Bovine respiratory syncytial virus, BRSV)快速简便的检测方法，本研究基于BRSV M基因保守区序列，设计特异性引物及探针，通过优化反应条件，建立用于BRSV检测的一步法实时荧光定量PCR,并验证了该方法的敏感性、特异性和重复性；同时利用建立的检测方法对采集的临床样本进行检测。结果表明：本研究所建立的BRSV荧光定量检测方法，其特异性好，仅对BRSV存在特异性扩增；敏感性高，最低可达10 copies/μL;稳定性好，组内变异系数和组间变异系数小。使用所建立的BRSV一步法实时荧光定量PCR对宁夏地区94份临床样品进行检测，阳性率为5.3%(5/94)。上述结果表明，本研究建立的检测方法可为BRSV的快速诊断提供有力的技术支持。