除虫脲(DFB)属于苯甲酰苯脲类化合物，能够抑制昆虫及其幼虫的几丁质合成，从而控制成虫的数量。为了解除虫脲预混剂混饲给药后，猪粪便中药物的浓度，以DFB-~(13)C_6为内标，建立了猪粪便中DFB药物浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法。以冰乙酸-乙腈提取粪便中的DFB,采用QuEChERS技术净化提取液，LC-MS/MS测定，内标法定量。结果显示，猪粪便样品基质对于DFB的定量检测干扰较小，检测方法灵敏度高，检测限为10 ng/g,定量限为20 ng/g;检测方法的基质效应对样品的检测影响较小；标准溶液在2～500 ng/mL的浓度范围内，线性关系良好(R~2≥0.99);在定量限20 ng/g及低浓度(100 ng/g)、中浓度(1 000 ng/g)、高浓度(5 000 ng/g)的添加水平下，平均准确度在93%～110%,批内、批间变异系数均小于10%,符合方法学要求；不同浓度加标样品处理后的溶液，室温放置24 h稳定性良好，但应避免样品的反复冻融。结果表明，本试验建立的LC-MS/MS检测方法可用于猪粪便中DFB药物浓度的检测，为后期开展除虫脲预混剂的临床试验提供了可靠方法。