为了制备乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)结构蛋白PrM单克隆抗体，首先根据NCBI参考序列(GQ918133.2)设计PrM引物扩增目的基因，将目的基因构建至pColdⅠ原核表达质粒上；然后鉴定阳性克隆质粒并转化至BL21(DE3)感受态细胞，经诱导表达蛋白纯化后。免疫6周龄BALB/c小鼠，进行杂交瘤细胞融合，并对融合细胞进行克隆筛选；最后将筛选阳性的杂交瘤细胞制备腹水获取单克隆抗体，采用间接ELISA检测抗体效价，Western blot和间接免疫荧光检测抗体特异性和病毒感染过程。结果显示：成功构建了pCold I-PrM原核表达载体，PrM蛋白在1 mmol/L IPTG 16℃过夜诱导培养时表达量较高，亚克隆后经腹水制备获得2株针对PrM区域的单克隆抗体，Western blot和间接免疫荧光检测2株单抗能够特异性识别JEV的PrM区蛋白，获得的单抗能够鉴定JEV在细胞内的感染过程。本研究为进一步研究JEV鉴别诊断技术和生物学功能提供基础。