小鼠SGK3真核表达载体的构建及鉴定

巴隆, 张丽娜, 孟峻

山西医科大学学报 ›› 2024, Vol. 55 ›› Issue (07) : 849-854. DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.006

小鼠SGK3真核表达载体的构建及鉴定

  • 巴隆, 张丽娜, 孟峻
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摘要

目的 构建含有小鼠血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3(serum and glucocorticoid-induced protein kinase 3,SGK3)基因的真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry,并观察和验证其在转染细胞HEK293中的表达。方法 通过聚合酶链式反应将实验室保存的真核表达质粒pcDNA3.1-MYC-SGK3中目的基因SGK3与mCherry融合并扩增出来,然后定向克隆至pcDNA3.1-MYC质粒中,经限制性内切酶消化和测序证实后,通过脂质体法转染HEK293细胞,Western blotting法检测目的基因的蛋白表达情况。结果 测序结果与之前预期结果相符,证实pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry真核表达载体构建成功。Western blotting结果显示,转染pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry的HEK293细胞出现清晰的阳性反应条带,说明目的片段成功表达。结论 pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry真核表达载体构建成功。

关键词

血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3 / 真核表达载体 / 聚合酶链式反应 / 限制性内切酶 / HEK293细胞 / 载体构建

中图分类号

R-332

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巴隆, 张丽娜, 孟峻. 小鼠SGK3真核表达载体的构建及鉴定. 山西医科大学学报. 2024, 55(07): 849-854 https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.006

基金

国家自然科学基金资助项目(81360109,81660267); 内蒙古自治区科技厅自然科学基金资助项目(2021MS08158)

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