目的 设计并制备能够分泌PD-1抗体和靶向c-Met的CAR-T细胞，以消除肿瘤对CAR-T细胞的免疫抑制作用，从而提高CAR-T细胞对胰腺癌的治疗效果。方法 采用Kaplan-Meier Plotter、GEPIA和Timer2.0生物信息学数据库，分析c-Met在胰腺癌中的表达、生存期及免疫浸润。免疫组化检测胰腺癌临床样本c-Met和PD-L1表达，流式细胞术验证胰腺癌细胞Aspc-1 c-Met和PD-L1表达通过基因编辑将PD-1分泌型抗体和HIS标签连接至2代c-Met CAR分子后，构建PD-1/c-Met CAR质粒并包被慢病毒，慢病毒感染至活化T细胞内，通过流式细胞技术检测CAR-T阳性率和细胞亚群；Western blotting检测分泌型PD-1抗体在细胞上清液中的存在；体外功能试验中，通过LDH释放实验检测CAR-T对靶细胞的杀伤效率，CCK-8检测靶细胞存在下PD-1抗体对CAR-T增殖的促进作用。ELISA检测PD-1/c-Met CAR-T和c-Met CAR-T活化后细胞因子的分泌量。结果 生信分析结果显示，胰腺癌组织c-Met表达高于正常组织（P<0.01）;c-Met表达水平与胰腺癌患者生存期呈负相关（P<0.01）。c-Met的表达可能与多种免疫细胞浸润成正相关。免疫组化结果显示，胰腺癌c-Met和PD-L1表达均高于癌旁组织（P<0.01）；流式细胞术结果显示，Aspc-1细胞c-Met和PD-L1表达量为90.7%和57.7%，琼脂糖凝胶电泳显示成功制备四代PD-1/c-Met CAR分子；流式细胞术和Western blotting显示，成功构建PD-1/c-Met CAR-T且PD-1抗体可顺利分泌。体外功能验证中LDH结果显示，PD-1/c-Met CART对肿瘤细胞杀伤效率在效靶比为20:1时高于c-Met CAR-T(P<0.01);CCK-8实验结果显示，靶细胞刺激72 h后增殖效率高于c-Met CAR-T(P<0.01); ELISA结果显示，PD-1/c-Met CAR-T分泌的细胞因子IL-2和TNF-α高于c-Met CAR-T(P<0.01)。结论 PD-1抗体分泌型c-Met CAR-T可成功构建，并在体外胰腺癌细胞上显示出优于c-Met CAR-T肿瘤杀伤效率和增殖效率。