2024年, 第44卷, 第10期　
刊出日期：2024-10-20

  

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  抑制Yes相关蛋白通过抑制上皮间质转化减轻CCl₄诱导的小鼠肝纤维化

  赵文, 阮何静, 汪思远, 程羽哲, 雷淼, 赵久法, 刘传苗

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 1839-1849.

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  目的 探索Yes相关蛋白（YAP）可否通过调控上皮间质转化影响肝纤维化的发生发展。方法 将8周龄C57BL/6小鼠18只随机分为对照组、肝纤维化模型组和YAP抑制剂维替泊芬干预组，6只/组。肝纤维化模型采用四氯化碳（CCl₄）溶液腹腔注射8周造模；维替泊芬干预组在CCl₄基础上第7～9周采用维替泊芬腹腔注射干预。HE染色、Masson染色、肝脏生化学检测观察小鼠肝脏纤维化程度；转录组、蛋白组学测序及联合生信分析探明肝纤维化过程中上皮间质转化通路是否受YAP调控；免疫组化染色和Western blotting检测YAP及上皮间质转化关键基因E-cadherin、N-cadherin、Twist等表达变化。采集健康体检、慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化患者血清各60例，酶联免疫吸附法检测其中YAP、N-cadherin、Vimentin、Twist血清表达水平。C57BL/6小鼠24只随机分为对照组、肝纤维化模型组、Twist抑制剂干预组和Twist抑制剂与YAP激动剂共同干预组，6只/组。HE染色、Masson染色、网状纤维染色观察小鼠肝脏纤维化程度，Western blotting检测各组α-SMA、YAP和Twist表达变化。结果 小鼠肝组织病理学结果提示肝纤维化小鼠与对照组相比肝小叶结构破坏、假小叶形成，维替泊芬干预组纤维间隔变性，部分小叶结构恢复。随肝纤维化发生，血浆ALT、AST水平显著升高（P<0.01），维替泊芬干预组肝功能改善（P<0.01）。采用肝组织转录组、蛋白组测序及联合分析找到在肝纤维化形成和维替泊芬干预过程中同时在mRNA和蛋白水平差异表达的基因，发现了N-cadherin和Twist在3组间差异具有统计学意义（P<0.05），并进行PPI分析显示YAP与E-cadherin、N-cadherin存在关联。免疫组化和Western blotting结果提示N-cadherin、Twist、Vimentin随肝纤维化形成升高，E-cadherin在肝纤维化组织中表达下降（P<0.01）。抑制YAP可下调肝组织N-cadherin、Twist蛋白表达（P<0.01）。慢性乙型肝炎患者血清YAP、N-cadherin、Vimentin和Twist水平均随肝炎及肝硬化发生升高，在APRI>0.5或FIB-4>1.45患者中显著升高（P<0.01）。血清YAP在健康对照、肝炎、肝硬化患者中平均水平分别为4.09、5.69和5.36 ng/mL（P<0.01），其与N-cadherin、Vimentin、Twist水平均呈显著正相关，相关系数分别为0.626、0.435、0.526。采用Harmine抑制小鼠肝组织Twist表达，并在Harmine基础上予以YAP激动剂XMU-MP-1干预，肝组织病理学结果提示抑制Twist使肝纤维化小鼠肝组织炎症及纤维化程度减轻，同时激活YAP表达可再次加重胶原纤维沉积。Western blotting检测结果提示Harmine下调肝纤维化小鼠肝组织中α-SMA、YAP及Twist蛋白表达，同时激活YAP使肝组织α-SMA和YAP表达升高（P=0.079,P<0.05）。结论 上皮间质转化是肝纤维化发生的重要机制之一，抑制YAP可通过减少上皮间质转化发生减轻肝纤维化。
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  天麻素通过调节CCR5/AKT信号传导缓解新生小鼠缺血缺氧后小胶质细胞介导的炎症反应

  石金沙, 张皓南, 张幸霖, 石浩龙, 左涵珺, 郭涛, 王朝, 余航, 李娟娟

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 1850-1857.

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  目的 研究天麻素（GAS）通过CCR5/AKT信号对新生小鼠缺血缺氧（HIBD）后小胶质细胞介导炎症反应的影响。方法选用36只10 d龄的C57BL/6J小鼠，随机分为假手术组（Sham）、缺血缺氧模型组（HIBD）、缺血缺氧+天麻素治疗组（HIBD+GAS）,12只/组。模型组和治疗组均行左颈总动脉分离并结扎，1 h后置于缺氧环境中40 min后放回母笼，治疗组在术前1 h、缺氧后2 h及缺氧后12 h腹腔注射剂量为100 mg/kg的GAS。体外培养BV2小胶质细胞验证天麻素对CCR5/AKT及炎症因子TNF-α、IL-1β的影响，将其分为：对照组（Control）、氧糖剥夺组（OGD）、OGD+GAS处理组（OGD+GAS）、GAS处理组（GAS）；为进一步验证CCR5拮抗剂Maraviroc(M)的作用以及其与GAS联合干预的作用，将细胞分为：Control组、（OGD）组、M组、OGD+M组、OGD+M+GAS组。Control组用高糖培养基正常培养，含GAS组用GAS0.34μmol/L处理1h，含M组用Maraviroc 10μmol/L处理1 h，最后将含OGD组均更换为无糖培养基并置于缺氧小室2 h以构建OGD模型。通过Western blotting检测CCR5、AKT、p-AKT、TNF-α、IL-1β的蛋白表达，免疫荧光双标染色检测新生小鼠胼胝体CCR5以及BV2小胶质细胞中CCR5和p-AKT的表达变化。结果 与Sham组相比，HIBD组中CCR5、TNF-α表达显著增加，p-AKT表达显著减低（P<0.05,0.01或0.001）,GAS治疗后逆转了上述结果（P<0.05或0.01）。与Sham组相比，HIBD组中新生小鼠胼胝体区小胶质细胞标记物IBA1及CCR5的荧光强度明显升高，其共表达增加，而GAS干预后IBA1及CCR5的荧光强度显著降低，共表达减少。与Control组相比，OGD组CCR5、TNF-α、IL-1β表达显著增加，p-AKT表达显著减少（P<0.05,0.01或0.001）;GAS或Maraviroc治疗后，逆转了上述结果（P<0.05或0.01）。OGD+M组与OGD+M+GAS组比较，差异无统计学意义。结论 GAS可能通过靶向CCR5激活AKT的磷酸化表达水平，抑制炎症因子的表达，发挥神经保护作用。
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  不同延迟降温时间对劳力型热射病大鼠病理损伤的影响

  赵金宝, 贾亿卿, 毛汉丁, 王世娇, 徐凡, 李鑫, 陶冶, 薛蕾, 刘树元, 宋青, 周必业

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 1858-1865.

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  目的 通过建立劳力型热射病（EHS）大鼠模型，探索不同降温时间对器官病理损伤的影响及可能的机制。方法 选取健康成年雄性Wistar大鼠72只建立劳力型热射病动物模型。将大鼠随机分为6组，12只/组：正常对照组（CON）；模型组（EHS）（建模后不进行主动降温）；即刻降温组（建模后立即进行冷水浴降温）；延迟降温A组（建模后延迟5 min进行冷水浴降温）；延迟降温B组（建模后延迟15 min进行冷水浴降温）；延迟降温C组（建模后延迟30 min进行冷水浴降温）。记录各组大鼠核心体温变化，计算降温速率。所有实验大鼠观察24 h后，解剖留取血液样本检测炎症指标白细胞介素-1β、白细胞介素-2、白细胞介素-4、白细胞介素-6、白细胞介素-10、γ-干扰素并进行脏器（肾脏、肺脏、大脑和回肠）病理学检查；若24 h内发生死亡，则立即解剖留取血液样本化验并进行病理取材。结果 模型大鼠24 h内死亡例数随着降温治疗的延迟而增加，各组死亡率差异有统计学意义（P<0.05）。降温延迟时间与死亡率呈正相关（r=0.996,P=0.004）。降温速率与死亡率呈负相关（r=-0.961,P=0.009）。炎症因子检测结果显示，各因子在不同降温干预组的浓度变化呈现出较大的异质性。所有模型动物均有明显器官损伤，病理以上皮脱落、水肿、渗出和炎细胞浸润为主；脑组织和肾组织在发病24 h内受损最明显。结论 EHS大鼠模型肾脏、肺脏、大脑和小肠存在显著的非特异性病理损伤，但受损程度并不一致；随着降温的延迟，病理损伤逐渐加重。炎症因子在不同降温时间干预的血浆浓度变化存在显著异质性。
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  结直肠成纤维细胞通过激活ERK信号通路促进结直肠癌细胞的恶性生物学行为

  郗雪艳, 邓婷, 杜伯雨

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 1866-1873.

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  目的 探究人结直肠成纤维细胞（CCD18-Co）条件培养基对结直肠癌（CRC）细胞恶性进展的影响，为CRC治疗提供思路。方法 利用RTCA、克隆形成和创伤愈合实验测定CRC细胞增殖、克隆形成和迁移能力；Western blotting检测CCD18-Co-CM激活的CRC细胞ATK、ERK和STAT3信号通路，同时检测相应信号通路阻断后CRC细胞增殖、克隆形成和迁移能力；肿瘤球形成实验检测CCD18-Co-CM对CRC细胞成球能力的影响；RT-PCR方法检测CRC细胞干性标志物的表达情况。结果 CCD-18Co-CM能够促进CRC细胞的增殖、克隆形成和迁移能力（P<0.05）。CCD-18Co-CM能够增强CRC细胞的成球能力及干性标志物的表达（P<0.05）。CCD-18Co-CM能够激活CRC细胞ERK信号通路（P<0.05）,ERK信号通路抑制剂SCH772984能够降低CRC细胞增殖、克隆形成和迁移能力及成球能力和干性标志物的表达（P<0.05）。结论 人正常结直肠成纤维细胞可通过激活ERK通路促进CRC细胞的恶性进展。
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  槲皮素通过抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路抑制小鼠成纤维细胞焦亡

  舒萍, 袁孟珂, 杨珂, 何伟志, 刘丽

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 1874-1880.

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  目的 探究槲皮素通过NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)信号通路调控小鼠成纤维细胞（NIH-3T3）焦亡的影响及其机制。方法 实验分为对照（Control）组、模型（Model）组、槲皮素（HPS）组、NLRP3特异性抑制剂（MCC950）组。CCK-8法检测槲皮素对NIH-3T3细胞活力的影响。光镜下观察细胞形态变化，ELISA检测白细胞介素（IL）-18、IL-1β含量，Western blotting和qRT-PCR检测NLRP3、活化半胱氨酸蛋白酶1(Cleaved caspase-1)、GSDMD-N蛋白表达及NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA水平。TUNEL染色及乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测细胞焦亡情况。结果 槲皮素作用于NIH-3T3细胞最佳干预浓度和时间分别是20μmol/L和24 h。与Control组相比，Model组细胞出现明显肿胀、破裂、细胞内容物流出，IL-18、IL-1β含量和NLRP3、Cleaved caspase-1、GSDMD-N蛋白表达及NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA水平均明显升高（P<0.001,P<0.0001）,TUNEL染色的阳性细胞数及LDH释放量增加（P<0.0001）。与Model组相比，HPS组和MCC950组细胞焦亡情况改善，IL-18、IL-1β含量和NLRP3、Cleaved caspase-1、GSDMD-N蛋白表达及NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA水平显著降低（P<0.01,P<0.001）,TUNEL染色阳性细胞数及LDH释放量明显减少（P<0.0001）。结论 槲皮素可能通过抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路抑制成纤维细胞焦亡，下调炎症因子释放从而发挥治疗作用。
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  原代大鼠主动脉血管干细胞的体外培养扩增及鉴定

  马华根, 黄燕, 杨盈欣, 刘海琴, 唐元瑜, 丛伟红

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 1881-1886.

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  目的 采用“切段外膜贴壁培养法”体外培养扩增出原代大鼠主动脉血管干细胞，为开展血管重构及相关疾病研究提供实用的工具细胞。方法 无菌分离2～3周龄Sprague-Dawley大鼠胸腹主动脉，切成长约2.0 mm的血管节段，均匀种瓶，经外膜贴壁固化后进行原代培养，待细胞生长融合度达80%～90%时传代。镜下观察细胞形态及其生长特性，采用流式细胞仪分析目的细胞表面标志物CD分子表达情况，成脂、成骨诱导分化实验检测其多向分化潜能。结果 接种3 d后，少量梭形、星形或多角形的细胞从血管节段周围爬出；5～6 d后形成岛屿状细胞集落，细胞增殖迅速，呈放射状向外扩大，并出现细胞克隆现象；7～8 d后细胞融合成片，呈涡旋状分布；传至第3代后，细胞匀质性较高，表现为典型的“成纤维样”排列生长。流式细胞仪分析细胞主要表达CD44、CD73、CD90，阳性率分别为80.3%、62.2%、46.8%；低表达CD34、CD45、CD11b/c，阳性率分别为1.1%、0.2%、0.2%。体外诱导分化实验表明目的细胞具有成脂、成骨分化潜能。结论 “切段外膜贴壁培养法”可成功分离培养出具有间充质干细胞特性的大鼠主动脉血管干细胞。
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  Adrb1-A187V突变短睡眠小鼠在不同饮食条件下的行为变化

  宋梓萍, 韩磊, 林卓超, 时广森

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 1887-1897.

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  目的 探究在限制性饮食和高脂饮食模式下，短睡眠Adrb1-A187V小鼠模型与其野生型小鼠行为活动的差异。方法 将短睡眠基因小鼠分为常规饮食组、气味保留禁食组、完全禁食组、高脂饮食组。常规饮食组：小鼠代谢与行为监测系统中，Adrb1^+/+小鼠25只和Adrb1^+/m小鼠26只。气味保留禁食组：小鼠代谢与行为监测系统中，Adrb1^+/+小鼠17只，Adrb1^+/m小鼠19只；EEG/EMG睡眠活动监测系统中，Adrb1^+/+小鼠6只，Adrb1^+/m小鼠6只。完全禁食组：小鼠代谢与行为监测系统中，Adrb1^+/+小鼠6只，Adrb1^+/m小鼠4～5只；EEG/EMG睡眠活动监测系统中，Adrb1^+/+小鼠6只，Adrb1^+/m小鼠6只。高脂饮食组：小鼠代谢与行为监测系统中，Adrb1^+/+小鼠6只，Adrb1^+/m小鼠7只；EEG/EMG睡眠活动监测系统中，Adrb1^+/+小鼠6只，Adrb1^+/m小鼠6只。在两组小鼠颅骨上植入脑电/肌电电极，通过给予小鼠24 h气味保留禁食实验、完全禁食实验以及高脂饮食实验，检测其在不同进食模式下，小鼠如何改变行为活动以适应饮食环境的变化。结果 在气味保留禁食实验中，Adrb1^+/m小鼠表现出更加稳定的运动水平的波动，活动相对较少（P<0.05），睡眠时间更长（P<0.01,P<0.05），有利于适应饥饿环境，具有更耐饿的特性；完全禁食实验中，Adrb1^+/m小鼠的夜间进水量更多（P<0.05），进水的生物节律性更好，表现出在进水方面出现的“少食多餐”。同时，非快速动眼睡眠（NREM）时长增加（P<0.01），可以帮助小鼠抵抗饥饿。高脂饮食实验中，Adrb1^+/m小鼠表现出更高的运动水平，表现为夜间站立次数和运动距离水平更高（P<0.0001），且快速动眼睡眠（REM）在白天增加（P<0.01）。结论 Adrb1-A187V突变小鼠可更快速对环境变化做出反应，在限制性饮食条件中，通过增加睡眠减少能量消耗以维持能量稳态；在高脂饮食条件中，则保持更高的运动水平，与限制性饮食条件相反。
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  LINC00467高表达通过抑制AMPK/mTOR通路抑制细胞自噬促进肺腺癌细胞的增殖和转移

  李泳华, 奚欣然, 张萌, 吴勋, 汪向海

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 1898-1909.

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  目的 探讨LINC00467对肺腺癌增殖和转移的影响及参与细胞自噬的机制。方法 体外培养人支气管上皮细胞16HBE和人肺腺癌细胞A549和H1299,A549和H1299细胞经慢病毒shlinc00467和shNC感染、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）和AMPK抑制剂BML-275处理。分别设置shNC组、shlinc00467组、shNC+3-MA组、shlinc00467+3-MA组、shNC+BML-275组和shlinc00467+BML-275组。实时荧光定量PCR检测细胞中LINC00467的表达，TCGA数据分析组织中LINC00467的表达以及对肺腺癌患者生存率和临床分期的影响，克隆形成实验检测细胞增殖情况，Transwell实验测定细胞迁移和侵袭能力，免疫荧光染色检测LC3的表达，Western blotting检测蛋白表达，GSEA富集分析LINC00467与自噬通路的相关性。结果 与16HBE细胞相比，LINC00467在A549和H1299细胞中表达增加（P<0.001）。与癌旁组织相比，肺腺癌组织中LINC00467高表达（P<0.001）且随着临床分期增加表达量增加（P<0.05）,LINC00467高表达导致患者不良的总体生存率（OS,P=0.049）和第一阶段进展率（FP,P=0.026）。与shNC组相比，shlinc00467感染的A549和H1299细胞中LINC00467表达降低（P<0.001）。与shNC组相比，shlinc00467导致A549和H1299细胞克隆形成数（P<0.01）、迁移细胞数（P<0.001）、侵袭细胞数（P<0.001）减少、p-mTOR/mTOR(P<0.05)及p62(P<0.01)蛋白表达减少；p-AMPK/AMPK(P<0.05)和LC3II/I(P<0.05)增加；GSEA提示了LINC00467对自噬通路的抑制作用（|NES|>1,P<0.05,FDR<0.25）。结论 LINC00467能促进肺腺癌细胞增殖和转移，可能是通过抑制AMPK/mTOR信号通路介导的自噬实现的。
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  Nlrp6过表达通过调控AMPK-Srebp1c轴抑制脂质合成抑制肝癌细胞的增殖

  黄萃园, 孙运平, 李文强, 刘丽, 王伟, 张静

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 1910-1917.

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  目的 探讨Nlrp6通过调控脂质合成抑制肝细胞癌（HCC）进展的作用及其机制。方法 通过分析癌症基因组图谱（TCGA）数据库中的RNA-seq数据和临床信息，评估Nlrp6在不同病理分级的HCC组织中的表达变化，并进行Kaplan-Meier生存分析及相关性分析。将腺病毒转染HepG2细胞过表达或敲低Nlrp6，使用棕榈酸（PA）构建肝脂肪变性模型。油红O染色评估Nlrp6对肝癌细胞HepG2脂质沉积的影响，CCK-8、Edu染色及克隆形成实验探讨Nlrp6对HepG2细胞增殖的影响，实时荧光定量PCR检测脂质合成相关基因的表达，Western blotting检测AMPK-Srebp1c轴相关蛋白的表达水平。使用肝脏特异性敲除Nlrp6小鼠，进行高脂饮食喂养24周，构建动物肝脂肪变性模型。取小鼠肝脏进行组织学染色，检测纤维化及肝癌标志物相关基因的表达，同时验证AMPK-Srebp1c信号通路的变化。结果 生信分析结果显示在HCC患者肝脏组织中，Nlrp6的表达显著降低，且随着病理分级增加而进一步降低，同时Nlrp6的表达与患者生存期显著相关（P<0.0001）。细胞实验结果显示，Nlrp6过表达抑制了HepG2细胞的脂质沉积和细胞增殖，而Nlrp6敲低则产生相反效果（P<0.05）。q-PCR结果显示，Nlrp6可抑制脂质合成相关基因的表达（P<0.05）,Western blotting结果表明过表达Nlrp6可促进AMPK的磷酸化，抑制调控脂质合成的转录因子Srebp1c的表达（P<0.05）。而Nlrp6敲低则抑制AMPK的磷酸化，促进Srebp1c的活化（P<0.05）。动物组织病理学染色结果表明，肝脏特异性敲除Nlrp6会促进肝脂肪变性及胶原沉积，q-PCR检测纤维化基因与染色结果一致（P<0.05），而肝癌标志物AFP的表达水平明显上升（P=0.06）。肝脏组织样本Western blotting结果证实Nlrp6的缺失会抑制AMPK的磷酸化，上调Srebp1c的表达（P<0.05）。结论 Nlrp6通过AMPK-Srebp1c轴抑制脂质合成，其可能是抑制肝癌细胞增殖的重要途径之一，进而改善HCC的进展。
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  中药泽漆抑制非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭、迁移以及促进细胞凋亡

  刘雪柔, 杨玉梅, 刘伟, 张振, 周星琦, 谢文宇, 申林, 张梦晓, 李娴, 臧家兰, 李姗姗

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 1918-1925.

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  目的 探究中药泽漆对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞PC-9和A549细胞的作用。方法 PC-9细胞和A549细胞体外培养，采用不同浓度泽漆作用于PC-9细胞（0、0.4、0.8、1.2 mg/mL）和A549细胞（0、0.8、1.2、1.6 mg/mL）,CCK-8法和集落克隆实验检测泽漆对NSCLC细胞增殖的影响；流式细胞实验检测泽漆对NSCLC细胞凋亡的影响；划痕实验和Transwell实验检测泽漆对NSCLC细胞侵袭迁移的作用；Western blotting实验检测泽漆对NSCLC细胞凋亡和侵袭迁移相关蛋白Bax、Bcl-2、E-cadherin、vimentin、MMP2、MMP9表达的影响；将PC-9细胞注射到BALB/C裸鼠皮下，建立裸鼠皮下瘤动物模型，根据皮下瘤生长情况，小鼠被随机分为对照组：每日灌胃生理盐水；泽漆处理组：每日灌胃泽漆65 mg/mL，泽漆颗粒剂用生理盐水溶解；顺铂治疗组：每5 d腹腔注射顺铂4 mg/kg，每组6只小鼠，测量小鼠皮下肿瘤体积及质量变化，观察泽漆对荷瘤小鼠心、肝、脾、肺、肾的毒副作用以及治疗作用。结果 CCK-8和集落克隆实验结果显示泽漆呈浓度依赖性抑制PC-9和A549细胞增殖和存活（P<0.01）；流式细胞实验结果显示泽漆诱导细胞凋亡（P<0.05）；划痕实验和Transwell实验结果显示泽漆能够抑制NSCLC的侵袭迁移能力（P<0.05）;Western blotting实验结果显示泽漆处理后上调E-Cadherin、Bax蛋白表达水平，下调Bcl-2、vimentin、MMP2、MMP9蛋白表达水平（P<0.05）；动物实验结果显示：与对照组相比，泽漆能够抑制小鼠NSCLC皮下瘤的生长，并观察到对小鼠脏器没有产生明显毒性。结论 泽漆能够抑制NSCLC细胞增殖和侵袭迁移，诱导细胞发生凋亡。
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  IL-21和CCL19修饰可提高NKP30 CAR-T细胞对肺癌的杀伤效率并促进其肿瘤浸润

  周智锋, 柳硕岩, 李洁羽, 陈明秋, 林辉, 陈宇杰, 陈伟杰, 林军鹏, 周航, 郑庆丰

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 1926-1936.

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  目的 探讨细胞因子IL-21和趋化因子CCL19修饰的NKP30 CAR-T细胞是否增强对肺癌的杀伤和浸润作用。方法 在NKP30 CAR基础上融合基因IL-21和CCL19构建IL-21-CCL19 NKP30 CAR;CAR-T细胞的培养使用CD3CD28单抗及细胞因子IL-2刺激；流式细胞术检测免疫细胞表型；迁移实验检测IL-21对免疫细胞的迁移作用；乳酸脱氢酶（LDH）及成球实验检测CAR-T细胞的杀伤及浸润能力；酶联免疫斑点技术（ELISPOT）检测IFN-γ的分泌数量；ELISA检测IL-21及CCL19的分泌情况；体内实验中，将肿瘤细胞显微注射到斑马鱼卵黄囊，构建斑马鱼移植瘤模型，24 h后将免疫细胞注射至同样部位，体式荧光显微镜拍摄荧光。结果 NKP30配体（B7H6）在正常组织及血液细胞不表达，在肺癌细胞上高表达（90%以上）。IL-21-CCL19 NKP30CAR-T细胞与NKP30 CAR-T细胞和常规T细胞相比，具有更强的增殖能力、迁移能力及中心记忆T细胞的形成（P<0.001），免疫抑制分子CTLA4与PD1显著降低（P<0.005），对肺癌细胞具有更强的杀伤能力（P<0.001），伴随IFN-γ数量明显增加（P<0.001）。IL-21-CCL19 CAR-T细胞杀伤肺癌细胞中产生大量细胞因子IL-21 (3152.33±526.74 pg/mL)和趋化因子CCL19(1853±211.95 pg/mL)。体内实验中，CAR-T细胞和普通T细胞比较，具有较强的杀伤能力和增殖能力，但2种CAR-T细胞无明显差异（P>0.05）。结论 IL-21-CCL19 NKP30 CAR-T细胞更容易浸润到肿瘤内部，有效杀伤肿瘤细胞，同时产生更多的记忆T细胞。
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  参芪调肾方减轻慢阻肺肺肾气虚证大鼠气道炎症的机制:基于铁死亡途径

  杨勤军, 王卉, 徐淑钰, 杨程, 丁焕章, 吴迪, 朱洁, 童佳兵, 李泽庚

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 1937-1946.

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  目的 基于核因子E2相关因子2（Nrf2）/溶质载体家族7成员11（SLC7A11）/谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）途径探讨参芪调肾方（SQTSF）调控铁死亡减轻COPD肺肾气虚证病证结合大鼠气道炎症的作用。方法 48只SD大鼠随机分为对照组（CON）、模型组（MOD）、SQTSF低、中、高剂量组（SQTSF-L、SQTSF-M、SQTSF-H）和氨茶碱组（APL）,n=8。除对照组外，其余大鼠构建COPD肺肾气虚证模型，并从第30天开始灌胃SQTSF和APL。观察各组大鼠的体质量、抓力变化、肺功能、肺组织病理、肺泡灌洗液（BALF）炎性因子、肺组织氧化应激水平、铁离子代谢情况、肺组织细胞和线粒体超微结构以及Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路和铁死亡相关基因和蛋白的表达。结果 与CON组比较，MOD组大鼠表现出皮毛枯黄脱落、对刺激反应迟钝，精神萎顿、嗜睡喜聚成堆闭目静卧等明显的气虚神疲表现；体质量和抓力明显下降（P<0.05）；第0.1秒用力呼气量(FEV_0.1)、用力肺活量（FVC）、FEV_0.1/FVC、Cdyn明显降低（P<0.05）；肺组织表现出明显的炎性浸润和肺气肿，支气管、血管周围和肺泡炎症评分、肺组织平均内衬间隔（MLI）、肺泡破坏指数（DI）明显上升，平均肺泡数（MAN）明显降低（P<0.05）;BALF中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-13明显上升（P<0.05）；肺组织ROS、MDA明显上升，GSH明显下降（P<0.05）；肺组织Fe²⁺和总铁离子明显上升（P<0.05）；透射电镜（TEM）观察发现MOD组大鼠肺组织细胞表现出线粒体外膜破裂，线粒体嵴消失等铁死亡特征性改变；肺组织Nrf2、GPX4、SLC7A11明显下降，酰基辅酶A合成酶长链家族成员4（ACSL4）明显上升（P<0.05）；与MOD组比较，SQTSF能明显改善各项指标的病理改变，且作用效果优于APL组（P<0.05）。结论 SQTSF能有效改善COPD肺肾气虚病证结合模型大鼠气道炎症和氧化应激，其机制可能与调控Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路抑制铁死亡有关。
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  顺铂诱导TNF-α自分泌引发头颈部鳞状癌细胞RIP1/RIP3/MLKL的坏死性凋亡

  汪虹晓, 陶德韬, 马俊杰, 张东林, 沈左媛, 邓超, 周静萍

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 1947-1954.

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  目的 探讨顺铂是否能够诱导头颈部鳞状癌细胞产生TNF-α，进而激活RIP1/RIP3/MLKL依赖性的坏死性凋亡通路，抑制鳞癌细胞的增殖，并探讨其分子机制。方法 选取头颈部鳞状癌细胞系HN4和SCC4作为实验对象，分为对照组、顺铂组、caspases抑制组、坏死性凋亡抑制组。利用CCK-8法检测顺铂刺激后24 h的细胞存活率。随后采用Western blotting检测caspase-8以及坏死性凋亡通路蛋白（RIP1/RIP3/MLKL）和NF-κB（p65）、TNF-α表达情况；结合细胞划痕实验和Western blotting检测上皮间充质转化相关蛋白（N-cadherin、Vimentin、E-cadherin）的表达情况，评估坏死性凋亡对头颈部鳞状癌细胞迁移能力的影响。结果 顺铂对HN4、SCC4细胞毒性IC₅₀分别约为10μg/m L、15μg/m L。在顺铂刺激下，与坏死性凋亡抑制剂组相比，caspase-8表达降低（P<0.05）,N-cadherin、Vimentin表达降低（P<0.05）、E-cadherin表达升高（P<0.05），坏死性凋亡通路蛋白（RIP1/RIP3/MLKL）表达升高（P<0.05）,TNF-α和NF-κB（p65）蛋白表达均升高（P<0.05）。在顺铂组中，细胞愈合率显著降低于对照组和坏死性凋亡抑制剂组。结论 顺铂作用可激活头颈部鳞状癌细胞NF-κB信号通路，并促进TNF-α自分泌，从而引发鳞癌细胞经由RIP1/RIP3/MLKL通路依赖性的坏死性凋亡反应，并抑制肿瘤细胞性增殖。
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  激活ALDH2通过上调SIRT1/PGC-1α信号通路减轻小鼠缺氧性肺动脉高压

  王磊, 卞芬兰, 马飞扬, 方舒, 凌梓涵, 刘梦然, 孙红燕, 付程文, 倪诗垚, 赵晓阳, 冯心茹, 孙正宇, 卢国庆, 康品方, 吴士礼

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 1955-1964.

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  目的 探讨激活线粒体乙醛脱氢酶2（ALDH2）是否可以通过SIRT1/PGC-1α信号通路减轻缺氧性肺动脉高压。方法 在体水平：选取8周龄C57 BL/6小鼠40只，随机分成Control组、Hypoxia组、Hypoxia+Alda-1灌胃组及ALDH2特异性敲除组(Hypoxia+ALDH2^-/-)，10只/组，Hypoxia组小鼠暴露于缺氧条件下（10%O₂,90%N₂），维持每日12 h/12 h的暗/光循环4周，Hypoxia+Alda-1组同时予以Alda-1腹腔注射处理4周，Control组予以常氧环境并给与同等量的溶剂（DMSO+PBS）干预4周。利用超声心动图、右心室导管实验评估右心功能及压力，以右心室压代替肺动脉压；HE评估肺血管重构及右心室损伤情况，免疫荧光检测α-SMA表达，评估肺远端小动脉肌化情况，WGA染色检测右心室横截面积，评估心肌细胞肥大程度，测量右心肥厚指数。检测ALDH2、SIRT1、PGC-1α、P16^INK4A、P21^CIP1蛋白表达。体外水平：分别设置Control组、Hypoxia组上、Hypoxia+Alda-1组上、Hypoxia+Alda-1+EX527组。利用β半乳糖染色评估各分组小鼠肺动脉平滑肌细胞衰老情况，Western blotting评估各分组蛋白表达情况。结果 与Control组相比，Hypoxia组右心室收缩压（RVSP）增高、右室游离壁厚度（RVFWT）增厚、P16^INK4A、P21^CIP1表达增加（P<0.05）。与Hypoxia组相比，Hypoxia+Alda-1组RVSP降低、RVFWT变薄、P16^INK4A、P21^CIP1表达降低（P<0.05）。与Hypoxia组相比，Hypoxia+ALDH2^-/-组RVSP增高、RVFWT增厚、P16^INK4A、P21^CIP1蛋白表达增加（P<0.01）。与Control组相比，Hypoxia组细胞衰老比例增加、P16^INK4A、P21^CIP1表达增加（P<0.01）。与Hypoxia组相比，Hypoxia+Alda-1组细胞衰老比例降低（P<0.01）,P16^INK4A、P21^CIP1（P<0.05）表达降低。与Hypoxia+Alda-1组相比，Hypoxia+Alda-1+EX527组细胞衰老比例增加（P<0.01）,P16^INK4A、P21^CIP1表达增高（P<0.05）。结论 ALDH2通过调控SIRT1/PGC-1α信号通路，减轻小鼠肺动脉平滑肌细胞衰老，从而减轻缺氧型肺动脉高压。
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  阿美替尼联合安罗替尼通过下调PI3K/AKT通路抑制非小细胞肺癌细胞的增殖

  杨玉梅, 刘雪柔, 刘伟, 周星琦, 张振, 胡妍, 刘培培, 李娴, 刘浩, 李姗姗

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 1965-1975.

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  目的 探究阿美替尼联合安罗替尼抑制非小细胞肺癌的作用。方法 CCK-8法、集落克隆法和流式细胞术检测不同浓度阿美替尼和安罗替尼对PC-9细胞和HCC827细胞增殖、细胞存活和细胞凋亡的影响；Synergy Finder模型评价阿美替尼与安罗替尼的协同作用；Transwell小室实验检测阿美替尼联合安罗替尼对PC-9细胞和HCC827细胞侵袭及迁移的作用；Western blotting实验检测阿美替尼联合安罗替尼对PC-9细胞和HCC827细胞凋亡和侵袭迁移相关蛋白Bax、Bcl-2、E-Cadherin、Vimentin、MMP2和MMP9及PI3K-Akt通路关键蛋白表达的影响。结果 阿美替尼作用于PC-9细胞的IC₅₀为1.701μmol/L，安罗替尼作用于PC-9细胞的IC₅₀=4.979μmol/L，协同得分（ZIP）为19.112；阿美替尼对HCC827细胞IC₅₀=2.961μmol/L，安罗替尼对HCC827细胞IC₅₀=7.934μmol/L，协同得分（ZIP）为12.325，阿美替尼联合安罗替尼能够显著抑制PC-9细胞和HCC827细胞增殖（P<0.05）。相比于单药组，集落克隆结果表明阿美替尼联合安罗替尼能够显著抑制PC-9细胞和HCC827细胞存活（P<0.01）；流式细胞术结果表明，阿美替尼联合安罗替尼能够促进PC-9细胞和HCC827细胞发生凋亡（P<0.05）;Transwell实验结果表明，阿美替尼联合安罗替尼能够显著抑制PC-9细胞和HCC827细胞的侵袭迁移能力（P<0.01）;Western blotting实验结果表明，阿美替尼联合安罗替尼能够显著促进PC-9细胞和HCC827细胞中E-Cadherin和Bax蛋白的表达，抑制Bcl-2、Vimentin、MMP2和MMP9蛋白的表达（P<0.01），同时显著降低了PI3K-Akt通路中关键蛋白PI3K、Akt的磷酸化蛋白水平（P<0.01）。结论 阿美替尼联合安罗替尼通过下调PI3K-Akt通路抑制NSCLC肿瘤细胞，这种联合治疗方式可能成为临床上治疗NSCLC患者的一种潜在治疗策略。
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  分泌型PD-1抗体可提高c-Met CAR-T细胞对胰腺癌细胞的杀伤作用

  闵静婷, 彭上, 杜娜娜, 安然, 甄翔程, 曹佳威, 周陈航, 李正红

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 1976-1984.

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  目的 设计并制备能够分泌PD-1抗体和靶向c-Met的CAR-T细胞，以消除肿瘤对CAR-T细胞的免疫抑制作用，从而提高CAR-T细胞对胰腺癌的治疗效果。方法 采用Kaplan-Meier Plotter、GEPIA和Timer2.0生物信息学数据库，分析c-Met在胰腺癌中的表达、生存期及免疫浸润。免疫组化检测胰腺癌临床样本c-Met和PD-L1表达，流式细胞术验证胰腺癌细胞Aspc-1 c-Met和PD-L1表达通过基因编辑将PD-1分泌型抗体和HIS标签连接至2代c-Met CAR分子后，构建PD-1/c-Met CAR质粒并包被慢病毒，慢病毒感染至活化T细胞内，通过流式细胞技术检测CAR-T阳性率和细胞亚群；Western blotting检测分泌型PD-1抗体在细胞上清液中的存在；体外功能试验中，通过LDH释放实验检测CAR-T对靶细胞的杀伤效率，CCK-8检测靶细胞存在下PD-1抗体对CAR-T增殖的促进作用。ELISA检测PD-1/c-Met CAR-T和c-Met CAR-T活化后细胞因子的分泌量。结果 生信分析结果显示，胰腺癌组织c-Met表达高于正常组织（P<0.01）;c-Met表达水平与胰腺癌患者生存期呈负相关（P<0.01）。c-Met的表达可能与多种免疫细胞浸润成正相关。免疫组化结果显示，胰腺癌c-Met和PD-L1表达均高于癌旁组织（P<0.01）；流式细胞术结果显示，Aspc-1细胞c-Met和PD-L1表达量为90.7%和57.7%，琼脂糖凝胶电泳显示成功制备四代PD-1/c-Met CAR分子；流式细胞术和Western blotting显示，成功构建PD-1/c-Met CAR-T且PD-1抗体可顺利分泌。体外功能验证中LDH结果显示，PD-1/c-Met CART对肿瘤细胞杀伤效率在效靶比为20:1时高于c-Met CAR-T(P<0.01);CCK-8实验结果显示，靶细胞刺激72 h后增殖效率高于c-Met CAR-T(P<0.01); ELISA结果显示，PD-1/c-Met CAR-T分泌的细胞因子IL-2和TNF-α高于c-Met CAR-T(P<0.01)。结论 PD-1抗体分泌型c-Met CAR-T可成功构建，并在体外胰腺癌细胞上显示出优于c-Met CAR-T肿瘤杀伤效率和增殖效率。
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  基于特征化定量心电图策略分析小鼠心脏电生理固有稳态制式

  成思怡, 陈泽锐, 于长江, 孙图成, 朱烁基, 刘南波, 朱平

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 1985-1994.

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  目的 高分辨定量剖析生理状态下小鼠心脏电生理本底稳态属性。方法 随机选取成年C57BL/6小鼠22只（雌雄1∶1），采用无麻醉法固定小鼠四肢，自主呼吸下通过灵敏十二导联电生理采集器(ECG_sqa)记录心电波形，包括小鼠特征性P波、R波及ST波，应用LabScribe软件读取与量化心前区V3导联上单一心动周期内高分辨时程参数与振幅参数，使用独立样本t检验比较组间差异，联合皮尔逊相关检验与简单线性回归绘制雌雄心电参数拟合散点图，按相关性强弱区分共享与独特关联对参数，从而揭示定量关联网络概貌。结果 ECG_sqa分析共识别与量化14个特征型心电参数，28.6%的组间差异具有统计学意义。与雄组相比，雌组R波与ST波的振幅与速率均更高（P<0.05）。在初级关联分析所鉴定的51个关联对中，关联阳性群占比为47.1%，其中涵盖雌雄共有（29.2%）、雄特有（29.2%）与雌特有（41.7%）三大关联组。关联对二阶聚类分析发现，雌雄心脏各波形电压的振幅-速率关联对处于普遍稳定强相关水平（P<0.01），而雄组心电特征展现出房-室互联模式，以及雌组心电特征展现独特心房电导系统质量依赖模式。关联群组分布网络特征显示，雌雄各自特有关联参数与共有关联参数之间具有一定程度串联模式。结论本研究聚焦雌雄小鼠天然心脏电信号的可被精确识别的数理特征，发现心电波重要特征参数的内在关联网络，揭示心房与心室电传导系统内部联结特征及其性别差异性，可为心血管生理与病理的纵深机制探索提供潜在适用的电稳态制式参照。
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  通塞颗粒阻抑巨噬细胞炎症反应改善大鼠慢性阻塞性肺疾病急性加重

  程蒙蒙, 刘新光, 魏焱鑫, 邢小香, 刘览, 辛楠, 赵鹏

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 1995-2003.

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  目的 探讨通塞颗粒（TSG）阻抑巨噬细胞炎症反应改善慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）大鼠的作用机制。方法24只SD大鼠随机分为对照（Control）组、模型（Model）组、TSG组和莫西沙星+沙丁胺醇（MXF+STL）组，6只/组。第1～8周建立慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠模型，第9周第3天，经鼻滴入肺炎克雷伯杆菌建立AECOPD大鼠模型。第9周的第1～2天和第4～7天，Control组和Model组给予生理盐水灌胃，TSG组和MXF+STL组分别给予TSG和MXF+STL灌胃，灌胃结束后处死大鼠。HE染色观察大鼠肺组织病理变化；检测肺组织白细胞介素IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子TNF-α、基质金属蛋白酶MMP2和MMP9表达。采用脂多糖（LPS）刺激巨噬细胞MH-S，给予TSG含药血清及其代表成分干预，检测IL-1β、IL-6、TNF-α、环氧化酶COX-2及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA水平，磷酸化P38(p-p38)、p-p62、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)、Forkhead box O3(FoxO3a)及p-mTOR蛋白水平。结果 TSG显著改善AECOPD大鼠肺组织损伤与肺功能，包括降低支气管壁厚度、肺泡平均线性截距及上调平均肺泡数（P<0.05）;TSG明显抑制AECOPD大鼠肺组织炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α及基质金属蛋白酶MMP2和MMP9表达水平（P<0.01）。TSG显著抑制脂多糖诱导的巨噬细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α及相关代谢酶COX-2、iNOS的表达（P<0.05）。血清药物化学联合网络药理鉴定了TSG含药血清10种化学成分，其对应466个靶点核心功能分析显示，TSG干预AECOPD可能与其主要成分木犀草素、槲皮素、贝母辛、贝母乙素等调控MAPK、mTOR、FoxO、自噬等有关。体外实验显示，木犀草素可以显著抑制LPS诱导巨噬细胞炎症反应及相关信号如p-p38，调控自噬相关信号FoxO3a、mTOR，以及抑制自噬相关蛋白p-p62、LC3的表达（P<0.05）。结论 TSG抑制巨噬细胞炎症反应缓解AECOPD，其机制可能与调控p38、mTOR、FoxO3a信号及抑制自噬有关。
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  多参数多区域MRI影像组学特征与临床信息联合模型可有效预测脑胶质瘤患者生存期

  黄晓茵, 陈凤莲, 张煜, 梁淑君

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 2004-2014.

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  目的 探讨脑胶质瘤患者肿瘤亚区影像组学特征，评估其对患者生存期的预后价值。方法 对388例胶质瘤患者的术前MRI多序列影像和临床数据进行回顾性分析，从瘤周水肿区域、肿瘤核心区以及全肿瘤区域提取T1、T2、T1加权对比增强（T1CE）、液体衰减反转恢复（FLAIR）序列的影像组学特征。将病例按照7∶3分为训练集（271例）和测试集（117例）。利用随机生存森林算法在训练集中筛选与总生存期相关的影像组学特征，并构建影像组学评分（Rad-score）。根据Rad-score将患者分为高、低风险组，使用Kaplan-Meier分析两组生存差异。建立瘤周水肿区、肿瘤核心区和全肿瘤区域的Cox比例风险回归模型，并通过五折交叉验证及受试者工作特征曲线下面积评估模型1年、3年生存率的预测效能，采用10例胶质瘤患者作外部验证。选择表现最优的模型进行生存期预测情况的列线图分析。结果 肿瘤核心区、瘤周水肿区和全肿瘤区域分别筛选出的影像组学特征数量分别为5、7、5，根据Rad-score，两风险组在训练集和测试集的总生存期存在差异（P<0.05）。单因素和多因素Cox分析显示，年龄、异柠檬酸脱氢酶状态和Rad-score是总生存期的独立影响因素。联合模型在训练集和测试集中的AUC表现优于单一Rad-score模型，其中全肿瘤模型的1年、3年生存率预测AUC分别为0.750、0.778（训练集），0.764、0.800（测试集）和0.938、0.917（外部验证集）。结论 基于术前多模态MRI影像组学特征与临床信息联合构建的预测模型能有效预测胶质瘤患者的生存期。
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  异功散通过调控脑水液代谢改善APP/PS1转基因小鼠的学习记忆能力

  曾静, 花雷, 阳勇, 张小梅, 魏江平, 李利生

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 2015-2023.

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  目的 观察异功散对APP/PS1小鼠学习记忆能力的影响，并从调控脑水液代谢系统探讨异功散抗痴呆的作用机制。方法 将3月龄雄性APP/PS1转基因小鼠及同龄同背景野生型C57BL/6小鼠随机分为4组（8只/组）：对照组、模型组、多奈哌齐（1.67 mg/kg）组、异功散（7.5 g/kg）组。灌胃给予各组对应药物1次/d,1月后采用Morris水迷宫实验考察小鼠的学习记忆能力；HE染色观察海马皮层组织病理形态学变化；免疫组化染色、硫磺素S染色观察脑内淀粉样蛋白斑块数量变化；ELISA法检测脑组织和血清Aβ_1-40和Aβ_1-42含量；伊文思蓝法检测血脑屏障（BBB）通透性变化；免疫荧光共定位考察AQP4在星型胶质细胞上极化情况；Western blotting观察血管内皮钙黏蛋白（VE-cadherin）、闭锁连接蛋白1（ZO-1）、闭合蛋白（Occludin）、β-淀粉样前体蛋白（APP）、β-分泌酶（BACE1）、胰岛素降解酶（IDE）、低密度脂蛋白受体相关蛋白1（LRP1）、晚期糖基化终末产物受体（RAGE）、水通道蛋白4 （AQP4）蛋白表达情况。结果 与对照组比较，APP/PS1小鼠第5天的逃避潜伏期显著延长（P<0.001），平台象限停留时间降低（P<0.05）；海马和皮层神经细胞变性或坏死细胞数量增加且病理评分升高（P<0.001）;Aβ阳性斑块明显升高以及硫磺素S荧光强度明显增强（P<0.05）；脑组织和血清Aβ_1-40、Aβ_1-42含量升高（P<0.05）;BBB通透性增加（P<0.01）,RAGE蛋白表达上调（P<0.01）而VE-cadherin、LRP1、ZO-1、Occludin、AQP4蛋白表达下调（P<0.05），且AQP4在GFAP阳性细胞上表达的数量减少（P<0.05）。与模型组比较，异功散组小鼠第5天的逃避潜伏期缩短（P<0.001），平台象限停留时间增加（P<0.05）且平均游泳速度加快（P>0.05）；海马和皮层神经细胞变性或坏死细胞数量减少且病理评分降低（P<0.01）;Aβ阳性斑块减少以及硫磺素S荧光强度减弱（P<0.05）；脑组织和血清Aβ_1-40、Aβ_1-42含量降低（P<0.05）；维持了BBB通透性（P<0.01）,RAGE蛋白表达下调（P<0.05），而VE-cadherin、LRP1、ZO-1、Occludin、AQP4蛋白表达上调（P<0.05），且AQP4在GFAP阳性细胞上表达的数量明显增加（P<0.01）。结论 异功散能够通过改善APP/PS1小鼠脑内神经细胞损伤、Aβ病变，调控脑水液代谢系统相关蛋白表达而改善学习记忆变化。
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  高原低氧暴露导致小鼠脾脏组织脂代谢发生紊乱的分子机制

  崔成玲, 许玉珍, 唐超群, 蒋佳颖, 胡英, 双杰

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 2024-2032.

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  目的 探究高原低氧致使小鼠脾脏组织脂代谢发生紊乱的分子机制。方法 本研究以C57BL/6雄性小鼠脾脏组织为对象，随机分为两组，5只/组：平原常氧组（PSC组），饲养于海拔400 m；高原低氧组（HST组），饲养于海拔4200 m，构建30 d的低氧动物模型。通过脂质组学分析脂类代谢产物的变化，采用液相色谱-质谱联用（LC-MS）技术对脾脏组织进行代谢组学分析，筛选差异代谢物，并对其进行KEGG富集注释分析和KEGG通路分析，进一步通过转录组测序筛选出差异基因。最后，运用生物信息学分析将代谢组学和转录组学联合，重点关注了类固醇激素的生物合成、花生四烯酸代谢和嘌呤代谢通路中差异代谢物的上游靶基因。通过RT-qPCR检测11β-羟化类固醇脱氢酶1(HSD11B1)、类固醇5α还原酶1(SRD5A1)、前列腺素-内过氧化物合酶1(PTGS1)、造血前列腺素D合成酶（HPGDS）、黄嘌呤脱氢酶（XDH）、嘌呤核苷磷酸化酶（PNP）、次黄嘌呤鸟嘌呤-磷酸核糖基转移酶（HPRT）、胞外5′-核苷酸酶（NT5E）的mRNA的表达量，通过Western blotting检测HSD11B1、SRD5A1、XDH、PNP、HPRT的蛋白表达量。结果 脂质组学富集到41种差异脂类代谢物，通过代谢组学和转录组学联合分析，发现差异代谢物和差异基因显著富集于类固醇激素的生物合成、花生四烯酸代谢和嘌呤代谢。与平原常氧组相比，高原低氧组的差异代谢物肾上腺甾酮、雄甾酮、前列腺素D2、前列腺素J2、黄嘌呤、黄嘌呤碱、尿酸的表达量显著上调（P<0.05），且代谢物上游的关键基因HSD11B1、SRD5A1、PTGS1、HPGDS、XDH、PNP、HPRT、NT5E的mRNA表达量显著上调或下调（P<0.05），差异蛋白HSD11B1、SRD5A1、XDH、PNP、HPRT的表达量上调或下调（P<0.05）。结论 高原低氧通过影响类固醇激素的生物合成、花生四烯酸代谢、嘌呤代谢三条通路来致使小鼠脾脏组织脂代谢发生紊乱。
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  LncRNA MAGI2-AS3通过靶向调控miR-1269a/PTEN/AKT通路增强非小细胞肺癌对顺铂化疗的敏感性

  范喜瑞, 戚之琳, 邓园洁, 杨子晗, 孙丽, 李国豪, 梁娟娟, 吴菲, 袁力文

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 2033-2043.

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  目的 研究lncRNA MAGI2-AS3对非小细胞肺癌顺铂耐药的影响及其分子机制。方法 采用qRT-PCR检测MAGI2-AS3和miR-1269a在顺铂敏感细胞（A549,H1299）和顺铂耐药细胞（A549/DDP,H1299/DDP）中的表达差异。采用慢病毒敲低A549和H1299中的MAGI2-AS3的表达，过表达A549/DDP和H1299/DDP中的MAGI2-AS3并加入20μmol/L顺铂（DDP）处理。A549/DDP和H1299/DDP细胞实验分组为：OE-NC组，OE-MAGI2-AS3组，OE-NC+DDP组，OE-MAGI2-AS3+DDP组，A549和H1299细胞实验分组为：sh-NC组，sh-MAGI2-AS3组，sh-NC+DDP组，sh-MAGI2-AS3+DDP组。CCK-8和细胞克隆形成实验检测细胞存活率，流式细胞术和Western blotting分别检测细胞凋亡率和蛋白表达量，划痕实验和Transwell检测细胞EMT变化。通过网站GEPIA、StarBase和miRDB预测MAGI2-AS3、miR-1269a和PTEN之间的靶向关系，并采用荧光素酶报告基因实验和RIP实验验证。采用miR-1269a mimic和pcDNA3.1-PTEN进行Rescue实验。结果 MAGI2-AS3在肺癌组织中的表达显著低于正常癌旁组织（P<0.05）且与患者不良预后相关（P<0.05）。A549/DDP和H1299/DDP中的MAGI2-AS3表达量显著低于A549和H1299(P<0.01)。干扰MAGI2-AS3可以显著促进顺铂处理前、后A549和H1299细胞的存活及EMT进程（P<0.01），同时降低顺铂诱导的细胞凋亡（P<0.005）。过表达MAGI2-AS3可以显著抑制顺铂处理前、后A549/DDP和H1299/DDP细胞存活与EMT进程（P<0.01），同时提升顺铂诱导的细胞凋亡（P<0.005）。MAGI2-AS3与miR-1269a结合在一起，miR-1269a与PTEN 3'UTR结合。在A549/DDP细胞内MAGI2-AS3通过靶向吸附miR-1269a促进PTEN的表达并下调AKT磷酸化从而抑制顺铂刺激下细胞的EMT进程（P<0.01）、促进顺铂诱导的A549/DDP细胞凋亡（P<0.01）。结论 LncRNA MAGI2-AS3通过靶向调控miR-1269a/PTEN/AKT信号轴增强非小细胞肺癌对顺铂化疗的敏感性。
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  基于生成式投影插值的双域CBCT稀疏角度重建方法

  廖静怡, 彭声旺, 王永波, 边兆英

  南方医科大学学报. 2024, 44(10): 2044-2054.

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  目的 为了解决稀疏角度CBCT重建的图像伪影问题，本文提出了一种基于生成式投影插值的双域CBCT重建框架（DualSFR-Net）。方法 提出的DualSFR-Net方法主要包含3个模块：生成式投影插值模块、域转换模块和图像恢复模块。生成式投影插值模块包括一个基于生成对抗网络的稀疏投影插值网络（SPINet）和一个全角度投影恢复网络（FPRNet）。其中，SPINet针对稀疏角度投影数据进行投影插值合成全角度投影数据，FPRNet则是对合成全角度投影数据进一步修复。域转换模块引入重建和前投影算子实现双域网络的前向和梯度回传过程。图像恢复模块包含一个图像恢复网络FIRNet，对域转换后的图像进行微调以去除残留的伪影和噪声。结果 在牙科CT数据集上进行的验证实验结果显示，本研究提出的DualSFR-Net在稀疏采样协议下能够重建出高质量的CBCT图像；定量上，所提出DualSFR-Net方法在稀疏2倍和4倍协议下在PSNR指标上相对于现有同类最优方法分别提高了0.6615和0.7658，在SSIM指标上分别提高了0.0053和0.0134。结论 本研究提出的基于生成式投影插值的双域CBCT稀疏角度重建方法DualSFR-Net能够有效地去除条纹伪影，改善图像质量，成功实现了对CBCT稀疏角度双域成像网络的高效联合训练。