大片吸虫磷酸丙糖异构酶基因的克隆表达和免疫原性分析

姚文浩, 吴兴隆, 秦志博, 李文豪, 朱惠丽, 王磊, 胡建和, 韩艳辉

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畜牧与兽医 ›› 2024, Vol. 56 ›› Issue (01) : 39-45.

大片吸虫磷酸丙糖异构酶基因的克隆表达和免疫原性分析

  • 姚文浩, 吴兴隆, 秦志博, 李文豪, 朱惠丽, 王磊, 胡建和, 韩艳辉
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摘要

磷酸丙糖异构酶(TPI)是生物体糖酵解的一种关键酶,对大片吸虫获取能量而赖以生存有着十分重要的作用。本试验根据肝片吸虫TPI (GenBank:KC164346.1)的基因序列,设计带有BamHⅠ和XhoⅠ作为酶切位点的引物,以大片吸虫的cDNA为模板,扩增大片吸虫磷酸丙糖异构酶(FgTPI)基因。结果:FgTPI基因开放阅读框为762 bp,编码253个氨基酸,理论等电点pI为8.07;构建的重组表达质粒FgTPI-pET-28a(+)成功在大肠杆菌中表达,重组蛋白的分子量约为32 kDa;重组蛋白免疫BALB/c小鼠,收取多克隆抗体,ELISA检测结果显示,rFgTPI能诱导较高的IgG抗体水平;用感染大片吸虫动物的血清检测重组蛋白的免疫原性,Western blot分析表明,重组蛋白rFgTPI具有良好的免疫原性;生物信息学预测显示,FgTPI主要以α螺旋和β折叠为主,β转角较少,有3个较长的无规则卷曲;通过α-磷酸甘油脱氢酶偶联法测定其活性,发现FgTPI酶促反应最佳pH值为7.5,最适温度为35℃。本试验结果为深入研究FgTPI的生物学功能、评价其作为抗大片吸虫病疫苗候选分子奠定了基础。

关键词

大片吸虫 / 磷酸丙糖异构酶 / 克隆 / 表达 / 酶活性分析

中图分类号

S855.9

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姚文浩, 吴兴隆, 秦志博, 李文豪, 朱惠丽, 王磊, 胡建和, 韩艳辉. 大片吸虫磷酸丙糖异构酶基因的克隆表达和免疫原性分析. 畜牧与兽医. 2024, 56(01): 39-45

基金

国家重点研发计划项目(2021YFD1301200); 中原科技创新领军人才项目(224200510024)

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