猪链球菌2型核糖核酸酶Ⅲ的克隆表达及催化特性分析

孙文, 张永毅, 陆畅, 朱德文, 尹媛媛, 徐泉明, 陈叶

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畜牧与兽医 ›› 2024, Vol. 56 ›› Issue (01) : 46-55.

猪链球菌2型核糖核酸酶Ⅲ的克隆表达及催化特性分析

  • 孙文, 张永毅, 陆畅, 朱德文, 尹媛媛, 徐泉明, 陈叶
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摘要

为了研究猪链球菌2型(SS2)核糖核酸酶Ⅲ(RNaseⅢ)的催化特性,利用大肠杆菌BL21(DE3)异源表达猪链球菌2型RNaseⅢ(SS-RNaseⅢ)并通过镍柱亲和层析的方法分离纯化。异源表达研究显示,重组蛋白RNaseⅢ大部分为可溶性表达;催化特性研究显示,RNaseⅢ主要依赖Mg~(2+)或Mn~(2+)发挥催化功能,并在不同离子浓度和pH值环境下具有不同的催化活性;底物特异性研究显示,RNaseⅢ特异性切割长度为30 bp的双链RNA,同时对内源性的rnc mRNA和5S rRNA具有良好的特异性。上述结果表明,相较于其他细菌RNaseⅢ,SS-RNaseⅢ具有独特的催化特性,为深入理解RNaseⅢ如何介导SS2致病机制奠定了基础。

关键词

猪链球菌2型 / 核糖核酸酶Ⅲ / 原核表达 / 催化特性

中图分类号

S852.61

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孙文, 张永毅, 陆畅, 朱德文, 尹媛媛, 徐泉明, 陈叶. 猪链球菌2型核糖核酸酶Ⅲ的克隆表达及催化特性分析. 畜牧与兽医. 2024, 56(01): 46-55

基金

福建省自然科学基金项目(2023J01272); 福建农林大学科技创新专项(CXZX2020061A)

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