为制备鸭坦布苏病毒(DTMUV)膜前体蛋白(prM)的单克隆抗体，将原核表达的重组prM蛋白配伍佐剂免疫6周龄雌性BALB/c小鼠，3次免疫后分离小鼠脾细胞并将其与SP2/0细胞进行融合，通过间接ELISA筛选，获得2株能稳定分泌抗DTMUV prM蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为3H4和5C10。2株杂交瘤细胞均能稳定分泌抗体，制备的腹水抗体效价分别为1∶51 200和1∶102 400。亚型鉴定结果显示，3H4和5C10单克隆抗体的重链均属于IgG2b,轻链均为Kappa型。Western blot和间接免疫荧光试验结果显示，这2株单克隆抗体均能与BHK-21细胞中感染的DTMUV发生特异性反应，而与同属的日本脑炎病毒无交叉反应。微量病毒空斑减少中和试验结果表明，这2株单克隆抗体均具有中和活性。进一步原核表达prM蛋白不同截短体，发现2株单抗针对不同表位，均位于prM蛋白的pr片段上。本研究制备的单克隆抗体3H4和5C10为快速检测DTMUV感染和研究prM蛋白的结构与功能奠定了基础。