猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是影响世界养猪业的重要病原，为了解析该病毒N蛋白抗原表位，本研究制备获得纯化的重组N蛋白，经过BALB/c小鼠免疫、细胞融合、间接ELISA方法筛选和Western blot鉴定，获得了7株稳定分泌抗PRRSV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，细胞培养上清液抗体效价为1∶800～1∶25 600,其中8F1、5E2、2B1、12E1的重链类型为IgG1,4F1、2H2、5A2的重链类型为IgG2b,轻链类型都为κ型。间接免疫荧光试验显示7株单克隆抗体均与PRRSV感染细胞产生反应，可识别3种不同的B细胞线性表位，分别位于47～57 aa、57～67 aa及67～77 aa区域，其中57～67 aa为新发现的抗原表位。本研究结果为PRRSV诊断试剂盒的开发和流行病学调查提供了有用工具。