采用网络药理学、生物信息学并结合动物试验的方法，探讨七味白术散治疗脾虚泄泻小鼠的潜在作用机制。通过TCMSP数据库筛选和预测七味白术散的活性成分及潜在靶点，应用GEO数据库中的GSE14841数据集、GeneCards、OMIM和DisGeNET数据库收集脾虚泄泻相关疾病靶点，利用韦恩图获取药物和疾病的交集靶点，通过Cytoscape软件构建交集靶点的PPI网络，采用Metascape数据库对交集靶点进行GO和KEGG富集分析，最后通过脾虚泄泻小鼠模型进行验证。结果：七味白术散筛选得到149个活性成分，共有367个靶点；脾虚泄泻共有742个潜在的治疗靶点，两者共有36个交集靶点；GO和KEGG分析显示交集靶点主要通过调控细胞凋亡、T细胞受体信号通路、炎症性肠病和TNF等信号通路改善脾虚泄泻，主要涉及炎症反应、免疫调节等相关生物进程；动物试验发现七味白术散可明显改善脾虚泄泻小鼠的腹泻症状，增加其体重，减轻其结肠组织的病理损伤，并上调了小鼠结肠屏障蛋白Claudin-1、Occludin和血清中D-木糖的表达，证实了整合分析的可靠性。本试验表明，七味白术散可通过“多成分，多靶点，多途径”发挥治疗脾虚泄泻的作用，为阐释七味白术散治疗脾虚泄泻的临床应用提供了科学依据。