2024年, 第55卷, 第07期　
刊出日期：2024-07-15

  

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  IL-17A在食管腺癌中的表达及其对NF-κB/COX-2信号轴的调控作用

  冯诚, 刘冬, 张军, 张蓉, 吴菁, 程妍

  山西医科大学学报. 2024, 55(07): 813-819. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.001

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  目的 探讨白细胞介素17A(IL-17A)在食管腺癌中的表达情况及其通过核转录因子κB(NF-κB)信号通路对环氧合酶-2(COX-2)的调控作用及机制。方法 收集10例食管腺癌组织、癌旁组织和血清，同时收集10例做胃镜检查的健康体检者的食管上皮组织和血清，免疫组化法检测组织中IL-17A和COX-2蛋白的表达，real time-PCR法检测癌组织和癌旁组织中IL-17A mRNA和Th17细胞的特异性转录因子维甲酸相关孤儿核受体c(RORc) mRNA的表达，ELISA法检测食管腺癌患者和健康对照者血清中IL-17A的含量。选取对数生长期的人食管腺癌OE19细胞，分为对照组、IL-17A(100 ng/mL)组和IL-17A(100 ng/mL)+PDTC(100μmol/L,NF-κB信号通路抑制剂吡咯烷二硫代甲酸铵)组，Western blot法检测OE19细胞中p50、p65、p-IκB-α和COX-2蛋白的表达水平。结果 食管腺癌组织中IL-17A阳性染色细胞数高于癌旁组织；相较于癌旁组织，食管腺癌组织中IL-17A和RORc mRNA水平增多(P<0.05)。与健康对照者相比，食管腺癌患者血清中IL-17A的含量明显升高(P<0.05)。与正常食管上皮组织比较，食管腺癌组织中COX-2蛋白阳性染色面积更大更深。与对照组相比，IL-17A组OE19细胞中p-IκB-α和COX-2蛋白的表达量明显增加(P<0.05);与IL-17A组相比较，IL-17A+PDTC组细胞中p-IκB-α和COX-2蛋白的表达量明显降低(P<0.05)。结论 IL-17A表达在食管腺癌患者组织和血清中均增加。在食管腺癌OE19细胞中，IL-17A可能通过激活NF-κB信号通路上调COX-2的表达量。
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  SIRT3在皮肤鳞状细胞癌中的作用

  魏艳, 王丽娟, 周艳, 郑焱

  山西医科大学学报. 2024, 55(07): 820-827. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.002

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  目的 探索去乙酰化酶3(Sirtuin-3,SIRT3)对皮肤鳞状细胞癌的影响及潜在调控机制。方法 采用基因表达谱交互分析数据库(Gene Expression Profiling Interactive Analysis, GEPIA)分析SIRT3在多种肿瘤中的表达。采用SIRT3小干扰RNA转染A431细胞株构建SIRT3敲低细胞(si-SIRT3组),将阴性对照siRNA转染至A431细胞中，构建对照组细胞。采用RT-qPCR及Western blot分别检测细胞中SIRT3 mRNA及蛋白水平，采用流式细胞仪检测细胞凋亡率、活性氧(reactive oxygen species, ROS)及膜电位(mitochondrial membrane potential, MMP)水平，采用Western blot检测细胞中促凋亡蛋白Bax、细胞色素C蛋白及抑凋亡蛋白Bcl-2的表达，采用CCK-8实验检测细胞的增殖。A431细胞分别用SIRT3抑制剂3-TYP处理(3-TYP组)和等量DMSO处理(对照组)后，采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。采用转录组测序分析对照组和si-SIRT3组的差异表达基因，并对差异表达基因进行GO及KEGG富集分析。结果 SIRT3在胸腺瘤及弥漫性大B细胞淋巴瘤中表达上调(P<0.05)。相比于对照组，si-SIRT3组细胞凋亡率明显增加(P<0.01),ROS释放增加(P<0.05),MMP明显降低(P<0.001),促凋亡蛋白Bax和细胞色素C蛋白表达上调，抑凋亡蛋白Bcl-2表达下调，细胞增殖受到抑制(P<0.001)。相比于对照组，3-TYP组细胞凋亡率增加(P<0.001)。转录组测序分析结果显示，对照组和si-SIRT3组细胞中差异表达基因共有94个，其中上调基因59个，下调基因35个，差异表达基因主要富集在代谢、信号转导、钙离子、蛋白转运、蛋白水解、胞外基质、金属内肽酶及激素分泌等信号通路中。结论 下调皮肤鳞癌细胞中SIRT3的表达，可以促进癌细胞凋亡，抑制增殖，SIRT3有望作为皮肤鳞癌患者新的治疗靶点。
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  厚朴酚对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和程序性坏死的影响

  朱静, 陈洁, 李红梅, 吴成柱

  山西医科大学学报. 2024, 55(07): 828-834. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.003

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  目的 探究厚朴酚对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖和程序性坏死的影响及作用机制。方法 体外培养人乳腺癌细胞株MCF-7,分别用0,5,10,20,40,80μmol/L厚朴酚处理24,48,72 h;用40μmol/L厚朴酚及40μmol/L Nec-1(坏死性凋亡抑制剂)+40μmol/L厚朴酚处理细胞24 h,然后采用MTT法检测细胞增殖水平。MCF-7细胞分别用0,2,4,8μmol/L厚朴酚处理细胞10 d,采用平板克隆实验检测MCF-7细胞集落形成能力。透射电镜下观察40μmol/L厚朴酚作用24 h后MCF-7细胞的超微结构。MCF-7细胞分别用0,10,20,40,80μmol/L厚朴酚处理24 h,采用流式细胞术检测细胞坏死率和活性氧(ROS)水平；采用Western blot检测受体相互作用蛋白1(RIP1)、受体相互作用蛋白3(RIP3)、磷酸化RIP3(p-RIP3)、混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)、磷酸化MLKL(p-MLKL)蛋白表达水平。结果 与0μmol/L厚朴酚相比，5,10,20,40,80μmol/L厚朴酚作用后MCF-7细胞存活率呈剂量依赖性下降(P<0.01)。与厚朴酚组相比，厚朴酚+Nec-1组细胞存活率明显增高(P<0.01)。与0μmol/L厚朴酚相比，2,4,8μmol/L厚朴酚显著抑制细胞集落形成(P<0.01)。电镜结果显示40μmol/L厚朴酚作用24 h后MCF-7细胞膜表面均出现空泡结构，部分空泡破裂，符合细胞程序性坏死的部分特征。与0μmol/L厚朴酚相比，10,20,40,80μmol/L厚朴酚处理后MCF-7细胞坏死率、ROS水平和细胞中RIP1、RIP3、p-RIP3、MLKL、p-MLKL蛋白表达均升高，差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 厚朴酚能诱导人乳腺癌MCF-7细胞程序性坏死，其机制可能与激活RIP3-MLKL信号通路有关。
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  TBHQ对阿霉素慢性心脏毒性大鼠的保护作用

  李润琦, 翟志红, 杜晴晴, 王忠

  山西医科大学学报. 2024, 55(07): 835-841. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.004

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  目的 探究特丁基对苯二酚（TBHQ）是否能通过调控核因子E2相关因子（Nrf2）信号通路对阿霉素诱导的慢性心脏毒性发挥保护作用。方法 将32只大鼠随机分为4组（n=8）:对照组（Con组）、阿霉素组（DOX组）、特丁基对苯二酚组（TBHQ组）、阿霉素+TBHQ组（DOX+TBHQ组）。DOX组和DOX+TBHQ组采用每周1次腹腔注射阿霉素（2.5 mg/kg）的方法构建慢性心脏毒性大鼠模型，连续6周；Con组和TBHQ组每周1次腹腔注射等体积0.9%NaCl溶液，连续6周。TBHQ组及DOX+TBHQ组在第1天给予阿霉素后即刻予以25 mg/kg的TBHQ溶液灌胃，每日1次，连续6周，Con组及DOX组予以等体积的ddH₂O灌胃，每日1次，连续6周。给药干预后通过心脏超声观察大鼠心脏结构和功能变化；采用HE染色和Masson染色观察心脏组织形态及纤维化情况；相关试剂盒测定血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醇（MDA）水平；ELISA法检测血清白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；Western blot检测心脏Nrf2及血红素加氧酶1（HO-1）蛋白的表达。结果 心脏彩超结果提示，与Con组相比，DOX组大鼠心脏室壁运动协调性减弱，运动幅度降低，左室射血分数（LVEF）及左室短轴缩短率（LVFS）减小（P<0.05）,而左室舒张末期内径（LVEDD）和左室收缩末期内径（LVESD）增大（P<0.05）;与DOX组比较，DOX+TBHQ组大鼠的LVEDD、LVESD、LVEF和LVFS均有改善（P<0.05）。HE及Masson染色结果显示，与DOX组相比，DOX+TBHQ组大鼠心肌损伤情况及心肌纤维化程度改善，胶原容积分数降低（P<0.05）。与Con组相比，DOX组大鼠血清SOD活力降低（P<0.05）,MDA、TNF-α和IL-6水平均升高（P<0.05）;与DOX组相比，DOX+TBHQ组大鼠血清SOD活力升高（P<0.05）,TNF-α、IL-6、MDA水平降低（P<0.05）。与Con组相比，DOX组大鼠心脏组织Nrf2、HO-1蛋白的表达降低（P<0.05）;DOX+TBHQ组较DOX组大鼠心脏组织Nrf2、HO-1蛋白表达升高（P<0.05）。结论 TBHQ可能通过上调Nrf2/HO-1信号通路对阿霉素诱导的大鼠慢性心脏毒性发挥保护作用。
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  GnT-V通过影响自噬调控糖尿病小鼠的心肌损伤

  赵然, 王婷婷, 赵杰琼, 李妍

  山西医科大学学报. 2024, 55(07): 842-848. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.005

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  目的 探究N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V（N-acetylglucosaminetransferase-V,GnT-V）对糖尿病心肌病小鼠心肌损伤的影响及潜在分子机制。方法 30只6～8周龄雄性C57BL/6小鼠，随机分为对照组（Con组）、糖尿病心肌病组（DCM组）和糖尿病心肌病+干扰GnT-V基因的腺相关病毒组（DCM+AAV-shGnT-V组）,每组10只。DCM组小鼠腹腔注射50 mg/kg链脲佐菌素，连续5 d,诱导糖尿病模型（随机血糖≥16.7 mmol/L）,继续普通饮食喂养12周诱导糖尿病心肌病模型；对照组小鼠腹腔注射相应剂量的的柠檬酸盐缓冲液；DCM+AAV-shGnT-V组在糖尿病模型诱导成功后4周，通过心肌注射40μL滴度为1×10¹⁰ PFU/mL的腺相关病毒（AAV）-shGnT-V以敲低GnT-V基因。超声心动图检测各组小鼠心脏功能，Masson染色观察各组小鼠心肌纤维化情况，TUNEL染色检测各组小鼠心肌细胞凋亡程度，免疫组化染色观察各组心肌组织中GnT-V和Beclin1的表达情况，Western blot法检测自噬蛋白LC3、P62及PI3K/AKT通路的蛋白表达情况。结果 与Con组相比，DCM组小鼠心脏收缩功能显著降低（P<0.05）,心肌组织纤维化程度明显增加（P<0.05）,心肌细胞的凋亡率明显上升（P<0.05）,心肌组织中GnT-V、自噬蛋白Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达显著增加，P62的表达明显减少（P<0.05）,且PI3K和AKT磷酸化程度明显降低（P<0.05）。与DCM组相比，DCM+AAV-shGnT-V组小鼠心脏收缩功能明显改善（P<0.05）,心肌组织纤维化程度显著下降（P<0.05）,心肌细胞的凋亡率明显降低（P<0.05）,GnT-V、Beclin1及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达显著下调，P62的表达明显增加（P<0.05）,且PI3K和AKT磷酸化程度明显增强（P<0.05）。结论 敲低GnT-V基因可以显著改善糖尿病心肌病小鼠的心肌组织纤维化进展和心肌细胞凋亡程度，其作用可能与激活PI3K/AKT信号通路，进而抑制心肌自噬有关。
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  小鼠SGK3真核表达载体的构建及鉴定

  巴隆, 张丽娜, 孟峻

  山西医科大学学报. 2024, 55(07): 849-854. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.006

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  目的 构建含有小鼠血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3(serum and glucocorticoid-induced protein kinase 3,SGK3)基因的真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry,并观察和验证其在转染细胞HEK293中的表达。方法 通过聚合酶链式反应将实验室保存的真核表达质粒pcDNA3.1-MYC-SGK3中目的基因SGK3与mCherry融合并扩增出来，然后定向克隆至pcDNA3.1-MYC质粒中，经限制性内切酶消化和测序证实后，通过脂质体法转染HEK293细胞，Western blotting法检测目的基因的蛋白表达情况。结果 测序结果与之前预期结果相符，证实pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry真核表达载体构建成功。Western blotting结果显示，转染pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry的HEK293细胞出现清晰的阳性反应条带，说明目的片段成功表达。结论 pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry真核表达载体构建成功。
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  襄五脂素对哮喘大鼠Th1/Th2失衡和GATA-3的影响

  周丹, 金发光, 潘蕾, 李立宏, 张媛, 董佳佳

  山西医科大学学报. 2024, 55(07): 855-862. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.007

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  目的 探讨襄五脂素对哮喘动物模型的治疗作用及其机制。方法 将大鼠随机分为5组，每组12只：对照组、模型组、低、中、高剂量组。除对照组之外，其他组大鼠均使用卵白蛋白（OVA）诱导构建哮喘大鼠模型。低、中和高剂量组大鼠分别灌胃10,20,40 mg/kg襄五脂素，对照组和模型组大鼠灌胃等体积的0.1%二甲基亚砜（DMSO）溶剂，共给药7 d。采用苏木素伊红（HE）和过碘酸-雪夫（PAS）染色观察大鼠肺组织形态和杯状细胞化生。ELISA法检测大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素（IL）-12、IL-4、IL-5、IL-13的水平。流式细胞术检测脾脏Th1/Th2细胞亚群。qRT-PCR检测大鼠肺组织中E-cadherin、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、N-cadherin和vimentin的mRNA表达水平。Western blot检测大鼠肺组织中E-cadherin、α-SMA、N-cadherin、vimentin、p-p38（Thr180+Tyr182）、p38、GATA-3和Histone H3（细胞核内参蛋白）蛋白表达水平。结果 与模型组比较，低、中和高剂量组大鼠的肺组织形态好转，炎性细胞、杯状细胞和黏液分泌减少；肺组织中E-cadherin的mRNA和蛋白相对表达量升高（P<0.05）,α-SMA、N-cadherin和vimentin的mRNA和蛋白相对表达量降低（P<0.05）,p-p38（Thr180+Tyr182）/p38比值和GATA-3/Histone H比值降低（P<0.05）;BALF中IFN-γ和IL-12水平以及IFN-γ/IL-4比值均升高（P<0.05）,IL-4、IL-5和IL-13水平降低（P<0.05）;脾脏中CD4⁺IFN-γ⁺（Th1）细胞数量和Th1/Th2比值升高（P<0.05）,CD4⁺IL-4（Th2）细胞数量降低（P<0.05）。结论 襄五脂素对哮喘大鼠具有显著治疗作用，可纠正哮喘大鼠Th1/Th2失衡并下调肺组织中p38介导的GATA-3磷酸化。
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  地黄多糖对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎的治疗作用

  吕弯弯, 赵茂娇, 李科, 冯仕红, 文雨薇, 秦雪梅, 杜昱光

  山西医科大学学报. 2024, 55(07): 863-871. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.008

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  目的 探讨地黄多糖对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎的治疗作用及机制。方法 提取生、熟地黄水提物及多糖，并测定生、熟地黄多糖相对分子量及单糖组成。将70只ICR小鼠随机分为空白组、模型组(DSS组)、美沙拉嗪组(5-ASA组)、生地黄水提物组(RR组)、熟地黄水提物组(PR组)、生地黄多糖组(RRP组)、熟地黄多糖组(PRP组),每组10只。第1～7天，除空白组外，其余小鼠饮用3%的DSS;第8～14天，空白组和DSS组小鼠饮用无菌水，5-ASA组、RR组、RRP组、PR组和PRP组分别给予美沙拉嗪、生地黄水提物、生地黄多糖、熟地黄水提物及熟地黄多糖，给药剂量均为200 mg/kg。实验过程中每天记录小鼠的体质量、粪便硬度及直肠出血情况(疾病活动指数);测量小鼠结肠长度；采用HE染色法观察结肠组织病理形态变化；ELISA法测定结肠组织中髓过氧化物酶(MPO)活性及LPS水平。结果 生、熟地黄多糖分子量均可分为约200 kD和4 kD。生地黄多糖由葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸、甘露糖、鼠李糖、木糖、岩藻糖7种单糖所组成，熟地黄多糖由葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸、甘露糖、木糖、岩藻糖6种单糖组成。与空白组相比，DSS组小鼠体质量明显下降(P<0.000 1),DAI评分显著提高(P<0.000 1),小鼠结肠长度缩短(P<0.05),脾脏质量增加(P<0.000 1),结肠组织中MPO酶活性和血清中LPS含量升高(P<0.05)。与DSS组相比，5-ASA组、RR组、RRP组和PR组疾病活动指数显著下降(P<0.05);PRP组疾病活动指数评分最低(P<0.000 1);PR组结肠长度显著增长(P<0.05);5-ASA组、RR组、PR组脾脏指数显著下降(P<0.01);多糖组(RRP和PRP组)下降最多(P<0.001);RR组、RRP组、PR组和PRP组结肠中MPO酶活性显著降低(P<0.05);PR组血清中LPS含量显著降低(P<0.05)。结论 生、熟地黄多糖及水提物均能够改善结肠病理组织，且熟地黄水提物及多糖对结肠炎小鼠治疗效果较好。
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  高脂饮食对小鼠胰岛功能及胰腺组织中TCF7L2/GLP-1的影响

  孟齐, 艾比拜·玉素甫, 刘华, 蒋升

  山西医科大学学报. 2024, 55(07): 872-878. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.009

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  目的 探讨高脂饮食对小鼠胰岛功能及胰腺组织中转录因子7-类似物2(TCF7L2)与胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的影响。方法 30只小鼠随机均分为2组：正常对照组和高脂饮食(T2DM模型)组，分别连续24周喂养普通饲料和60%高脂饲料。连续喂养24周后比较两组小鼠的体质量以及胰岛功能等相关指标的差异；检测小鼠不同时间点的血糖水平，血浆中胰岛素、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)的水平，胰腺组织中TCF7L2、GLP-1和胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)蛋白的表达水平和mRNA转录水平。结果 与正常对照组比较，高脂饮食组小鼠的体质量显著增加(P<0.01),葡萄糖耐量和胰岛素耐受能力明显受损(P<0.05),HDL-C、LDL-C、TC、TG、空腹血糖和胰岛素的水平明显增加(P<0.05),而TCF7L2、GLP-1和GLP-1R的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。另外，与正常对照组相比，高脂饮食组小鼠胰腺组织的胰岛形态不规则，体积增大，血管数量增多，扩张充血显著。结论 高脂饮食的T2DM小鼠，胰腺组织胰岛形态改变，胰岛功能降低，TCF7L2表达水平降低，并且GLP-1和GLP-1R表达水平同步降低。
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  索马鲁肽对转基因APP/PS1/tau阿尔茨海默病小鼠认知功能的影响

  程雨菲, 马义鹏, 陈晨, 刘虹

  山西医科大学学报. 2024, 55(07): 879-884. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.010

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  目的 探究索马鲁肽能否有效改善阿尔茨海默病（AD）转基因APP/PS1/tau小鼠的认知功能。方法 本研究选用的AD模型小鼠是含有PS1M146V、APPSwe和tauP301L 3个基因突变位点的APP/PS1/tau三重转基因AD小鼠（3×Tg-AD）。7月龄的APP/PS1/tau三重转基因小鼠及同窝非转基因野生型（wild type, WT）C57BL/6小鼠分别随机分为：AD模型组（Tg）和索马鲁肽组（Tg+Semaglutide）、正常对照组（WT）和索马鲁肽对照组（WT+Semaglutide）。WT+Semaglutide组和Tg+Semaglutide组腹腔注射索马鲁肽，WT组和Tg组腹腔注射等量生理盐水，小鼠干预30次，每2 d干预一次。干预结束后进行新物体识别实验研究小鼠认知功能的改变，行ELISA实验检测小鼠血清中与认知相关的标志物Aβ_1-42的水平，采用Western blot法检测小鼠海马区Ser231位点磷酸化的Tau蛋白表达。结果 新物体识别实验中，与Tg组相比，Tg+Semaglutide组新物体分辨率更高（P<0.05）;与WT组相比，WT+Semaglutide组分辨率更高（P<0.05）。干预结束后（9月龄）,各组间小鼠体质量及血糖浓度比较，差异无统计学意义（P>0.05）。蛋白质印迹法实验中，与Tg组相比，Tg+Semaglutide组Tau231磷酸化水平降低（P<0.05）;与WT组相比，WT+Semaglutide组Tau231磷酸化水平也略降低，但组间差异无统计学意义。酶联免疫吸附法实验中，与Tg组相比，Tg+Semaglutide组Aβ_1-42浓度降低（P<0.05）;与WT组相比，WT+Semaglutide组Aβ_1-42浓度也降低（P<0.05）。结论 索马鲁肽可降低AD小鼠血清中与认知相关的标志物Aβ_1-42水平和海马区Ser231位点磷酸化的Tau蛋白表达，能有效改善AD小鼠的认知功能，且索马鲁肽对小鼠体质量及血糖的影响在短时间里未见明显变化，安全性较高。
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  miR-200c通过抑制RhoA/ROCK通路延缓皮肤创伤愈合进程

  杨明, 何林, 荆银磊

  山西医科大学学报. 2024, 55(07): 885-894. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.011

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  目的 探究miR-200c在皮肤创伤愈合中的作用及其调控机制。方法 构建SD大鼠背部全层皮肤创伤模型，将创伤后大鼠分为agomir-NC组、miR-200c agomir组、sh-NC组和sh-RhoA组。采用qRT-PCR检测创面组织中miR-200c表达，Western blot检测创面组织中MMP-9、N-cadherin、E-cadherin和RhoA蛋白表达。创伤后第1,7,14天计算大鼠创面愈合率。采用双荧光素酶报告实验分析miR-200c和RhoA靶向关系。将人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞分为inhibitor-NC组、miR-200c inhibitor组、miR-200c inhibitor+sh-NC组和miR-200c inhibitor+sh-RhoA组。采用EdU法检测细胞增殖，细胞划痕实验检测细胞迁移，qRT-PCR检测HaCaT细胞中miR-200c表达，Western blot检测HaCaT细胞中MMP-9、N-cadherin、E-cadherin、RhoA和ROCK蛋白表达。结果 与正常皮肤比较，创面组织中miR-200c表达降低(P<0.01),RhoA表达升高(P<0.01)。miR-200c与RhoA 3′UTR存在靶向结合关系。与agomir-NC组比较，miR-200c agomir组大鼠创面愈合率以及MMP-9、N-cadherin、RhoA和ROCK蛋白表达均降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);与sh-NC组比较，sh-RhoA组大鼠创面愈合率以及MMP-9、N-cadherin、RhoA和ROCK蛋白表达均降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。与inhibitor-NC组比较，miR-200c inhibitor组HaCaT细胞增殖水平、细胞迁移率以及MMP-9和N-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05);与miR-200c inhibitor+sh-NC组比较，miR-200c inhibitor+sh-RhoA组HaCaT细胞增殖水平、细胞迁移率以及MMP-9和N-cadherin蛋白表达均降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。结论 miR-200c靶向RhoA,过表达miR-200c可以通过调控RhoA/ROCK通路抑制皮肤创伤愈合的再上皮化过程，进而延缓皮肤创伤愈合进程。
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  苍附导痰汤治疗多囊卵巢综合征大鼠的血清代谢组学和网络药理学研究

  谢军, 解达帅, 杨伟, 马乐, 姚宏军, 石萍

  山西医科大学学报. 2024, 55(07): 895-907. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.012

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  目的 基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UHPLC-QE-MS)分析苍附导痰汤对多囊卵巢综合征大鼠血清中内源性标志物的影响，并结合网络药理学研究其发挥药效的作用通路。方法 将40只大鼠随机分为正常组、模型组、达英-35组和苍附导痰组，每组10只。采用来曲唑法诱导多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型，造模成功后，达英-35组给予达英-35灌胃，苍附导痰组给予苍附导痰汤灌胃，每天1次，连续28 d。ELISA法检测大鼠血清促卵泡生长激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、睾酮(T)、雌二醇(E2)含量差异水平；苏木精-伊红(HE)染色法观察大鼠卵巢组织病理形态学变化；采用UHPLC-QE-MS分析各组大鼠血清样品，基于主成分分析法(PCA)及正交偏最小二乘判别分析法(OPLS-DA)筛选出相关差异代谢物，并依据MetaboAnalyst数据库查询相关代谢通路。采用网络药理学探究苍附导痰汤治疗多囊卵巢综合征的关键靶点，使用KEGG数据库富集分析作用通路，并借助MetScape插件构建“代谢物-反应-酶-基因”网络。结果 与正常组相比，模型组大鼠血清中FSH含量明显上升(P<0.05),LH、T、E2含量显著上升(P<0.01);与模型组相比，达英-35组大鼠血清中LH、T、E2含量显著降低(P<0.01),苍附导痰组大鼠血清中T明显降低(P<0.05),LH、E2含量显著降低(P<0.01)。与模型组比较，达英-35组和苍附导痰组大鼠卵巢组织形态明显改善；代谢组学筛选15个苍附导痰汤治疗多囊卵巢综合征的差异代谢物，涉及类固醇激素生物合成、甘油磷脂代谢、精氨酸和脯氨酸代谢等途径。网络药理学分析显示苍附导痰汤治疗多囊卵巢综合征的核心靶点为AKT1、ESR1、EGFR等，KEGG富集显示涉及内分泌抵抗、类固醇合成、雌激素信号通路等；采用MetScape插件构建“代谢物-反应-酶-基因”网络，发现6个关键靶点CYP1B1、CYP19A1、AKR1C1、AKR1C3、HSD17B1、HSD17B2,以及涉及类固醇激素生物合成通路。结论 苍附导痰汤对多囊卵巢综合征大鼠显示出潜在的治疗作用，这可能与其对类固醇激素合成代谢路径的调节作用有关，治疗的内源性标志物包括17a-羟基孕烯醇酮、孕酮、皮质酮，这些指标有助于监测治疗效果。
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  白藜芦醇纳米混悬剂的制备及体外初步评价

  李梦婷, 褚琳, 何宁, 刘家佳, 徐维平

  山西医科大学学报. 2024, 55(07): 908-915. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.013

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  目的 制备白藜芦醇(RES)纳米混悬剂，并进行体外评价。方法 采用沉淀法制备RES纳米混悬剂。以平均粒径及多分散系数(PDI)为评价指标，正交试验优化制剂工艺。冷冻干燥法制备纳米混悬剂冻干粉末并进行表征。使用透析袋法研究制剂的体外释放情况。建立高糖刺激的ARPE-19细胞损伤模型，CCK-8法评估RES纳米混悬剂对细胞活力的影响。结果 RES最优处方工艺为：RES浓度6 mg/mL,两种稳定剂(PVP K17∶HPMC)质量比2∶1,RES与稳定剂质量比1∶2,5%甘露醇做冻干保护剂。RES纳米混悬剂为相对规则的颗粒状，载药量为28.04%,36 h内累计释放量达91.27%。与RES相比，RES纳米混悬剂预处理后ARPE-19细胞活力显著提高(P<0.05)。结论 RES纳米混悬剂可提高RES的体外释放率，并且能够减轻高糖对ARPE-19细胞的损伤，提高细胞存活率。
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  单抗药物还原毛细管电泳法方法学验证研究

  徐刚领, 杜加亮, 付志浩, 倪永波, 于传飞, 王兰

  山西医科大学学报. 2024, 55(07): 916-921. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.014

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  目的 对还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳法（reduced capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate, rCE-SDS）用于单抗药物的纯度检测进行方法学验证，为业界此类质量控制方法的方法学验证提供参考。方法 按照2020版《中华人民共和国药典》通则<3127>的方法检测样品，对该方法的专属性、线性、准确度、精密度、范围、定量限、耐用性进行验证。结果 本方法专属性较好；线性拟合结果良好（均R²>0.99）。各分析用样品主峰的准确性结果满足98%～102%,总杂质和非糖基化重链（non-glycosylated heavy chain, NGHC）的准确性结果均满足70%～130%;重复性和中间精密度的RSD均≤15%;主峰的范围为≥92.4%,总杂质范围为0.36%～7.6%,NGHC的范围为0.12%～3.8%;总杂质和NGHC的定量限分别为0.36%和0.12%。结论 本方法验证各项指标均符合预设可接受标准，且该研究可以为此类方法学验证的科学性和合理性设计提供参考。
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  抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性测定方法的建立

  俞小娟, 刘丽, 白海娇, 韩晓捷, 刘春雨, 付志浩, 李萌, 杜加亮, 徐刚领, 段茂芹, 杨雅岚, 崔春博, 陈浩彬, 于传飞, 王兰

  山西医科大学学报. 2024, 55(07): 922-928. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.015

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  目的 建立基于报告基因的抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法。方法 以WIL2-S细胞系作为靶细胞，以Jurkat-NF-κB-Luc转基因细胞系作为效应细胞，对抗体的量效范围、孵育时间、诱导时间、效靶比及细胞接种密度进行优化，构建可用于测定抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性的报告基因法。依据ICHQ2的指导原则对方法进行全面验证，包括专属性、准确性、精密度、线性、稳定性。结果 成功建立了具有量效关系的抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法，该方法的抗体起始浓度为500 ng/mL,稀释倍数为1∶4,共计8个浓度点（500,125,31.25,7.81,1.95,0.49,0.12,0.031 ng/mL）,效靶比为4∶1,诱导时间为4 h。本方法具有良好的专属性；5个不同稀释组回收率样品经测定，相对效价分别为59.63%±4.57%,75.54%±4.05%,99.98%±9.63%,123.90%±5.54%和142.51%±12.82%;对应的回收率分别为93.17%±7.15%,94.42%±5.06%,99.98%±9.63%,99.12%±4.43%以及91.21%±8.21%,CV分别为7.67%,5.35%,9.63%,4.47%和9.00%,上述结果的变异系数CV值均<10%;实测效价与理论效价线性回归分析相关系数R²=0.982 3,线性良好；本研究建立的方法可以敏感检测出抗体结构变化对生物活性的影响，对双特异性抗体的稳定性检测有一定的指导意义。结论 利用转基因细胞法成功建立了抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法，该方法专属性强、准确性高、重复性好，可用于评价抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性。
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  中性粒细胞胞外诱捕网诱导的血栓形成对心血管疾病影响的研究进展

  徐臣年, 田志远, 崔斌, 夏麟

  山西医科大学学报. 2024, 55(07): 929-935. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.016

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  <正>中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps, NETs）在动静脉血栓形成中发挥重要作用^[1],与病原体和凝血系统成分之间有着复杂的相互作用^[2]。免疫血栓形成是一种捕获入侵病原体的宿主防御机制；然而，其异常激活（血栓炎症）会增加心血管疾病等无菌炎症条件下发生血栓事件的风险。例如，动脉粥样硬化斑块中的NETs导致巨噬细胞促炎表型增加^[3],并引发炎症介质的产生，从而增强血小板活化和血栓形成^[4]。
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  高原胃肠应激反应的病理变化与肠道菌群调控作用的研究进展

  赵海涛, 马力天, 林强, 李嘉辉, 口志福, 王景杰

  山西医科大学学报. 2024, 55(07): 936-941. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.017

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  <正>人在短时间内从平原进入高原地区，海拔高度快速升高，机体会产生一系列缺氧表现。这些反应包括但不限于头痛、失眠、食欲减退等症状，严重时甚至可能对人体器官和系统造成损害，威胁生命^[1]。近年来，急性高原病（acute altitude sickness,AMS）导致的胃肠应激症状在不同人群中均有发生，逐渐受到关注。一项针对从平原地区急进高原驻训官兵的研究表明，一定时间内进驻不同海拔高度（3 300,4 000,4 300,4 700 m）高原3 d内消化系统症状发生率依次为纳差（54.7%）、恶心（31.1%）、腹胀（25.1%）、腹泻（23.3%）、便秘（18.3%）^[2]。
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  从骨髓脂肪化角度探讨再生障碍性贫血的发病机制

  王紫宁, 杨波, 卢学春

  山西医科大学学报. 2024, 55(07): 942-949. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.018

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  <正>再生障碍性贫血（aplastic anemia,AA）是一种骨髓造血功能障碍的疾病，其发病机制十分复杂，与造血微环境失调、免疫紊乱、药物与辐射等多种因素相关。骨髓脂肪化是AA骨髓病理学最典型的特征之一。骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）由早期的中胚层细胞发育而来，主要分布于结缔组织和器官间质中^[1]，具有自我更新、增殖分化为多种细胞等的潜能。20世纪60年代Friedenstein等^[2]首次从骨髓中提取BMSCs,BMSCs表面可表达CD105和CD73。此后不同学者从脐带血、脂肪、牙髓、外周血等中分离、培养得到BMSCs，并通过基础实验验证其在免疫调控、造血分化、组织再生等方面的作用。
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  嵌合型环状X染色体Turner综合征的产前诊断与遗传咨询1例

  杨文霞, 李佳

  山西医科大学学报. 2024, 55(07): 950-952. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.019

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  <正>特纳综合征（Turner syndrome）是最常见的染色体异常疾病之一，以X染色体整体或部分缺失或结构异常为遗传学特征。Turner综合征的发生率约为新生女婴的1/300～1/2 500^[1]，特纳嵌合现象在患有Turner综合征的女孩中占30%，其中2%～5%的患者发现环状X染色体（ring X chromosome）。嵌合环状X染色体的Turner综合征相关表型可能为精神障碍、学习困难、自闭症、颅面异常、心血管疾病和骨骼问题，以及与Turner综合征相关的其他表现，具体表型的严重程度与环染色体上缺失区域的大小和嵌合体的数量相关^[2-4]。