为建立检测感染小鼠血清中猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗体的方法，本研究应用PEDV受体结合区(receptor binding domain, RBD)重组蛋白作为抗原，通过探索各反应的最佳条件，并进行了该方法灵敏度、重复性、特异性分析。结果显示，最佳蛋白包被浓度为5μg/mL,待检血清稀释浓度为1∶400,孵育时间为37℃30 min,羊抗鼠IgG-HRP作为二抗，孵育条件为37℃30 min,底物显色时间为15 min。对建立的ELISA检测方法进行验证，阳性对照血清的稀释度为1∶204 800倍时OD_(450)值仍大于临界值，批内和批间的变异系数均小于10%,对猪传染性胃肠炎病毒和猪δ冠状病毒抗体小鼠阳性血清检测均不发生交叉反应。结果表明本研究建立的小鼠血清PEDV抗体间接ELISA方法具有很好的灵敏度、重复性、特异性。为PEDV候选疫苗的小鼠血清特异性抗体检测提供了一种精准、高效的方法。