以原核系统表达的非洲猪瘟病毒p54重组蛋白为免疫原接种BALB/c小鼠，经过细胞融合、间接ELISA筛选和多次亚克隆获得了3株能够稳定分泌抗p54蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系，分别命名为2A4、5F6和RH15。3株单克隆抗体的重链均属于IgG1亚类，轻链均为Kappa型。Western blot和免疫荧光试验(IFA)证明3株单克隆抗体具有良好的反应性，可以用于靶抗原的特异性检测。通过噬菌体展示肽库筛选，确定了单克隆抗体2A4、5F6识别的抗原表位为~(157)NTASQ~(161),RH15识别的抗原表位为~(170)RQRNTYTHKDL~(180),进一步完善了靶抗原的B细胞线性抗原表位信息。